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申请/专利权人：吉林大学
申请日：2024-02-19
公开（公告）日：2024-05-17
公开（公告）号：CN118048441A
主分类号：C12Q1/686
分类号：C12Q1/686
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.06.04#实质审查的生效;2024.05.17#公开
摘要：本发明属于生物化学技术领域，具体涉及一种依赖于纳米金颗粒的可视化PCR方法，包括纳米金颗粒AuNPs的制备；球状核酸SNA的制备；分子信标MB设计及与SNA杂交配对的验证；阳性对照目标核酸检测的验证；空白对照的验证。本发明通过有检测核酸模板红色和无检测核酸模板紫色的颜色差异，可以判断检测的核酸是否存在，实现PCR可视化。本发明依赖于纳米金颗粒的可视化PCR方法，基于纳米金颗粒的可视化核酸检测，不需要对纳米金颗粒修饰特异性的针对不同靶标核酸的互补寡核苷酸链；不同于常规PCR的反应条件，本方法基本不需要延伸时间，检测时间更短，所需设备相对简单可实现现场便携式及检测结果可视化。
主权项：1.一种依赖于纳米金颗粒的可视化PCR方法，其特征在于，包括以下步骤：A、纳米金颗粒AuNPs的制备：将10％的氯金酸溶液与去离子水混合后于120℃油浴加热至沸腾时，迅速加入1％的柠檬酸钠溶液，继续搅拌加热20min，冷却至室温；B、球状核酸SNA的制备：将100μM的polyT与50mM的TECP孵育30min后，再加入AuNPs孵育10min，用正丁醇吸水后弃掉上清，沉淀用TBE缓冲液重悬，再与10mM的三甲基硅烷避光搅拌孵育24h；C、分子信标MB设计及与SNA杂交配对的验证：MB核苷酸序列为5'-AAAAAAAAAAAAAAAAAAAACGCAGCGGCCAAGAGAAGGTGAGGAGGGTGTGATGAGCTGCGAAAAAAAAAAAAAAAAAAAA-3'，取1μM的MB与SNA混合，95℃加热3min后，取出室温观察为紫色溶液；D、阳性对照目标核酸检测的验证：待检测目标核苷酸链的序列为5'-GACAGGCCCGAAGGAATAGAGGCCAAGAGAAGGTGAGGAGGGTGTGATGAAGACGAAGCACGAGAGAGAG-3'，将上述SNA与MB加入含有待测目标核苷酸链的PCR反应体系中，反应10min后，溶液为红色；E、空白对照的验证：将上述SNA与MB加入不含目标核苷酸链的PCR反应体系中，反应10min后，溶液依然为紫色。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 吉林大学 一种依赖于纳米金颗粒的可视化PCR方法
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