申请/专利权人：华中农业大学

申请日：2022-05-13

公开（公告）日：2024-05-17

公开（公告）号：CN114959056B

主分类号：C12Q1/6888

分类号：C12Q1/6888;C12Q1/6879;C12Q1/6858;C12N15/11

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.17#授权;2022.09.16#实质审查的生效;2022.08.30#公开

摘要：本发明属于动物分子标记筛选领域。具体涉及一种鉴定雌性克氏原螯虾的SSR标记及其应用。本发明主要步骤为1分别提取雌、雄性克氏原螯虾基因组DNA。2对雌雄群体克氏原螯虾的DNA样本进行PCR检测，设计相关引物扩增目片段，通过琼脂糖电泳检测目的片段是否被扩增出。3利用PAGE胶电泳检测并进行统计分析。通过PAGE胶电泳后显影、读带，对雌雄克氏原螯虾群体间的带型进行统计分析。结果表明：检测到的雌性和雄性克氏原螯虾群体样本显示所有雌性或雄性样本在PCM1237位点含有A、B、C三种等位基因，雌性克氏原螯虾基因型为纯合型或杂合型，而雄性克氏原螯虾基因型仅为纯合型。即杂合型一定是雌性克氏原螯虾。

主权项：1.一种SSR标记在雌性克氏原螯虾鉴定中的应用，其特征在于，所述的应用包括下列步骤：1分别提取雌、雄性克氏原螯虾基因组DNA，每个性别样本至少提取150尾；2设计引物：根据克氏原螯虾基因组测序数据，利用Primer3软件设计正向引物PCM1237-F5'-CGCACACTTCTTCACCCTCT-3'和反向引物PCM1237-R5'-AGGAGTCTTTTAACATGAGAGATTTT-3'；3对雌、雄群体克氏原螯虾的DNA样本进行PCR检测：以正向引物PCM1237-F5'-CGCACACTTCTTCACCCTCT-3'，和反向引物PCM1237-R5'-AGGAGTCTTTTAACATGAGAGATTTT-3'扩增目的片段，利用琼脂糖电泳检测目的片段是否被扩增出；4利用聚丙烯酰胺凝胶电泳检测并进行统计分析：将扩增出的PCR产物用4%的聚丙烯酰胺凝胶进行电泳检测，电泳胶板用0.2%的硝酸银溶液进行染色，用含有0.5%甲醛溶液的0.5M氢氧化钠溶液进行显影、漂洗和晾干，对上述各个群体进行带型统计分析；5检测到雌性和雄性克氏原螯虾群体样本，显示所有雌性或雄性样本在PCM1237位点是否含有A、B、C三种等位基因，判定雌性克氏原螯虾基因型为纯合型或杂合型，判定雄性克氏原螯虾基因型仅为纯合型，判定杂合型为雌性克氏原螯虾；PCR条件：95°C预变性3min；95°C变性30s；58°C退火30s；72°C延伸30s；35次循环后；72°C再延伸7min；4°C保存。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 华中农业大学 一种鉴定雌性克氏原螯虾的SSR标记及其应用

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