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申请/专利权人：武汉科技大学
申请日：2024-03-19
公开（公告）日：2024-05-17
公开（公告）号：CN118048449A
主分类号：C12Q1/6883
分类号：C12Q1/6883;C12Q1/683;C12Q1/686;C12N15/11
优先权：
专利状态码：在审-公开
法律状态：2024.05.17#公开
摘要：本发明公开了利用Forced‑PCR‑RFLP检测CREG1基因单核苷酸多态性的方法，首先根据DNA池测序结果，检测到的基因多态性位点为CREG1基因启动子区距转录起始点‑2697位G或A的单核苷酸多态性，然后根据序列特征设计引入酶切位点的引物对P，以待测样本基因组DNA为模板，在TaqDNA聚合酶、Buffer（缓冲环境）、Mg＋＋、dNTPs存在的情况下，PCR扩增包含多态位点的CREG1基因序列，然后将PCR产物用DpnII限制性内切酶进行消化，酶切产物通过琼脂糖凝胶电泳分型。本发明提供的检测方法为CREG1基因多态性与II型糖尿病关系的建立奠定了基础，CREG1基因的SNP位点可以作为分子诊断标记，用于II型糖尿病的临床检测。
主权项：1.利用Forced-PCR-RFLP检测CREG1基因单核苷酸多态性的方法，其特征在于：以糖尿病患者和正常人的血液基因组DNA为模板，在TaqDNA聚合酶、缓冲环境、Mg＋＋、dNTPs存在的情况下，利用引入酶切位点的引物对P进行PCR扩增，然后利用限制性内切酶对其进行酶切，再通过电泳检测即可准确鉴定待测样本的单核苷酸多态性；所述的引入酶切位点的引物对P为：上游引物P-F：5’-GGGCTGGAAGAGGCATCAGA-3’20nt下游引物P-R：5’-CAAAAGGAGGAAAATTGGGTTGAT-3’24nt引物P-R中碱基G为引入错配碱基；PCR扩增后，将PCR产物用限制性内切酶DpnII进行消化，再对酶切后的片段进行琼脂糖凝胶电泳，根据琼脂糖凝胶电泳结果鉴定CREG1基因第-2697位的碱基多态性。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 武汉科技大学 利用Forced-PCR-RFLP检测CREG1基因单核苷酸多态性的方法及其应用
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