申请/专利权人：南京普恩瑞生物科技有限公司

申请日：2024-03-15

公开（公告）日：2024-05-17

公开（公告）号：CN117899240B

主分类号：A61K49/00

分类号：A61K49/00;A01K67/0271;C12N5/0789;C12N5/0784

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.17#授权;2024.05.07#实质审查的生效;2024.04.19#公开

摘要：一种适用于mRNA肿瘤疫苗筛选的肿瘤移植模型及其构建方法和应用，包括（1）肿瘤活组织样本筛选；（2）数据质量控制；（3）肿瘤活组织的挑选、复苏及传代；（4）NSG小鼠的免疫系统重建；（5）HIS‑PDTX（HLA配型）建模；（6）小鼠模型中树突状细胞（DendriticCells，DCs）的引入，获得适用于mRNA肿瘤疫苗筛选的肿瘤移植模型。该模型构建方法不仅利用人源肿瘤活组织生物样本库提供足量的、符合药物作用机制要求的肿瘤活组织样本；此外，还利用人源肿瘤活组织数据库内的WES、RNA‑Seq数据筛选mRNA肿瘤疫苗的靶点。

主权项：1.一种适用于mRNA肿瘤疫苗筛选的肿瘤移植模型的构建方法，其特征在于，步骤为：（1）肿瘤活组织样本筛选：选择通过PDTX技术进行传代后可稳定扩增的活组织并保存在气相液氮存储罐中；（2）数据质量控制：记录PDTX建模获得的接种有肿瘤活组织的免疫缺陷型小鼠模型体内肿瘤组织体积变化及小鼠的体重变化，保留体重减轻不超过20%和肿瘤生长体积不超过2000mm3的小鼠数据；（3）肿瘤活组织的挑选、复苏及传代：在肿瘤活组织生物样本库中选取目标肿瘤活组织进行复苏，记录接种有目标肿瘤活组织的NSG小鼠模型内肿瘤组织体积变化及小鼠的体重变化，当肿瘤体积达到100mm3时，即表示肿瘤组织复苏成功；（4）NSG小鼠的免疫系统重建：获取具有与肿瘤活组织HLA分型相匹配的脐带血，将获取的脐带血用磷酸盐缓冲液按照1:3的体积比稀释脐带血，使用微珠试剂盒分离纯化得到CD34+HSCs细胞；使用三周龄的NSG小鼠，用功率为100cGymin的X射线照射3周龄NSG小鼠全身2.4min进行清髓，随后通过尾静脉注射5×105cellsmL的CD34+HSC细胞液，然后在尾静脉注射后的第4周开始每隔两周对NSG小鼠进行免疫学指标检测，当NSG小鼠血液中的hCD45+大于或等于25％，得到重建免疫系统的NSG小鼠模型；（5）HIS-PDTX建模：记录接种有复苏成功的肿瘤组织的重建免疫系统的NSG小鼠模型内肿瘤组织体积变化及小鼠的体重变化，当肿瘤体积达到100mm3时，即表示HIS-PDTX建模成功；（6）小鼠模型中树突状细胞DCs的引入：在体外的情况下，通过以下3种方式中的任一种获取DCs：1、通过磁珠在脐带血中分选DCs细胞；2、从脐带血中分选出单核细胞进而在IL-4和GM-CSF的刺激下分化为DCs；3、从脐带血中分选出CD34+造血前体干细胞进而在GM-CSF、IL-4、TNF-α、SCF、Flt3ligand的刺激下分化为DCs；随后将成熟的DCs通过尾静脉注射至HIS-PDTX的动物模型体内，获得适用于mRNA肿瘤疫苗筛选的肿瘤移植模型。

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