申请/专利权人：酵活英属哥伦比亚有限公司

申请日：2012-11-02

公开（公告）日：2024-05-17

公开（公告）号：CN109897103B

主分类号：C07K16/00

分类号：C07K16/00;C07K16/28;C07K16/32;C07K16/46

优先权：["20111104 US 61/556,090","20111108 US 61/557,262","20120510 US 61/645,547"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.17#授权;2023.12.15#著录事项变更;2023.02.03#著录事项变更;2019.07.12#实质审查的生效;2019.06.18#公开

摘要：本发明提供的支架具有在各个结构域例如CH2和CH3不对称的重链，来实现超越用天然同源二聚体对称Fc分子的参与调节效应功能的各种Fc受体之间的选择性，和所获得的变体Fc同源二聚体的增加的稳定性和纯度。这些新分子包含设计用于改变抗体起作用和其在治疗剂中找到用途的天然方式的异质组分的复合物。

主权项：1.一种分离的异源多聚体Fc构建体，其包含与野生型CH3结构域相比的修饰的异源二聚的CH3结构域，所述修饰的异源二聚的CH3结构域包含：第一修饰的CH3结构域多肽和第二修饰的CH3结构域多肽，其中在每一个第一和第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代，与同源二聚的CH3结构域相比，促进异源二聚的CH3结构域的形成；其中a在第一修饰的CH3结构域多肽中促进异源二聚的CH3结构域形成的氨基酸取代，由氨基酸取代T350V、氨基酸取代F405A、氨基酸取代Y407V和任选的氨基酸取代S400R组成，在第二修饰的CH3结构域多肽中促进异源二聚的CH3结构域形成的氨基酸取代由氨基酸取代T350V、氨基酸取代T366L、氨基酸取代K392M、氨基酸取代T394W和任选的氨基酸取代N390D或N390E组成，或b在第一修饰的CH3结构域多肽中促进异源二聚的CH3结构域形成的氨基酸取代，由氨基酸取代T350V、氨基酸取代F405A、氨基酸取代Y407V、氨基酸取代S400E和任选的氨基酸取代Q347R组成，并且在第二修饰的CH3结构域多肽中促进异源二聚的CH3结构域形成的氨基酸取代由氨基酸取代T350V、氨基酸取代T366L、氨基酸取代K392M、氨基酸取代T394W、氨基酸取代N390R和任选的氨基酸取代K360E组成，或c在第一修饰的CH3结构域多肽中促进异源二聚的CH3结构域形成的氨基酸由氨基酸取代T350V，氨基酸取代L351Y，氨基酸取代F405A、F405S、F405T或F405V、氨基酸取代Y407V和任选的氨基酸取代S400R组成，和第二修饰的CH3结构域多肽中促进异源二聚的CH3结构域形成的氨基酸取代由氨基酸取代T350V、氨基酸取代T366L、氨基酸取代K392L或K392M、氨基酸取代T394W和任选的氨基酸取代N390D或N390E组成，或d在第一修饰的CH3结构域多肽中促进异源二聚的CH3结构域形成的氨基酸取代，由氨基酸取代T350V、氨基酸取代L351Y、氨基酸取代F405A、F405S、F405T或F405V、氨基酸取代Y407V、氨基酸取代S400E和任选的氨基酸取代Q347R组成，并且在第二修饰的CH3结构域多肽中促进异源二聚的CH3结构域形成的氨基酸取代由氨基酸取代T350V、氨基酸取代T366L、氨基酸取代K392L或K392M、氨基酸取代T394W、氨基酸取代N390R和任选的氨基酸取代K360E组成；其中所述第一和第二修饰的CH3结构域多肽形成具有74℃至83℃之间的熔解温度Tm和至少95％的纯度的异源二聚的CH3结构域；其中所述异源多聚体Fc构建体基于人IgG1，且其中氨基酸的编号根据Kabat中所述的EU索引。

全文数据：在Fc结构域中具有突变的稳定异源二聚的抗体设计本申请为国际申请PCTCA2012050780进入中国国家阶段的中国专利申请申请号为201280057691.8，申请日为2012年11月2日，发明名称为“在Fc结构域中具有突变的稳定异源二聚的抗体设计”的分案申请。介绍相关申请的交叉引用本申请根据美国法典第35篇第119e条要求2011年11月4日提交的美国临时专利申请号61556,090；2011年11月8日提交的美国临时专利申请号61557,262；和2012年5月10日提交的美国临时专利申请号61645,547的权益，所述临时申请中的每一个都通过引用整体并入本文。发明领域本发明一般提供多肽异源二聚体、其组合物、以及制备和使用所述多肽异源二聚体的方法。更具体而言，本发明涉及热稳定的多特异性抗体，包括双特异性抗体，其包含异源二聚的Fc结构域。发明背景双特异性治疗剂是基于抗体的分子，其可以同时结合两个分离且不同的靶或相同抗原的不同表位。双特异性抗体由基于免疫球蛋白结构域的实体组成并且尝试结构上和功能上模拟抗体分子的组分。双特异性抗体的一个用途是重新引导细胞毒性免疫效应细胞，例如通过抗体依赖细胞毒性ADCC以增强对肿瘤细胞的杀伤。在这种背景下，双特异性抗体的一个臂结合肿瘤细胞上的抗原，而另一个臂结合效应细胞上表达的决定簇。通过交联肿瘤和效应细胞，所述双特异性抗体不仅在肿瘤细胞周围引入效应细胞，而且也同时引起其活化，造成有效杀死肿瘤细胞。双特异性抗体已经用于在肿瘤组织富集化学或放射治疗剂以最小化对正常组织的有害作用。这种情况下，双特异性抗体的一个臂与要破坏的靶向细胞上表达的抗原相结合，而另一个臂递送化疗药物、放射性同位素或毒素。超越双特异性，需要通过同时靶向多种形式达到其效力的蛋白治疗剂。此类复杂和新型生物效应可用蛋白治疗剂通过在蛋白中设计多靶结合和多功能方面而获得。提供架构以融合其他功能弹头war-head或靶蛋白结合结构域以便设计这些多功能性和多靶结合治疗剂的坚固支架。理想地，支架不仅提供架构而且向所设计的治疗剂提供多种其他治疗上相关且有价值的特征。通常开发基于抗体的双特异性和多功能性治疗剂的一个主要障碍是难于为临床前和临床研究生产足够质量和数量的材料。在本领域中仍然需要包含单一可变结构域作为连接至变体Fc区的蛋白结合结构域的多肽构建体，所述变体Fc包含CH3结构域，其已经进行修饰以选择具有增加稳定性和纯度的异源二聚体。发明概述根据本发明的一个方面，提供了分离的包含修饰的异源二聚的CH3结构域的异源二聚体Fc构建体，所述修饰的CH3结构域包含：与野生型CH3结构域多肽相比包含至少三个氨基酸修饰的第一修饰的CH3结构域多肽，和与野生型CH3结构域多肽相比包含至少三个氨基酸修饰的第二修饰的CH3结构域多肽；其中所述第一和第二CH3结构域多肽中的至少一个包含K392J的氨基酸修饰，其中J选自L、I或侧链体积基本上不大于K的侧链体积的氨基酸；其中所述第一和第二修饰的CH3结构域多肽优先形成具有至少约74℃的熔解温度Tm和至少95％的纯度的异源二聚的CH3结构域；并且其中至少一个氨基酸修饰不是在所述第一和所述第二CH3结构域多肽之间的接口处的氨基酸的修饰。在某些实施方案中是本文所述的异源二聚体Fc构建体，包含至少一个T350X修饰，其中X是选自缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、及其衍生物或变体的天然或非天然氨基酸。在一些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，包含至少一个T350V修饰。在实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述修饰的CH3结构域具有至少约75℃或更高的熔解温度Tm。在实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述修饰的CH3结构域具有约77℃或更高的Tm。在某些实施方案中，所述修饰的CH3结构域具有约80℃或更高的Tm。在某些实施方案中提供了本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中至少一个CH3结构域多肽是包含L351、F405和Y407中的至少一个的氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽。在一些实施方案中是分离的异源二聚体Fc构建体，其中至少一个CH3结构域多肽是进一步包含T366的氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽。在某些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中第一CH3结构域多肽是包含在位置L351、F405和Y407处的氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽，并且第二CH3结构域多肽是包含在位置T366、K392和T394处的氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽。在实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，所述第一CH3结构域多肽包含氨基酸修饰L351Y、F405A和Y407V，并且所述第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T366L、K392M和T394W。在一些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，所述第一CH3结构域多肽包含氨基酸修饰L351Y、F405A和Y407V，并且所述第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T366L、K392L和T394W。在另一实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，所述第一CH3结构域多肽包含氨基酸修饰L351Y、F405A和Y407V，并且所述第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T366I、K392M和T394W。在一些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，所述第一CH3结构域多肽包含氨基酸修饰L351Y、F405A和Y407V，并且所述第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T366I、K392L和T394W。在某些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述第一和第二CH3结构域多肽中的至少一个是包含在位置S400处的氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽。在另一实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，包含修饰S400Z，其中Z选自带正电的氨基酸和带负电的氨基酸。在一些实施方案中，带正电的氨基酸是赖氨酸或精氨酸并且带负电的氨基酸是天冬氨酸或谷氨酸。在某些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，所述第一CH3结构域多肽包含选自S400E和S400R的氨基酸修饰。在一些实施方案中提供了本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述第一和第二CH3结构域多肽中的至少一个是包含在位置N390处的氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽。在一些实施方案中，N390的修饰是N390Z，其中Z选自带正电的氨基酸和带负电的氨基酸。在实施方案中，N390Z是N390R。在本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体的某些实施方案中，所述第一CH3结构域多肽是包含氨基酸修饰S400E的修饰的CH3结构域多肽并且所述第二CH3结构域多肽是包含氨基酸修饰N390R的修饰的CH3结构域多肽。在本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体的一些实施方案中，第一和第二CH3结构域多肽中的每一个是修饰的CH3结构域多肽，一个所述修饰的CH3结构域多肽包含氨基酸修饰Q347R而另一个修饰的CH3结构域多肽包含氨基酸修饰K360E。一方面，提供了分离的包含修饰的异源二聚的CH3结构域的异源二聚体Fc构建体，所述修饰的CH3结构域包含：与野生型CH3结构域多肽相比包含至少三个氨基酸修饰的第一修饰的CH3结构域多肽，和与野生型CH3结构域多肽相比包含至少三个氨基酸修饰的第二修饰的CH3结构域多肽；其中所述第一和第二CH3结构域多肽中的至少一个包含K392J的氨基酸修饰，其中J选自L、I或侧链体积基本上不大于K的侧链体积的氨基酸；其中所述第一和第二修饰的CH3结构域多肽优先形成具有至少约74℃的熔解温度Tm和至少95％的纯度的异源二聚的CH3结构域；并且其中至少一个氨基酸修饰不是在所述第一和所述第二CH3结构域多肽之间的接口处的氨基酸的修饰。在某些实施方案中是本文所述的异源二聚体Fc构建体，包含至少一个T350X修饰，其中X是选自缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、及其衍生物或变体的天然或非天然氨基酸。在一些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，包含至少一个T350V修饰。在实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述修饰的CH3结构域具有至少约75℃或更高的熔解温度Tm。在实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述修饰的CH3结构域具有约77℃或更高的Tm。在某些实施方案中，所述修饰的CH3结构域具有约80℃或更高的Tm。在实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中至少一个CH3结构域多肽是包含K409和T411中的至少一个的氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽。在某些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，包含K409F、T411E和T411D中的至少一个。在一些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中至少一个CH3结构域多肽是包含D399的氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽。在一些实施方案中，D399的氨基酸修饰是D399R和D399K中的至少一个。一方面，提供了分离的包含修饰的异源二聚的CH3结构域的异源二聚体Fc构建体，所述修饰的CH3结构域包含：与野生型CH3结构域多肽相比包含至少三个氨基酸修饰的第一修饰的CH3结构域多肽，和与野生型CH3结构域多肽相比包含至少三个氨基酸修饰的第二修饰的CH3结构域多肽；其中所述第一和第二CH3结构域多肽中的至少一个包含K392J的氨基酸修饰，其中J选自L、I或侧链体积基本上不大于K的侧链体积的氨基酸；其中所述第一和第二修饰的CH3结构域多肽优先形成具有至少约74℃的熔解温度Tm和至少95％的纯度的异源二聚的CH3结构域；并且其中至少一个氨基酸修饰不是在所述第一和所述第二CH3结构域多肽之间的接口处的氨基酸的修饰。在某些实施方案中是本文所述的异源二聚体Fc构建体，包含至少一个T350X修饰，其中X是选自缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、及其衍生物或变体的天然或非天然氨基酸。在一些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，包含至少一个T350V修饰。在实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述修饰的CH3结构域具有至少约75℃或更高的熔解温度Tm。在实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述修饰的CH3结构域具有约77℃或更高的Tm。在某些实施方案中，所述修饰的CH3结构域具有约80℃或更高的Tm。在本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体的某些实施方案中，其中第一CH3结构域多肽是包含选自K409F、T411E和T411D的至少一个氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽，并且第二CH3结构域多肽是包含选自Y407A、Y407I、Y407V、D399R和D399K的至少一个氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽。在一些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体中的任一个，进一步包含包含氨基酸修饰T366V、T366I、T366A、T366M和T366L中的一个的第一修饰的CH3结构域；和包含氨基酸修饰L351Y的第二修饰的CH3结构域。在一些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体中的任一个，包含包含氨基酸修饰K392L或K392E中的一个的第一修饰的CH3结构域；和包含氨基酸修饰S400R或S400V中的一个的第二修饰的CH3结构域。提供了分离的包含修饰的CH3结构域的异源二聚体Fc构建体，所述修饰的CH3结构域包含第一修饰的CH3结构域多肽和第二修饰的CH3结构域多肽，每个修饰的CH3结构域多肽包含至少四个氨基酸突变，其中所述第一和所述第二修饰的CH3结构域多肽中的至少一个包含选自N390Z和S400Z的突变，其中Z选自带正电的氨基酸和带负电的氨基酸，并且其中所述第一和第二修饰的CH3结构域多肽优先形成具有至少约70℃的熔解温度Tm和至少90％的纯度的异源二聚的CH3结构域。在实施方案中提供了分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述第一修饰的CH3结构域多肽包含在位置F405和Y407处的氨基酸修饰并且所述第二修饰的CH3结构域多肽包含在位置T394处的氨基酸修饰。在实施方案中提供了分离的异源二聚体Fc构建体，第一修饰的CH3结构域多肽包含在位置L351处的氨基酸修饰。在某些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体，所述第二修饰的CH3结构域多肽包含位置T366和K392中的至少一个的修饰。在一些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体，其中所述修饰的CH3结构域具有至少约75℃的熔解温度Tm并且以至少约95％的纯度形成。在某些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体，至少一个修饰的CH3结构域多肽包含N390R、S400E和S400R中的至少一个的氨基酸修饰。在一些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体，所述第一和第二修饰的CH3结构域多肽中的一个包含在位置347处的氨基酸修饰而另一个修饰的CH3结构域多肽包含在位置360处的氨基酸修饰。在某些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体，所述第一和第二修饰的CH3结构域多肽中的至少一个包含T350V的氨基酸修饰。在特定的实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体，所述第一修饰的CH3结构域多肽包含选自L351Y、F405A和Y407V的至少一个氨基酸修饰；并且所述第二修饰的CH3结构域多肽包含选自T366L、T366I、K392L、K392M和T394W的至少一个氨基酸修饰。在本文所述的某些实施方案中是分离的异源二聚体，第一修饰的CH3结构域多肽包含在位置D399和Y407处的氨基酸修饰，并且第二修饰的CH3结构域多肽包含在位置K409和T411处的氨基酸修饰。在一些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体，第一CH3结构域多肽包含在位置L351处的氨基酸修饰，并且第二修饰的CH3结构域多肽包含在位置T366和K392处的氨基酸修饰。在特定的实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体，所述第一和第二CH3结构域多肽中的至少一个包含T350V的氨基酸修饰。在某些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体，其中所述修饰的CH3结构域具有至少约75℃或更高的熔解温度Tm并且以至少约95％的纯度形成。在某些实施方案中提供了本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，所述第一修饰的CH3结构域多肽包含选自L351Y、D399R、D399K、S400D、S400E、S400R、S400K、Y407A和Y407V的氨基酸修饰；并且所述第二修饰的CH3结构域多肽包含选自T366V、T366I、T366L、T366M、N390D、N390E、K392L、K392I、K392D、K392E、K409F、K409W、T411D和T411E的氨基酸修饰。本文提供了分离的包含修饰的CH3结构域的异源二聚体Fc构建，所述修饰的CH3结构域包含第一修饰的CH3结构域多肽和第二修饰的CH3结构域多肽，每个修饰的CH3结构域多肽包含至少三个氨基酸突变，其中所述第一和所述第二修饰的CH3结构域多肽中的一个包含选自T411E和T411D的突变，并且其中所述第一和第二修饰的CH3结构域多肽优先形成具有至少约70℃的熔解温度Tm和至少90％的纯度的异源二聚的CH3结构域。在实施方案中提供了分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述第一修饰的CH3结构域多肽包含在位置F405和Y407处的氨基酸修饰并且所述第二修饰的CH3结构域多肽包含在位置T394处的氨基酸修饰。在实施方案中提供了分离的异源二聚体Fc构建体，第一修饰的CH3结构域多肽包含在位置L351处的氨基酸修饰。在某些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体，所述第二修饰的CH3结构域多肽包含位置T366和K392中的至少一个的修饰。在一些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体，其中所述修饰的CH3结构域具有至少约75℃的熔解温度Tm并且以至少约95％的纯度形成。在某些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体，至少一个修饰的CH3结构域多肽包含N390R、S400E和S400R中的至少一个的氨基酸修饰。在一些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体，所述第一和第二修饰的CH3结构域多肽中的一个包含在位置347处的氨基酸修饰而另一个修饰的CH3结构域多肽包含在位置360处的氨基酸修饰。在某些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体，所述第一和第二修饰的CH3结构域多肽中的至少一个包含T350V的氨基酸修饰。在特定的实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体，所述第一修饰的CH3结构域多肽包含选自L351Y、F405A和Y407V的至少一个氨基酸修饰；并且所述第二修饰的CH3结构域多肽包含选自T366L、T366I、K392L、K392M和T394W的至少一个氨基酸修饰。在本文所述的某些实施方案中是分离的异源二聚体，第一修饰的CH3结构域多肽包含在位置D399和Y407处的氨基酸修饰，并且第二修饰的CH3结构域多肽包含在位置K409和T411处的氨基酸修饰。在一些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体，第一CH3结构域多肽包含在位置L351处的氨基酸修饰，并且第二修饰的CH3结构域多肽包含在位置T366和K392处的氨基酸修饰。在特定的实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体，所述第一和第二CH3结构域多肽中的至少一个包含T350V的氨基酸修饰。在某些实施方案中是本文所述的分离的异源二聚体，其中所述修饰的CH3结构域具有至少约75℃的熔解温度Tm或更高并且以至少约95％的纯度形成。在某些实施方案中提供了本文所述的分离的异源二聚体Fc构建体，所述第一修饰的CH3结构域多肽包含选自L351Y、D399R、D399K、S400D、S400E、S400R、S400K、Y407A和Y407V的氨基酸修饰；并且所述第二修饰的CH3结构域多肽包含选自T366V、T366I、T366L、T366M、N390D、N390E、K392L、K392I、K392D、K392E、K409F、K409W、T411D和T411E的氨基酸修饰。本文提供了分离的包含修饰的CH3结构域的异源二聚体Fc构建体，所述修饰的CH3结构域包含包含氨基酸修饰L351Y、F405A和Y407V的第一修饰的CH3结构域多肽；并且第二修饰的CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T366I、K392M和T394W。一方面，提供了分离的包含修饰的CH3结构域的异源二聚体Fc构建体，所述修饰的CH3结构域包含包含氨基酸修饰L351Y、F405A和Y407V的第一修饰的CH3结构域多肽；和包含氨基酸修饰T366I、K392L和T394W的第二修饰的CH3结构域多肽。在某一方面，提供了分离的包含修饰的CH3结构域的异源二聚体Fc构建体，所述修饰的CH3结构域包含包含氨基酸修饰L351Y、F405A和Y407V的第一修饰的CH3结构域多肽；和包含氨基酸修饰T366L、K392M和T394W的第二修饰的CH3结构域多肽。在一些方面，提供了分离的包含修饰的CH3结构域的异源二聚体Fc构建体，所述修饰的CH3结构域包含包含氨基酸修饰L351Y、F405A和Y407V的第一修饰的CH3结构域多肽；和包含氨基酸修饰T366L、K392L和T394W的第二修饰的CH3结构域多肽。一方面，提供了分离的包含修饰的CH3结构域的异源二聚体Fc构建体，所述修饰的CH3结构域包含包含氨基酸修饰T350V、L351Y、F405A和Y407V的第一修饰的CH3结构域多肽；和包含氨基酸修饰T350V、T366L、K392L和T394W的第二修饰的CH3结构域多肽。一方面，提供了分离的包含修饰的CH3结构域的异源二聚体Fc构建体，所述修饰的CH3结构域包含包含氨基酸修饰T350V、L351Y、S400R、F405A、Y407V的第一修饰的CH3结构域多肽；和包含氨基酸修饰T350V、T366L、K392M和T394W的第二修饰的CH3结构域多肽。一方面，提供了分离的包含修饰的CH3结构域的异源二聚体Fc构建体，所述修饰的CH3结构域包含包含氨基酸修饰T350V、L351Y、S400E、F405A、Y407V的第一修饰的CH3结构域多肽；和包含氨基酸修饰T350V、T366L、N390R、K392M和T394W的第二修饰的CH3结构域多肽。一方面，提供了分离的包含修饰的CH3结构域的异源二聚体Fc构建体，所述修饰的CH3结构域包含包含氨基酸修饰T350V、L351Y、F405A、Y407V的第一修饰的CH3结构域多肽；和包含氨基酸修饰T350V、T366L、K392L和T394W的第二修饰的CH3结构域多肽。一方面，提供了分离的包含修饰的CH3结构域的异源二聚体Fc构建体，所述修饰的CH3结构域包含包含氨基酸修饰T366V、K392L、K409F和T411E的第一修饰的CH3结构域多肽；和包含氨基酸修饰L351Y、D399R和Y407A的第二修饰的CH3结构域多肽。一方面，提供了分离的包含修饰的CH3结构域的异源二聚体Fc构建体，所述修饰的CH3结构域包含包含氨基酸修饰T366V,K392LEK409F和T411E的第一修饰的CH3结构域多肽；和包含氨基酸修饰L351Y、D399R、S400R和Y407A的第二修饰的CH3结构域多肽。根据本发明的一个方面，提供了分离的包含异源二聚体Fc区的异源二聚体，其中异源二聚体Fc区包含包含促进异源二聚体形成的氨基酸突变的修饰的CH3结构域，其中异源二聚体Fc区进一步包含变体CH2结构域，所述变体CH2结构域包含促进Fcγ受体的选择性结合的至少一个不对称氨基酸修饰。在一个实施方案中，与野生型CH2结构域相比，变体CH2结构域选择性结合FcγIIIa受体。在一个实施方案中，所述修饰的CH3结构域具有约70℃或更高的熔解温度Tm。在某些实施方案中，所述修饰的CH3结构域具有至少约75℃的熔解温度Tm。在一些实施方案中，所述修饰的CH3结构域具有至少约80℃的熔解温度Tm。另一方面，提供了分离的包含异源二聚体Fc区的异源二聚体，其中异源二聚体Fc区包含包含氨基酸突变的修饰的CH3结构域，其中所述修饰的CH3结构域具有约70℃或更高的熔解温度Tm，并且其中与不包含氨基酸突变的CH3结构域相比，所述修饰的CH3结构域导致具一个或多个氨基酸突变异源二聚体Fc区的形成。在一个实施方案中，相对于野生型Fc区，异源二聚体Fc区在CH3结构域中不包含额外的二硫键。在可替代的实施方案中，相对于野生型Fc区，异源二聚体Fc区在所述修饰的CH3结构域中包含至少一个额外的二硫键，前体条件是约70℃或更高的熔解温度Tm是在不存在额外的二硫键的情况下。在另一个实施方案中，相对于野生型Fc区，异源二聚体Fc区在所述修饰的CH3结构域中包含至少一个额外的二硫键，并且其中所述修饰的CH3结构域具有约77.5℃或更高的熔解温度Tm。在一个实施方案中提供了分离的包含异源二聚体Fc区的异源二聚体，其中异源二聚体Fc区包含包含氨基酸突变的修饰的CH3结构域，其中所述修饰的CH3结构域具有约70℃或更高的熔解温度Tm并且异源二聚体Fc区以大于约90％的纯度形成或异源二聚体Fc区以大于约95％或更高的纯度形成或异源二聚体Fc区以约98％或更高的纯度形成。在某些实施方案中还提供了分离的包含异源二聚体Fc区的异源二聚体，其中异源二聚体Fc区包含包含一个或多个氨基酸突变的修饰的CH3结构域，与不包含所述一个或多个氨基酸突变的CH3结构域相比，所述氨基酸突变导致具一个或多个氨基酸突变异源二聚体Fc区的形成，其中所述修饰的CH3结构域具有约70℃或更高的熔解温度Tm或Tm为约71℃或更高或Tm为约74℃或更高。在另一个实施方案中，异源二聚体Fc区在具有约98％或更高的纯度的溶液中形成，且Tm约73℃或其中异源二聚体Fc区以约90％或更高的纯度形成，且Tm约75℃。在某些实施方案中提供了分离的包含异源二聚体Fc区的异源二聚体，其中异源二聚体Fc区包含第一和第二CH3结构域多肽，其中所述第一和第二CH3结构域多肽中的至少一个包含氨基酸修饰T350V。在某些实施方案中提供了分离的包含异源二聚体Fc区的异源二聚体，其中异源二聚体Fc区包含包含氨基酸修饰T350V的第一CH3结构域多肽和也包含氨基酸修饰T350V的第二CH3结构域多肽。在某些实施方案中提供了分离的包含异源二聚体Fc区的异源二聚体，其中异源二聚体Fc区包含包含在位置F405和Y407处的氨基酸修饰的第一CH3结构域多肽和包含在位置T394处的氨基酸修饰第二CH3结构域多肽。第一CH3结构域多肽包含在位置D399和Y407处的氨基酸修饰并且第二CH3结构域多肽包含在位置K409和T411处的氨基酸修饰。在某些实施方案中提供了分离的包含异源二聚体Fc区的异源二聚体，其中异源二聚体Fc区包含包含氨基酸修饰L351Y和Y407A的第一CH3结构域多肽并且第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T366A和K409F。一方面，第一CH3结构域多肽或第二CH3结构域多肽包含在位置T411、D399、S400、F405、N390或K392处的另一个氨基酸修饰。在位置T411处的氨基酸修饰选自T411N、T411R、T411Q、T411K、T411D、T411E或T411W。在位置D399处的氨基酸修饰选自D399R、D399W、D399Y或D399K的。在位置S400处的氨基酸修饰选自S400E、S400D、S400R或S400K。在位置F405处的氨基酸修饰选自F405I、F405M、F405T、F405S、F405V或F405W。在位置N390处的氨基酸修饰选自N390R、N390K或N390D。在位置K392处的氨基酸修饰选自K392V、K392M、K392R、K392L、K392F或K392E。在某些实施方案中提供了分离的包含异源二聚体Fc区的异源二聚体，其中异源二聚体Fc区包含包含氨基酸修饰T350V和L351Y的第一CH3结构域多肽和也包含氨基酸修饰T350V和L351Y的第二CH3结构域多肽。在另一个实施方案中提供了分离的包含异源二聚体Fc区的异源二聚体，其中异源二聚体Fc区包含包含氨基酸修饰Y407A的第一CH3结构域多肽和包含氨基酸修饰T366A和K409F的第二CH3结构域多肽。一方面，第一CH3结构域多肽或第二CH3结构域多肽进一步包含氨基酸修饰K392E、T411E、D399R和S400R。另一方面，第一CH3结构域多肽包含氨基酸修饰D399R、S400R和Y407A并且第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T366A、K409F、K392E和T411E。在另一实施方案中所述修饰的CH3结构域具有约74℃或更高的熔解温度Tm并且异源二聚体具有约95％或更高的纯度。在另一个实施方案中提供了分离的包含异源二聚体Fc区的异源二聚体，其中异源二聚体Fc区包含包含在位置L351处的氨基酸修饰和氨基酸修饰Y407A的第一CH3结构域多肽以及包含在位置T366处的氨基酸修饰和氨基酸修饰K409F的第二CH3结构域多肽。一方面，在位置L351处的氨基酸修饰选自L351Y、L351I、L351D、L351R或L351F。另一方面，在位置Y407处的氨基酸修饰选自Y407A、Y407V或Y407S。又另一个方面，在位置T366处的氨基酸修饰选自T366A、T366I、T366L、T366M、T366Y、T366S、T366C、T366V或T366W。在一个实施方案中，所述修饰的CH3结构域具有约75℃或更高的熔解温度Tm并且异源二聚体具有约90％或更高的纯度。在另一个实施方案中提供了分离的包含异源二聚体Fc区的异源二聚体，其中异源二聚体Fc区包含包含在位置F405处的氨基酸修饰和氨基酸修饰L351Y和Y407V的第一CH3结构域多肽以及包含氨基酸修饰T394W的第二CH3结构域多肽。一方面，第一CH3结构域多肽或第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰在位置K392、T411、T366、L368或S400。在位置F405处的氨基酸修饰是F405A、F405I、F405M、F405T、F405S、F405V或F405W。在位置K392处的氨基酸修饰是K392V、K392M、K392R、K392L、K392F或K392E。在位置T411处的氨基酸修饰是T411N、T411R、T411Q、T411K、T411D、T411E或T411W。在位置S400处的氨基酸修饰是S400E、S400D、S400R或S400K。在位置T366处的氨基酸修饰是T366A、T366I、T366L、T366M、T366Y、T366S、T366C、T366V或T366W。在位置L368处的氨基酸修饰是L368D、L368R、L368T、L368M、L368V、L368F、L368S和L368A。在另一个实施方案中提供了分离的包含异源二聚体Fc区的异源二聚体，其中异源二聚体Fc区包含包含氨基酸修饰L351Y、F405A和Y407V的第一CH3结构域多肽和包含氨基酸修饰T394W的第二CH3结构域多肽。一方面，第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T366L或T366I。在又另一个实施方案中提供了分离的包含异源二聚体Fc区的异源二聚体，其中异源二聚体Fc区包含包含氨基酸修饰Y349C、F405A和Y407V中的至少一个的第一CH3结构域多肽和包含氨基酸修饰T366I、K392M和T394W的第二CH3结构域多肽。在某些实施方案中提供了分离的包含异源二聚体Fc区的异源二聚体，其中异源二聚体Fc区包含包含氨基酸修饰L351Y、F405A和Y407V的第一CH3结构域多肽和包含氨基酸修饰K392M和T394W、以及T366L和T366I中的一个的第二CH3结构域多肽。在另一个实施方案中提供了分离的包含异源二聚体Fc区的异源二聚体，其中异源二聚体Fc区包含包含氨基酸修饰F405A和Y407V的第一CH3结构域多肽和包含氨基酸修饰T366L和T394W的第二CH3结构域多肽。在另一个实施方案中提供了分离的包含异源二聚体Fc区的异源二聚体，其中异源二聚体Fc区包含包含氨基酸修饰F405A和Y407V的第一CH3结构域多肽和包含氨基酸修饰T366I和T394W的第二CH3结构域多肽。在异源二聚体的某些实施方案中提供了双特异性抗体或多特异性抗体。在另一个实施方案中提供了包含本发明的异源二聚体和药学上可接受的载体的组合物。在另一个实施方案中提供了包含编码本发明的异源二聚体的核酸的宿主细胞。在某些实施方案中提供了异源二聚体，其中异源二聚体包含至少一种治疗性抗体。一方面，治疗性抗体选自：阿巴伏单抗abagovomab、阿达木单抗adalimumab、阿伦珠单抗、奥罗格雷aurograb、巴匹珠单抗、巴利昔单抗、贝利木单抗belimumab、贝伐珠单抗、briakinumab、卡那单抗canakinumab、卡妥索单抗catumaxomab、塞舍珠单抗certolizumabpegol、西妥昔单抗、达克珠单抗、地舒单抗denosumab、依法珠单抗、加利昔单抗galiximab、吉妥珠单抗奥佐米星、戈利木单抗golimumab、替伊莫单抗、英利昔单抗、伊匹木单抗、鲁昔单抗、美泊利单抗、莫他珠单抗、莫罗单抗、mycograb、那他珠单抗、尼妥珠单抗、奥瑞珠单抗ocrelizumab、奥法木单抗ofatumumab、奥马珠单抗、帕利珠单抗、帕尼单抗、培妥珠单抗、雷珠单抗、瑞利珠单抗、利妥昔单抗、替利珠单抗teplizumab、托珠单抗atlizumab、托西莫单抗、曲妥珠单抗、ProxiniumTM、RencarexTM、优特克单抗和扎芦木单抗zalutumumab。在本发明的异源二聚体的另一个实施方案中提供了治疗患有由癌抗原表征的癌症的患者中的癌症的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的异源二聚体。在本发明的异源二聚体的另一个实施方案中提供了治疗患有由免疫抗原表征的免疫病症的患者中的免疫病症的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的异源二聚体。在某些实施方案中，在本文所述的异源二聚体构建体中所用的修饰的Fc区包含G型免疫球蛋白，例如被定义为2类免疫球蛋白IgG2或3类免疫球蛋白IgG3的免疫球蛋白。在一些实施方案中，在本文所述的异源二聚体构建体中所用的修饰的Fc区包含免疫球蛋白M或IgM。在一些实施方案中，在本文所述的异源二聚体构建体中所用的修饰的Fc区包含免疫球蛋白A或IgA。在一些实施方案中，在本文所述的异源二聚体构建体中所用的修饰的Fc区包含免疫球蛋白D或IgD。在一些实施方案中，在本文所述的异源二聚体构建体中所用的修饰的Fc区包含免疫球蛋白E或IgE。在某些实施方案中，在本文所述的异源二聚体构建体中所用的修饰的Fc区包含所有类别的免疫球蛋白G同种型，例如被定义为1类IgG1、2类IgG2、3类IgG3或4类IgG4免疫球蛋白的免疫球蛋白。附图简述图1是显示CH3顶部、CH2中部和受体区域的野生型抗体的图示3-D结构。在左手侧上的虚线矩形扩展至右手侧，其显示CH3的靶区的两个区域，区域1和区域2；图2是显示在位置368处的野生型残基的图示3-D代表；图3是显示突变的位置368的区域1的图示3-D代表；图4是显示区域2中额外突变的图示3-D代表；图5是对于前三种变体AZ1、AZ2和AZ3的碰撞评分、接口面积差异、包装差异、静电能差异和整体“亲和力评分”的计算机芯片上计算值的表格；图6是显示“构建在”变体AZ1上的变体AZ2和AZ3的图示3-D图像；图7显示AZ2和AZ3变体的图示3-D代表；图8显示如图5中但对于AZ1、AZ2和AZ3异源二聚体和潜在同源二聚体的表格。没有显示关于同源二聚体的亲和力评分，因为其是不相关的；图9是野生型左和突变的AZ4右的3-D代表的图示；图10显示如图5且显示对于AZ4异源二聚体和潜在同源二聚体的计算机上芯片计算值的表格；图11是CH3变体AZ5左和AZ6右的图示；图12如图5所述且显示对于AZ4、AZ5和AZ6的计算机上芯片数据的表格；图13是抗体在左侧的图示3-D代表，具有使用异源二聚方法在受体区域的结合特征的可能性的绘图；图14是IgG分子的图示；图15显示Fcγ受体的多重序列比对。GenebankUniprot序列ID：FcγRIIAspP12318、FcγRIIBspP31994、FcγRIICgi126116592、FcγRIIIAspP08637、FcγRIIIBspO75015；图16是Fc-FcγRIIIb复合物的晶体结构的图示[PDBID:1T83,Radaev&Sun]。Fc和Fcγ受体的1:1复合物观察到在Fc和FcγR的两条链之间具有不对称接触；图17显示基于由本文所述的异源二聚的变体形成的不对称Fc支架的多功能分子的图示：不对称Fc支架和不对称Fc单体IgG臂；图18显示基于由本文所述的异源二聚的变体形成的不对称Fc支架的多功能分子的图示：不对称Fc单特异性IgG臂和不对称Fc双特异性IgG臂共用轻链；图19显示基于由本文所述的异源二聚的变体形成的不对称Fc支架的多功能分子的图示。不对称Fc双特异性IgG臂和功能分子如毒素；图20显示基于由本文所述的异源二聚的变体形成的不对称Fc支架的多功能分子：不对称Fc单一scFv臂和不对称Fc双特异性scFv臂；图21显示基于由本文所述的异源二聚的变体形成的不对称Fc支架的替代多功能分子：不对称Fc三特异性scFv臂和不对称Fc四特异性scFv臂。图22显示了为了更好的FcγR选择性在Fc的一面不对称设计突变引入了用于FcγR相互作用的产生侧面和具有野生型样相互作用的非产生面。可以引入Fc的非产生面上的突变以阻断与FcR的相互作用和Fc偏好极性，以便只在产生面上相互作用。图23显示了亲本野生型重链人IgG1序列的氨基酸序列。图24显示Fc异源二聚体设计的迭代过程，其组合如下详述的阳性和阴性设计策略。图25A-25C显示用来确定异源二聚体纯度的体外测定。该测定基于具有不同分子量的两条Fc重链的全长单特异性抗体支架；重链A具有C-末端His标记His且重链B具有C末端可裂解的mRFP标记RFP。两条重链AHis和BRFP连同固定量的轻链以不同的相对比率进行表达，产生具有不同分子量的3种可能的二聚体种类：a同源二聚体链AHis链AHis约150kDa；b异源二聚体链AHis链BRFP约175kDa；c同源二聚体链BRFP链BRFP约200kDa。表达后，如实施例2中所述，通过非还原性SDS-PAGE确定异源二聚体相比于两种同源二聚体的比例，其允许通过分子量分开3种二聚体种类。用考马斯亮蓝染色SDS-PAGE凝胶。图25A：测试的变体是仅WT链AHis；仅WT链BRFP；WT链AHis加链BRFP；对照1链AHis加链BRFP，其具有95％的报道的异源二聚体纯度。用针对如上所述针对IgG-Fc抗Fc、mRFPTag抗mRFP和HisTag抗His的抗体通过Western印迹验证二聚体条带的组成。SDS-PAGE显示对于HisHis同源二聚体的单一条带，对于HisRFP异源二聚体的双条带和对于RFP同源二聚体的多条带。多条带是mRFP标记的人工产物且已被证实不影响Fc异源二聚体的物理特性。图25B：以公开的Fc异源二聚体变体对照1-4作为对照验证SDS-PAGE测定，参见表A。以不同的链AHis相比于链BRFP的相对比例表达变体：具体而言，分别地，比例1:3等于25％、10％、65％的LC、HC_His、HC_mRFP比例；比例1:1等于25％、20％、55％的LC、HC_His、HC_mRFP比例且比例3:1等于25％、40％、35％的LC、HC_His、HC_mRFP比例链AHis与链BRFP的表观1:1表达对于WTFc已经确定为接近20％55％HisRFP。图25C显示非还原SDS-PAGE测定以确定支架1变体的异源二聚体纯度。以不同的链AHis相比于链BRFP的相对比例表达Fc变体，且如图2中所述通过非还原SDS-PAGE进行分析。具体而言，分别地，比例1:3等于25％、10％、65％的LC、HC_His、HC_mRFP比例；比例1:1等于25％、20％、55％的LC、HC_His、HC_mRFP比例且比例3:1等于25％、40％、35％的LC、HC_His、HC_mRFP比例链AHis与链BRFP的表观1:1表达对于WTFc已经确定为接近20％55％HisRFP。图26A-26B显示以链AHis相比于链BRFP的特定比例表达Fc的异源二聚体变体参见表2，通过蛋白A亲和层析纯化且如图25A-25C中所述通过非还原SDS-PAGE进行分析。图26A说明基于通过目视检查SDS-PAGE结果所观察到的纯度的异源二聚体分类。为了比较，将等量的蛋白A纯化的产物上样至凝胶上。已经通过对选择的变体的LCMS验证了该基于非还原SDS-PAGE的纯度的定义参见图28。图26B提供了选择的蛋白A纯化的异源二聚体变体AZ94、AZ86、AZ70、AZ33和AZ34的示例性SDS-PAGE结果。图27A-27B说明用来测定由本文所述的异源二聚体变体形成的异源二聚的CH3-CH3结构域的熔解温度的DSC分析。使用两种独立方法以确定熔解温度。图27A提供了这样的热谱图，其拟合至4次独立的非2态转换non-2-state-transitions且进行优化以产生接近于Herceptin的报道文献值约72℃CH2和约82℃Fab的CH2和Fab转换值。图27B显示异源二聚体变体的标准化和基线校正的热谱图从WT中减去，以产生仅对于CH3转换的正负差峰值。图28说明如实施例2中所述的实例变体AZ70的LCMS分析。注明了糖基化异源二聚体和同源二聚体的预期计算的平均值质量。与异源二聚体质量一致的区域含有对应于损失甘氨酸-57Da和添加1个或2个己糖分别为+162Da和+324Da的主峰。如果没有对应于任一种同源二聚体的明显峰，那么异源二聚体纯度被归类为90％。图29A-29D显示在计算机芯片上分析初始阴性设计变体和独立阳性设计优化：支架1-疏水核心。显示了WT图29A；AZ6图29B；AZ33图29C；和AZ19图29D的CH3接口。如详述部分所述的计算机芯片上的综合分析和变体与WT的比较表明，初始AZ33异源二聚体的稳定性低于WT稳定性的原因之一是Y407和T366的核心相互作用包装的损失。初始AZ33显示如图29B所示的在该疏水核心处的非最佳包装，表明该区域、尤其是在位置T366处的优化可以改进AZ33的稳定性。这一点在图29C和图29D中以T366I与T366L进行说明。实验数据与这种结构分析相关且显示T366L给出了Tm的最大改进。参见，实施例5。图30显示在计算机芯片上分析初始阴性设计变体和独立阳性设计优化：支架1-稳定399-400环构型，说明在初始支架1变体AZ8例举的构象动力学分析的实用性和重要性。在计算机芯片上诱变后的结构接近WT的骨架构型与50ns分子动力学模拟分析的代表性结构相叠加。该图突出了AZ8变体相比于WT的环区域D399-S400的较大构象差异，其进而将疏水核心暴露于溶剂且引起AZ8异源二聚体的稳定性降低。图31A-31C显示在计算机芯片上分析初始阴性设计变体和独立阳性设计优化：支架1-稳定399-400环构型，说明来自计算机芯片上综合分析和MD模拟的信息如何用于所述阳性设计策略。如图30中所示，AZ8稳定性低于WT稳定性的原因之一是环399-400与409的减弱的相互作用，这主要是由于F405包装相互作用的损失参见图31AWT相比于对图31BAZ8的比较。阳性设计策略之一是优化区域的疏水性包装以稳定399-400环构象。这通过图31C中所示的K392M突变而实现。图31C代表异源二聚体AZ33，其具有74°的Tm，相比之下，初始阴性设计变体AZ8具有68°的Tm。图32A-32B说明使用分子动力学轨迹的主成分分析观察到的Fc分子的动力学。图32A显示作为参考的Fc结构的骨架轨迹。图32B和C代表沿Fc结构中顶部2种主要运动方式观察到的动力学重叠。链A和B的CH2结构域表现出相对于彼此明显的开关运动，而CH3结构域是相对刚性的。CH3接口处的突变影响CH2结构域中这种开关运动的相对灵活性和动力学。图33A-33C显示在计算机芯片上分析初始阴性设计变体和独立阳性设计优化：支架2-疏水性包装，说明两个支架2变体相比于WT的疏水核心包装。WTFc图33A；AZ63图33B；和AZ70图33C。初始支架2变体的计算机芯片上的综合分析表明，Y407-T366核心WT相互作用的损失是初始支架2变体的稳定性低于WT稳定性的原因之一。Y407-T366的损失被突变K409F部分补偿，但如图33B中所示，特别地T366A突变留下疏水核心中的腔体，这使变体相比于WT不稳定。如图33C中的Fc变体AZ70所示，由额外突变T366V_L351Y靶向该疏水核心证明是成功的；AZ70具有75.5℃的实验确定的Tm。参见，表4以及实施例6。图34A-34C显示在计算机芯片上分析初始阴性设计变体和独立阳性设计优化：支架2-稳定399-400环构型，说明两个支架2变体相比于WT的环399-400的相互作用：WTFc图34A；AZ63图34B；和AZ94图34C。初始支架2变体的计算机芯片上的综合分析表明，由于突变K409F的WT盐桥K409-D399的损失图34A和因此不满意D399图34B引起399-400环的更加'开放的'构象。这进而导致疏水核心的更大的溶剂暴露和变体相比于WT的进一步的不稳定。用于稳定399-400环且补偿K409-D399相互作用损失的策略之一是设计如图34C对于变体AZ94所示的额外的盐桥D399R-T411E和S400R-K392E。实验数据显示95％的纯度和74℃的Tm。参见，表4以及实施例6。此外，尽管AZ94与初始支架2变体纯度95％异源二聚体的高特异性，但是使复合物相当不稳定同上。这些阴性设计异源二聚体具有69℃或更低的修饰的CH3结构域的熔解温度，与野生型相比，不存在额外的二硫键。参见下面的表A。表A：公布的Fc异源二聚体抗体*我们在我们的测定系统观察到对照1的90％的纯度，但不是如以前在文献中报道的100％。*我们在我们的测定系统观察到对照4的高于77℃的Tm；对于这种变体的Tm在文献中还没有公开。NP–对于对照3的Tm还没有公开，并且它在我们的测定系统中没有进行测试。野生型IgG1的熔解温度显示为81-83的范围，因为文献中的值取决于使用的测定系统而变化，我们在我们的测定系统中报告了81.5℃的值。在阴性设计相比，用于工程改造蛋白的一般概念是阳性设计。在这种情况下，将氨基酸修饰引入多肽以使蛋白内或蛋白之间的有利相互作用最大化。这种策略假设，当引入多个特异性稳定期望的异源二聚体的突变而同时忽略对同源二聚体的影响时，净效果将是对于期望的异源二聚体相互作用相比于同源二聚体的更好的特异性，和因此更高的异源二聚体特异性。在蛋白工程改造的背景下可以理解的是，阳性设计策略优化了期望的蛋白相互作用的稳定性，但很少达到90％特异性HavranekJJ&HarburyPB.Automateddesignofspecificityinmolecularrecognition.NatStructBiol.101:45-522003；BolonDN,GrantRA,BakerTA,SauerRT.Specificityversusstabilityincomputationalproteindesign.ProcNatlAcadSciUSA.6；10236:12724-92005；HuangPS,LoveJJ,MayoSL.AdenovodesignedproteinproteininterfaceProteinSci.1612:2770-42007。在本公开之前，阳性设计策略没有用于设计Fc异源二聚体，因为对特异性投入的关注比治疗性抗体的制备和开发更多。此外，有利的阳性设计突变难以预测。用于改进稳定性的其他方法，诸如额外的二硫键，已经进行尝试以改进Fc异源二聚体的稳定性，但是对于分子的改进的成功有限。参见，表A这可能是因为所有工程改造的FcCH3结构域二硫键是溶剂暴露的，这导致二硫键的较短生命周期，和因此对异源二聚体的长期稳定性的显著影响-特别是当工程改造的CH3结构域在没有额外二硫键的情况下具有小于70℃的Tm如对照4，其在没有额外二硫键的情况下具有69℃的Tm参见对照2。可以考虑，改进稳定性的其他方法，诸如二硫键，也可以与本发明的Fc变体使用，条件是CH3结构域在没有二硫键的情况下的内在稳定性作为熔解温度来测量为70℃或更高，特别是当CH3结构域在没有二硫键的情况下的内在稳定性作为熔解温度来测量为72℃或更高。因此，我们在本文中公开用于设计Fc异源二聚体的新方法，其导致稳定且高特异性异源二聚体形成。这种设计方法组合阴性和阳性设计策略连同结构和计算模型引导的蛋白工程改造技术。这种功能强大的方法已经允许我们设计在IgG1CH3结构域中新的突变组合，其中仅使用标准细胞培养条件形成异源二聚体，与同源二聚体相比其具有超过90％的纯度，并且获得的异源二聚体具有70℃或更高的熔解温度。在示例性实施方案中，Fc变体异源二聚体具有73℃或更高的熔解温度和高于98％的纯度。在其他示例性实施方案中，Fc变体异源二聚体具有75℃或更高的熔解温度和高于90％的纯度。在本文所述的异源二聚体Fc变体的某些实施方案中，Fc变体异源二聚体具有77℃或更高的熔解温度和高于98％的纯度。在本文所述的异源二聚体Fc变体的某些实施方案中，Fc变体异源二聚体具有78℃或更高的熔解温度和高于98％的纯度。在本文所述的异源二聚体Fc变体的某些实施方案中，Fc变体异源二聚体具有79℃或更高的熔解温度和高于98％的纯度。在本文所述的异源二聚体Fc变体的某些实施方案中，Fc变体异源二聚体具有80℃或更高的熔解温度和高于98％的纯度。在本文所述的异源二聚体Fc变体的某些实施方案中，Fc变体异源二聚体具有81℃或更高的熔解温度和高于98％的纯度。在某些实施方案中，提供了分离的包含异源二聚体Fc区的异源多聚体，其中所述异源二聚体Fc区包含具有增加稳定性的修饰的CH3结构域，所述修饰的CH3结构域包含促进异源二聚体形成的氨基酸突变，其中所述修饰的CH3结构域具有70℃或更高的熔解温度Tm。如本文所使用的，"增加的稳定性"或"稳定的异源二聚体"是指在异源二聚体形成中的修饰的CH3结构域，其具有约70℃或更高的熔解温度。在某些实施方案中，"增加的稳定性"或"稳定的异源二聚体"是指在异源二聚体形成中的修饰的CH3结构域，其具有约72℃或更高的熔解温度。在某些实施方案中，"增加的稳定性"或"稳定的异源二聚体"是指在异源二聚体形成中的修饰的CH3结构域，其具有约74℃或更高的熔解温度。在某些实施方案中，"增加的稳定性"或"稳定的异源二聚体"是指在异源二聚体形成中的修饰的CH3结构域，其具有约75℃或更高的熔解温度。在某些实施方案中，"增加的稳定性"或"稳定的异源二聚体"是指在异源二聚体形成中的修饰的CH3结构域，其具有约76℃或更高的熔解温度。在某些实施方案中，"增加的稳定性"或"稳定的异源二聚体"是指在异源二聚体形成中的修饰的CH3结构域，其具有约78℃或更高的熔解温度。在某些实施方案中，"增加的稳定性"或"稳定的异源二聚体"是指在异源二聚体形成中的修饰的CH3结构域，其具有约79℃或更高的熔解温度。在某些实施方案中，"增加的稳定性"或"稳定的异源二聚体"是指在异源二聚体形成中的修饰的CH3结构域，其具有约80℃或更高的熔解温度。在某些实施方案中，"增加的稳定性"或"稳定的异源二聚体"是指在异源二聚体形成中的修饰的CH3结构域，其具有约81℃或更高的熔解温度。此外，可以理解的是，术语“促进异源二聚体形成”在本文中是指CH3结构域中的氨基酸突变，其导致与同源二聚体形成相比的高于90％的异源二聚体形成。在进一步实施方案中，这种增加的稳定性是在额外的二硫键不存在的情况下。具体而言，增加的稳定性是在CH3结构域中额外的二硫键不存在的情况下。在一个实施方案中，与野生型CH3结构域相比，修饰的CH3结构域不包含额外的二硫键。在可替代的实施方案中，与野生型CH3结构域相比，修饰的CH3包含至少一个二硫键，条件是所述修饰的CH3在二硫键不存在的情况下具有70℃或更高的熔解温度。在一个实施方案中，与野生型CH3结构域相比，修饰的CH3结构域包含至少一个二硫键，并且修饰的CH3结构域具有约77.5℃或更高的熔解温度Tm。在一个实施方案中，与野生型CH3结构域相比，修饰的CH3结构域包含至少一个二硫键，并且修饰的CH3结构域具有约78℃或更高的熔解温度Tm。在另一个实施方案中，与野生型CH3结构域相比，修饰的CH3结构域包含至少一个二硫键，并且修饰的CH3结构域具有下列熔解温度Tm：高于约78℃、或高于约78.5℃、或高于约79℃、或高于约79.5℃、或高于约80℃、或高于约80.5℃、或高于约81℃、或高于约81.5℃、或高于约82℃、或高于约82.5℃、或高于约83℃。在一个实施方案中，修饰的CH3结构域具有下列熔解温度：高于约70℃、或高于约70.5℃、或高于约71℃、或高于约71.5℃、或高于约72℃、或高于约72.5℃、或高于约73℃、或高于约73.5℃、或高于约74℃、或高于约74.5℃、或高于约75℃、或高于约75.5℃、或高于约76℃、或高于约76.5℃、或高于约77℃、或高于约77.5℃、或高于约78℃、或高于约78.5℃、或高于约79℃、或高于约79.5℃、或高于约80℃、或高于约80.5℃、或高于约81℃、或高于约81.5℃、或高于约82℃、或高于约82.5℃、或高于约83℃。在另一个实施方案中，修饰的CH3结构域具有下列熔解温度：约70℃、或约70.5℃、或约71℃、或约71.5℃、或约72℃、或约72.5℃、或约73℃、或约73.5℃、或约74℃、或约74.5℃、或约75℃、或约75.5℃、或约76℃、或约76.5℃、或约77℃、或约77.5℃、或约78℃、或约78.5℃、或约79℃、或约79.5℃、或约80℃、或约80.5℃、或约81℃。在又另一个实施方案中，修饰的CH3结构域具有下列熔解温度：约70℃至约81℃、或约70.5℃至约81℃、或约71℃至约81℃、或约71.5℃至约81℃、或约72℃至约81℃、或约72.5℃至约81℃、或约73℃至约81℃、或约73.5℃至约81℃、或约74℃至约81℃、或约74.5℃至约81℃、或约75℃至约81℃、或约75.5℃至约81℃、或76℃至约81℃、或约76.5℃至约81℃、或约77℃至约81℃、或约77.5℃至约81℃、或约78℃至约81℃、或约78.5℃至约82℃、或约79℃至约81℃。在又另一个实施方案中，修饰的CH3结构域具有下列熔解温度：约71℃至约76℃、或约72℃至约76℃、或约73℃至约76℃、或约74℃至约76℃。除增加的稳定性以外，异源二聚体Fc区包含修饰的CH3结构域，所述修饰的CH3结构域包含促进异源二聚体形成的氨基酸突变。可以理解的是，这些促进异源二聚体形成的氨基酸突变是与同源二聚体形成相比的。与同源二聚体形成相比的这种异源二聚体形成在本文中统称为“纯度”或“特异性”或“异源二聚体纯度”或“异源二聚体特异性”。可以理解的是，异源二聚体纯度是指在选择性纯化同源二聚体种类之前在标准细胞培养条件下在溶液中形成的所需异源二聚体与形成的同源二聚体种类相比的百分比。例如，90％的异源二聚体纯度表明溶液中的90％二聚体种类是所需异源二聚体。在一个实施方案中，Fc变体异源二聚体具有下列纯度：高于约90％、或高于约91％、或高于约92％、或高于约93％、或高于约94％、或高于约95％、或高于约96％、或高于约97％、或高于约98％、或高于约99％。在另一个实施方案中，Fc变体异源二聚体具有下列纯度：约90％、或约91％、或约92％、或约93％、或约94％、或约95％、或约96％、或约97％、或约98％、或约99％、或约100％。在特定的实施方案中，分离的包含异源二聚体Fc区的异源多聚体，其中所述异源二聚体Fc区包含具有增加稳定性的修饰的CH3结构域，所述修饰的CH3结构域包含促进异源二聚体形成的氨基酸突变，其中所述修饰的CH3结构域具有70℃或更高的熔解温度Tm并且获得的异源二聚体具有高于90％的纯度。在一个方面，获得的Fc变体异源二聚体具有高于98％的纯度，并且修饰的CH3结构域具有下列熔解温度：高于约70℃、或高于约71℃、或高于约72℃、或高于约73℃、或高于约74℃、或高于约75℃、或高于约76℃、或高于约77℃、或高于约78℃、或高于约79℃、或高于约80℃或高于约81℃。在进一步的方面，修饰的CH3结构域具有70℃或更高的熔解温度并且获得的Fc变体异源二聚体具有下列纯度：高于约90％、或高于约91％、或高于约92％、或高于约93％、或高于约94％、或高于约95％、或高于约96％、或高于约97％、或高于约98％、或高于约99％。为了设计这些具有改进的稳定性和纯度的Fc变体，我们采用了计算设计和实验筛选的迭代过程来选择阳性和阴性设计策略的最成功组合参见，图24。具体而言，在初始设计阶段，如实施例1-3中所述制备不同的阴性设计Fc变体异源二聚体且测试表达和稳定性。初始设计阶段包括Fc变体异源二聚体AZ1-AZ16参见，表1。从阴性设计Fc变体异源二聚体的该初始组预期其具有较低稳定性例如，小于71℃的Tm，选择具有大于90％纯度和约68℃或更高的熔解温度的Fc变体异源二聚体用于进一步开发。这包括Fc变体异源二聚体AZ6、AZ8和AZ15。在第二个设计阶段，使用阳性设计策略遵循详细的计算和结构分析将那些选择的Fc变体异源二聚体进行进一步修饰以驱动稳定性和纯度。用计算方法和全面结构功能分析各自分析选择的Fc变体异源二聚体AZ6、AZ8、和AZ15，以鉴定这些Fc变体具有比野生型Fc同源二聚体其对于IgG1为81℃更低稳定性的结构原因。对于Fc变体异源二聚体和Tm值的列表，参见表4。在某些实施方案中，修饰的CH3结构域选自AZ1、或AZ2、或AZ3、或AZ4、或AZ5、或AZ6、或AZ7、或AZ8、或AZ9、或AZ10、或AZ11、或AZ12、或AZ13、或AZ14、或AZ15、或AZ16。在选择的实施方案中，修饰的CH3结构域是AZ6、或AZ8或AZ15。计算机工具和结构-功能分析包括，但不限于分子动力学分析MD、侧链骨架重新包装、知识库潜力KnowledgeBasePotential,KBP、腔体和疏水包装分析LJ、CCSD、SASA、dSASA碳全原子、静电-GB计算、和偶联分析。对于计算策略的综述，参见图24蛋白工程改造方法的一个方面依赖于源自X射线晶体学的FcIgG蛋白的结构信息和CH3结构域的野生型和变体形式的计算建模和模拟相组合。这使我们获得关于单个氨基酸的潜在作用和它们的协同作用的新的结构和物理化学见解。从多个修饰的CH3结构域获得的这些结构和物理化学见解，连同获得的有关它们的稳定性和纯度的经验数据帮助我们开发且理解与Fc同源二聚体相比的Fc异源二聚体的纯度和稳定性之间的关系和模拟的结构模型。为了进行我们的模拟，我们通过构建完整和现实的模型和完善IgG1抗体的野生型Fc结构质量来开始。源自X-射线晶体学的蛋白结构缺乏关于在生理条件下在水介质中蛋白的某些特征的细节，我们的完善程序解决了这些限制。这些包括构建蛋白结构的缺失区域往往是蛋白的柔性部分如环和一些残基侧链，评价和定义中性和带电荷残基的质子状态和与蛋白相关的潜在功能相关水分子的放置。分子动力学MD算法是我们使用的一种工具，其通过模拟蛋白结构来评价在含水环境中的Fc同源二聚体和修饰的CH3结构域的内在动力学性质。分子动力学模拟追踪由蛋白中的所有原子实体和其局部环境之间的相互作用和力作用产生的运动导致的分子的动力学轨道，在这种情况下，原子构成Fc和其周围水分子。分子动力学模拟后，分析轨道的各方面来获得对Fc同源二聚体和变体Fc异源二聚体的结构和动力学特征的见解，我们使用其来鉴定特定的氨基酸突变来改进分子的纯度和稳定性。因此，使用方法来研究生成的MD轨迹，所述方法如主要组分分析以显示在Fc结构中的固有频率低的运动模式。这提供了对于蛋白的潜在构象亚状态的见解参见，图32。尽管Fc区中的链A和B之间的关键蛋白-蛋白相互作用发生在CH3结构域的接口处，但是我们的模拟表明，该接口在运动中充当铰链，其涉及CH2结构域的N末端相对于彼此的“开放”与“闭合”。如图16中可见，CH2结构域与FcgR在其末端相互作用。因此，尽管不希望被理论所束缚，似乎在CH3接口处引入氨基酸突变赋予在Fc的N末端处的开放闭合运动的量级和性质，和因此Fc与FcgR如何相互作用。参见，实施例4和表5。还研究生成的MD轨迹来基于分析它们的柔韧性概况和分析它们的环境来确定Fc结构中特定氨基酸残基位置的易变性。该算法使我们鉴定不能影响蛋白结构和功能的残基，提供了对于修饰的CH3结构域的后续设计阶段的残基特征和易变性的独特见解。该分析还使我们能够比较多种模拟，且在分析概况后基于异常值评价易变性。还研究生成的MD轨迹来确定蛋白中的相关残基运动和由它们之间的偶联导致的残基网络的形成。发现Fc结构中的动力学相关性和残基网络在理解蛋白作为动力学实体和用于发展在远端位点处的突变的影响的见解中是关键步骤。参见，例如实施例6因此，我们详细研究了突变对突变位点的局部环境的影响。链A和B之间的CH3的接口处的包装良好的核心的形成对于稳定的Fc结构中两条链的自发配对是关键的。良好包装是相互作用分子伴侣之间的强结构互补性连同接触基团之间的有利相互作用的结果。有利的相互作用由良好去除溶剂暴露的掩埋的疏水性接触和或亲水性极性基团之间的互补性静电接触的形成导致的。这些疏水性和亲水性接触对CH3接口处的二聚体形成的自由能具有熵和焓的贡献。我们采用了多种算法来精确地模拟链A和B之间的CH3接口处的包装，且随后通过对一些相关物理化学特性进行评分而评价接口的热力学特性。我们采用了一些蛋白包装方法，包括柔韧的骨架来优化且制备用于我们计算筛选的大量变体的模型结构。包装之后，我们评价了许多项目，包括接触密度、碰撞评分、氢键、疏水性和静电。使用溶剂化模型使我们能够更准确地在蛋白中的特定位置突变为替代残基类型之后解决溶剂环境的影响和对比自由能差异。接触密度和碰撞评分提供了互补性有效蛋白包装的关键方面的量度。这些筛选程序基于基于知识的潜力或偶联分析方案的应用，其依赖于成对残基相互作用能和熵计算。这种全面的计算机芯片上分析提供了关于连接热点、不对称位点、腔体和较差包装区、个别位点的结构动力学和局部解折叠位点与野生型相比的每个Fc变体的差异的更详细理解。所述计算分析的这些组合结果鉴定了没有优化和组合负责更低稳定性例如，68℃的Tm和或95％纯的变体Fc异源二聚体制剂。可通过载体扩增提高Fc变体如抗体或融合蛋白的表达水平综述参见Bebbington和Hentschel，TheuseofvectorsbasedongeneamplificationfortheexpressionofclonedgenesinmammaliancellsinDNAcloning，第3卷AcademicPress,NewYork,1987。例如，当表达抗体或融合蛋白的载体系统中的标记扩增时，宿主细胞培养物中存在的抑制剂水平提高将提高标记基因的拷贝数。由于扩增区域与抗体基因相连，所以也将提高抗体或融合蛋白的产量Crouse等人，1983，Mol.Cell.Biol.3:257。可利用两种本发明表达载体共转染宿主细胞。例如，第一种载体编码重链衍生的多肽，第二种载体编码轻链衍生的多肽。这两种载体可含有相同的选择性标记，使得能够等同地表达重链和轻链多肽。或者可采用编码并能够表达融合蛋白或者重链与轻链多肽的单一载体。融合蛋白或重链与轻链的编码序列可包含cDNA或基因组DNA。表征和功能测定可以以各种方式表征本发明的Fc变体例如，抗体或融合蛋白。在一个实施方案中，使用本领域众所周知的技术评估变体Fc异源二聚体的纯度，所述技术包括但不限于SDS-PAGE凝胶、western印迹、密度测定法或质谱法。可以使用一系列技术表征蛋白稳定性，所述技术不限于，大小排阻层析法、UV可见和CD光谱法、质谱法、差示光散射、台式稳定性测定、冻融加上其他表征技术、差示扫描量热法、差示扫描荧光测定法、疏水相互作用层析法、等电聚焦、受体结合测定或相对蛋白表达水平。在一个示例性实施方案中，使用本领域众所周知的技术诸如差示扫描量热法或差示扫描荧光测定法，与野生型CH3结构域相比，通过变体Fc异源二聚体的熔解温度评估修饰的CH3结构域的稳定性。也可以测定本发明的Fc变体的特异性结合配体例如，FcγRIIIA、FcγRIIB、C1q的能力。这样的测定可以在溶液中例如,Houghten,BioTechniques,13:412-421,1992、珠粒上Lam,Nature,354:82-84,1991、芯片上Fodor,Nature,364:555-556,1993、细菌上美国专利号5,223,409、质粒上Cull等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,89:1865-1869,1992、或噬菌体上Scott和Smith,Science,249:386-390,1990；Devlin,Science,249:404-406,1990；Cwirla等人，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,87:6378-6382,1990；和Felici,J.Mol.Biol.,222:301-310,1991进行。然后可以测定已经鉴定特异性结合配体例如，FcγRIIIA、FcγRIIB、C1q或抗原的分子的对于配体的亲和力。可以通过本领域已知的任何方法测定本发明的Fc变体与分子如抗原例如，癌抗原和与其他抗原的交叉反应性或配体例如，FcγR的特异性结合。可用于分析特异性结合和交叉反应性的免疫测定包括但不限于使用下列技术的竞争性和非竞争性测定系统：如western印迹、放射性免疫测定、ELISA酶联免疫吸附测定、“夹心”免疫测定、免疫沉淀测定、沉淀素反应、凝胶扩散沉淀素反应、免疫扩散测定、凝集测定、补体-固定测定、免疫放射测定、荧光免疫测定、蛋白A免疫测定、仅举几个实例。这些测定是常规的和本领域众所周知的参见例如，Ausubel等人编辑，1994，CurrentProtocolsinMolecularBiology，第1版，JohnWiley&Sons,Inc.,NewYork。可以通过竞争性结合测定来确定本发明的Fc变体与分子，如抗原或配体例如FcγR的结合亲和力和相互作用的解离速率。竞争性结合测定的一个实例是放射免疫测定法，其包括在渐增量的未标记配体如FcγR存在的情况下将标记的配体如FcγR例如3H或125I与感兴趣的分子例如，本发明的Fc变体孵育，且检测与标记的配体结合的分子。可以通过scatchard分析从饱和数据确定本发明的分子与配体的亲和力和结合解离速率。也可以使用本领域已知的任何基于表面等离子共振SPR的测定例如，BIAcore动力学分析来确定Fc变体的动力学参数。基于SPR技术的综述参见Mullet等人，2000，Methods22：77-91；Dong等人，2002,ReviewinMol.Biotech.,82：303-23；Fivash等人，1998,CurrentOpinioninBiotechnology9：97-101；Rich等人，2000,CurrentOpinioninBiotechnology11：54-61。此外，在美国专利号6,373,577；6,289,286；5,322,798；5,341,215；6,268,125中描述用于测量蛋白-蛋白相互作用的任何SPR仪器和基于SPR的方法涵盖在本发明的方法中。使用本领域技术人员已知的任何技术的荧光活化的细胞分选FACS，可以用于表征Fc变体与细胞表面上表达的分子例如，FcγRIIIA,FcγRIIB的结合。流式分选仪能够快速地检查大量的含有文库插入物的单独的细胞例如，10,000,000-100,000,000个细胞每小时Shapiro等人，PracticalFlow,Cytometry,1995。用于分选和检查生物细胞的流式细胞仪是本领域众所周知的。例如，在美国专利号4,347,935、5,464,581、5,483,469、5,602,039、5,643,796和6,211,477中描述了已知的流式细胞仪。其他已知的流式细胞仪是BectonDickinsonandCompany制造的FACSVantageTM系统，和UnionBiometrica制造的COPASTM系统。可以通过本发明的Fc变体介导FcγR介导的效应细胞功能来表征本发明的Fc变体。可以测定的效应细胞功能的实例包括但不限于，抗体依赖性细胞介导的细胞毒性ADCC、吞噬作用、调理作用、调理吞噬作用opsonophagocytosis、C1q结合以及补体依赖性细胞介导的细胞毒性CDC。可以使用本领域技术人员已知用于确定效应细胞功能活性的任何基于细胞的或无细胞的测定对于效应细胞测定，参见Perussia等人，2000，MethodsMol.Biol.121：179-92；Baggiolini等人，1998Experientia,4410：841-8；Lehmann等人，2000J.Immunol.Methods,2431-2：229-42；BrownEJ.1994,MethodsCellBiol.,45：147-64；Munn等人，1990J.Exp.Med.,172：231-237,Abdul-Majid等人，2002Scand.J.Immunol.55：70-81；Ding等人，1998,Immunity8:403-411。具体而言，可以使用本领域技术人员已知的任何标准方法，在效应细胞如天然杀伤细胞中测定本发明的Fc变体的FcγR介导的ADCC活性参见例如，Perussia等人，2000，MethodsMol.Biol.121：179-92。确定本发明的分子的ADCC活性的示例性测定基于51Cr释放测定，包括：用[51Cr]Na2CrO4这种细胞膜可透过的分子一般被用于标记，因为它结合胞浆蛋白，虽然以缓慢动力学从细胞自发释放，但是在靶细胞坏死之后大量地释放标记靶细胞；用本发明的Fc变体调理靶细胞；在微量滴定板上以合适的靶细胞对效应细胞比例来组合调理的放射性标记的靶细胞和效应细胞；在37℃培养细胞的混合物16-18小时；收集上清液；并分析放射性。随后可以确定本发明的分子的细胞毒性，例如，使用以下公式：裂解％＝实验的cpm-靶渗漏cpm去污剂裂解cpm-靶渗漏cpmxl00％。可替代的，裂解％＝ADCC-AICC最大释放-自发释放。特异性裂解可以使用以下公式计算：特异性裂解＝本发明的分子的裂解％-不存在本发明分子时的裂解％。通过改变靶细胞：效应细胞比例或抗体浓度，可以产生图表。表征Fc变体结合C1q和介导补体依赖的细胞毒性CDC的能力的方法是本领域中众所周知的。例如，为了确定C1q结合，可以进行C1q结合ELISA。示例性的测定可以包含以下：在包被缓冲液中用多肽变体或起始多肽对照在4C过夜包被测定板。然后可以洗涤和封闭平板。在洗涤之后，将人C1q的等分试样添加到每个孔，在室温下孵育2小时。进一步的洗涤之后，可以将100uL绵羊抗补体C1q过氧化物酶缀合的抗体添加到每个孔，在室温下孵育1小时。可以再次用洗涤缓冲液洗涤平板，将含有OPDO-苯二胺二氢氯化物Sigma的100uL底物缓冲液添加到每个孔中。可以容许通过黄色的出现观察到的氧化反应进行30分钟，并且通过添加100ul4.5NH2SO4来停止。然后可以在492-405nm读取吸光度。为了评估补体活化，可以进行补体依赖性细胞毒性CDC测定例如Gazzano-Santoro等人，1996，J.Immunol.Methods202:163中所描述。简而言之，可以用缓冲液稀释各种浓度的Fc变体和人补体。表达Fc变体所结合的抗原的细胞可以被稀释到约1×106细胞ml的密度。Fc变体、稀释的人补体和表达抗原的细胞的混合物可以添加到平底组织培养96孔平板上，容许在37C、5％CO2下孵育2小时以促进补体介导的细胞裂解。然后可以向每个孔添加50uL的阿尔玛蓝AccumedInternational，并在37C孵育过夜。用530nm的激发和590nm的发射，使用96孔荧光计测量吸光度。结果可以相对荧光单位RFU表示。可以从标准曲线计算样品浓度，对于感兴趣的Fc变体报告相对于可比较分子即，包含具有未修饰或野生型CH3结构域的Fc区的分子的百分比活性。可以用豚鼠、兔或人血清进行补体测定。可以通过监测细胞内的酶诸如乳酸脱氢酶LDH来检测靶细胞的补体裂解，如描述于Korzeniewski等人，1983,Immunol.Methods643：313-20；和Decker等人，1988,J.ImmunolMethods1151：61-9；或其中靶细胞标记的细胞内标记如铕、铬51或铟111的释放。方法本发明包括将一种或多种本发明的Fc变体如抗体施用于动物，特别是哺乳动物，特别是人，以预防、治疗或改善与疾病、病症或感染相关的一种或多种症状。本发明的Fc变体尤其可用于治疗或预防需要改变效应细胞功能功效如ADCC、CDC的疾病或病症。Fc变体及其组合物特别可用于治疗或预防原发性或转移性肿瘤疾病即癌症和感染性疾病。本发明的分子可以提供于本领域已知的或如本文所述的药学可接受的组合物中。如下所详述，本发明分子可用于治疗或预防癌症特别是被动免疫治疗、自身免疫病、炎性病症或感染性疾病的方法中。本发明Fc变体也可以有利地与本领域已知的其他治疗剂联用，以治疗或预防癌症、自身免疫病、炎性病症或感染性疾病。在一个特定实施方案中，本发明Fc变体可以与单克隆或嵌合抗体、淋巴因子或造血生长因子如IL-2、IL-3和IL-7联用，以提高与该分子相互作用的效应细胞的数量或活性并提高免疫应答。本发明Fc变体也可以有利地与治疗疾病、病症或感染的一种或多种药物联用，这些药物包括例如抗癌药、抗炎药或抗病毒药。相应地，本发明提供了用于通过施用本发明的一种或多种Fc变体而预防、治疗或改善与癌症和相关状况相关的一种或多种症状的方法。尽管不期望被任何作用机制所束缚，本发明的Fc变体其以高于可比较分子的亲和力结合FcγRIIIA和或FcγRIIA，且进一步以低于可比较分子的亲和力结合FcγRIIB，和或所述Fc变体具有增强的效应功能，例如，ADCC、CDC、吞噬作用、调理作用等将导致癌细胞的选择性靶向和有效破坏。本发明还包括将本发明一种或多种Fc变体与本领域技术人员已知的其他疗法联合施用，以治疗或预防癌症，这些疗法包括但不限于：目前标准和实验性的化疗、激素治疗、生物治疗、免疫治疗、放疗或手术。在一些实施方案中，本发明分子可与治疗或预防有效量的一种或多种抗癌药、治疗性抗体或本领域技术人员已知用于治疗和或预防癌症的其他药物联合施用。可以与本发明Fc变体联用的给药方案和治疗的实例是本领域众所周知的，详见其他文献参见例如，PCT公开WO02070007和WO03075957。可用本发明方法和组合物治疗或预防的癌症和相关病症包括但不限于：白血病、淋巴瘤、多发性骨髓瘤、骨和结缔组织肉瘤、脑瘤、乳腺癌、肾上腺癌、甲状腺癌、胰腺癌、垂体癌、眼癌、阴道癌、外阴癌、宫颈癌、子宫癌、卵巢癌、食道癌、胃癌、结肠癌、直肠癌、肝癌、胆囊癌、胆管癌、肺癌、睾丸癌、前列腺癌、阴茎癌；口腔癌、唾液腺癌、咽喉癌、皮肤癌、肾癌、膀胱癌这些病症的综述参见Fishman等人，1985，Medicine，第2版，J.B.LippincottCo.，Philadelphia和Murphy等人，1997，InformedDecisions：TheCompleteBookofCancerDiagnosis,Treatment,andRecovery，VikingPenguin，PenguinBooksU.S.A.，Inc.，UnitedStatesofAmerica。本发明进一步考虑了工程改造本领域已知的任何抗体而用于治疗和或预防癌症和相关病症，使得该抗体包含并入本发明的修饰的CH3结构域的Fc区。在一个特定实施方案中，与不存在本发明所述分子时原发性肿瘤的生长或转移相比，本发明分子如含有变体Fc异源二聚体将原发性肿瘤的生长或癌细胞的转移抑制或降低至少99％、至少95％、至少90％、至少85％、至少80％、至少75％、至少70％、至少60％、至少50％、至少45％、至少40％、至少45％、至少35％、至少30％、至少25％、至少20％或至少10％。本发明包括一种或多种本发明Fc变体用于预防、治疗或控制受试者中与炎性病症相关的一种或多种症状的用途。尽管不期望受任何作用机制所束缚，但是对于FcγRIIB具有增强亲和力的Fc变体将导致活化受体的抑制和因此免疫应答的抑制，且对于治疗和或预防自身免疫性病症具有治疗效力。此外，结合多于一个与炎症病症相关的目标的抗体，如包含变体Fc异源二聚体的双特异性抗体，可以提供相对于单价治疗的增效剂效果。本发明还包括将本发明Fc变体与治疗或预防有效量的一种或多种抗炎药联合施用。本发明也提供预防、治疗或控制与自身免疫病有关的一种或多种症状的方法，还包括将本发明Fc变体与治疗或预防有效量的一种或多种免疫调节剂联合施用于所述受试者。可通过施用本发明Fc变体治疗的自身免疫病的实例包括但不限于：斑秃、强直性脊柱炎、抗磷脂综合征、自身免疫性阿狄森病、肾上腺的自身免疫性贫血、自身免疫性溶血性、自身免疫性肝炎、自身免疫性卵巢炎和睾丸炎、自身免疫性血小板减少、贝切特病、大泡性类天疱疮、心肌病、脂肪便症-皮炎、慢性疲劳免疫机能障碍综合征CFIDS、慢性炎性脱髓鞘性多神经病、丘-施综合征、疤痕性类天疱疮、CREST综合征、冷凝集素病、克罗恩氏病、盘状狼疮、特发性混合型冷球蛋白血症、纤维肌痛-纤维肌炎、肾小球肾炎、格雷夫斯病、格-巴综合征Guillain-Barre、桥本甲状腺炎、特发性肺纤维化、特发性血小板减少性紫癜ITP、IgA神经病、青少年关节炎、扁平苔藓、红斑狼疮、梅尼尔病、混合型结缔组织病、多发性硬化、1型或免疫介导的糖尿病、重症肌无力、寻常天疱疮、恶性贫血、结节性多动脉炎、多发性软骨炎、多腺体综合征、风湿性多肌痛、多肌炎和皮肌炎、原发性无丙种球蛋白血症、原发性胆汁性肝硬化、牛皮癣、牛皮癣性关节炎、雷诺现象Raynauld′sphenomenon、莱特尔综合征、类风湿性关节炎、结节病、硬皮病、斯耶格伦综合征、全身肌强直综合征、系统性红斑狼疮、红斑狼疮、大动脉炎、颞动脉炎巨细胞性动脉炎、溃疡性结肠炎、葡萄膜炎、血管炎如疱疹样皮炎血管炎、白癫风和韦格纳肉芽肿病。炎性病症的实例包括但不限于：哮喘、脑炎、炎性肠病、慢性阻塞性肺病COPD、变应性病症、感染性休克、肺纤维化、未分化脊椎关节病、未分化关节病、关节炎、炎性骨质溶解和慢性病毒或细菌感染所致的慢性炎症。一些自身免疫性病症与炎性疾病有关，因此，所认为的自身免疫性病症和炎性病症有重叠。因此，一些自身免疫性病症可被表征为炎性病症。可按照本发明方法预防、治疗或控制的炎性病症的实例包括但不限于：哮喘、脑炎、炎性肠病、慢性阻塞性肺病COPD、变应性病症、感染性休克、肺纤维化、未分化脊椎关节病、未分化关节病、关节炎、炎性骨质溶解和慢性病毒或细菌感染所致的慢性炎症。也可以利用本发明Fc变体减轻患有炎性病症的动物，特别是哺乳动物的炎症。在一个特定实施方案中，与未施用所述分子的动物的炎症相比，本发明Fc能将动物的炎症减轻至少99％、至少95％、至少90％、至少85％、至少80％、至少75％、至少70％、至少60％、至少50％、至少45％、至少40％、至少45％、至少35％、至少30％、至少25％、至少20％或至少10％。本发明进一步考虑了工程改造本领域已知的任何抗体而用于治疗和或预防自身免疫性疾病或炎性病症，使得该抗体包含本发明的变体Fc异源二聚体。本发明也包括治疗或预防受试者的感染性疾病的方法，所述方法包括施用治疗或预防有效量的本发明一种或多种Fc变体。可用本发明Fc变体治疗或预防的感染性疾病是包括但不限于病毒、细菌、真菌、原生动物和病毒等感染物引起的。可用本发明Fc变体与本发明方法一起治疗或预防的病毒性疾病包括但不限于以下所致的疾病：甲型肝炎病毒、乙型肝炎病毒、丙型肝炎病毒、流感病毒、水痘病毒、腺病毒、I型单纯疱疹病毒HSV-I、II型单纯疱疹病毒HSV-II、牛疫病毒、鼻病毒、艾柯病毒、轮状病毒、呼吸道合胞病毒、乳头瘤病毒、乳多空病毒、巨细胞病毒、棘状病毒、虫媒病毒、汉他病毒huntavirus、柯萨奇病毒、腮腺炎病毒、麻疹病毒、风疹病毒、脊髓灰质炎病毒、天花病毒、EB病毒、I型人体免疫缺陷病毒病毒HIV-I、II型人体免疫缺陷病毒病毒HIV-II以及病毒性疾病如病毒性脑膜炎、脑炎、登革热或天花的病原体。可用本发明Fc变体和本发明方法一起治疗或预防的细菌所致的细菌性疾病包括但不限于：分枝杆菌立克次体病、支原体病、奈瑟菌病、肺炎链球菌S.pneumonia病、布氏疏螺旋体Borreliaburgdorferi病莱姆病、炭疽杆菌Bacillusantracis病炭疽、破伤风、链球菌病、葡萄球菌病、分支杆菌病、破伤风、百日咳、霍乱、鼠疫、白喉、衣原体病、金黄色葡萄球菌S.aureus病和军团菌病。可用本发明分子和本发明方法一起治疗或预防的原生动物所致的原生动物病包括但不限于：利什曼原虫病、克氏原虫病kokzidioa、锥虫病或疟疾。可用本发明分子和本发明方法一起治疗或预防的寄生虫所致的寄生虫疾病包括但不限于：衣原体病和立克次体病。在一些实施方案中，本发明Fc变体可与治疗或预防有效量的一种或多种本领域技术人员已知用于治疗和或预防感染性疾病的其他治疗剂联合施用。本发明考虑将本发明分子与本领域技术人员已知用于治疗和或预防感染性疾病的其他分子联用，所述其他分子包括但不限于抗生素、抗真菌剂和抗病毒剂。本发明提供了方法和药物组合物，所述组合物包含本发明的Fc变体例如抗体、多肽。本发明还提供了通过将有效量的至少一种本发明的Fc变体，或包含至少一种本发明的Fc变体的药物组合物施用于受试者而治疗、预防和改善一种或多种与疾病、病症或感染相关的症状的方法。一方面，该Fc变体是基本纯化的即基本不含限制其作用或产生不良副作用的物质，这包括同源二聚体和其他细胞材料。在一个特定实施方案中，受试者是动物，如哺乳动物，包括非灵长动物如牛、猪、马、猫、狗、大鼠等和灵长动物例如猴，如猕猴和人。在一个特定实施方案中，受试者是人。在又另一个特定实施方案中，本发明抗体是来自与受试者相同的物种。组合物的施用途径取决于所治疗的疾病。例如，静脉内注射可优选用于治疗全身性病症，如淋巴癌或已经转移的肿瘤。技术人员无需过多实验，结合标准的剂量反应研究，即可确定该组合物的施用剂量。在作出那些确定中考虑的相关环境因素包括所治疗的疾病，所施用组合物的选择，患者个体的年龄、体重和反应，以及患者症状的严重性。根据状况，可通过口服、肠胃外、鼻内、阴道、直肠、舌、舌下、含服、颊内和或透皮途径将该组合物施用于患者。因此，无需过多实验，可以通过本领域众所周知方式将组合物设计成口服、舌、舌下、含服或颊内施用的形式，例如用惰性稀释剂或用可食用载体。该组合物可以包封在明胶胶囊中，或者压成片剂。出于口服治疗性施用的目的，本发明的药物组合物可掺入赋形剂，以片剂、含片、胶囊剂、酏剂、悬浮剂、糖浆剂、薄片、咀嚼剂等形式使用。片剂、丸剂、胶囊剂、含片等也可含有粘合剂、接受剂recipient、崩解剂、润滑剂、甜味剂和或调味剂。粘合剂的一些实例包括微晶纤维素、黄蓍胶和明胶。赋形剂的实例包括淀粉和乳糖。崩解剂的一些实例包括海藻酸、玉米淀粉等。润滑剂的实例包括硬脂酸镁和硬脂酸钾。助流剂的实例是胶体二氧化硅。甜味剂的一些实例包括蔗糖、糖精等。调味剂的实例包括薄荷、水杨酸甲酯、橙调味剂等。用于制备这些各种组合物的材料应该是药物纯的，且在所用含量下无毒的。可以通过肠胃外途径，如静脉内、肌肉内、鞘内和或皮下注射施用本发明的药物组合物。可以通过将本发明组合物掺入溶液或悬浮液中进行肠胃外施用。这类溶液或悬浮液还可包含无菌稀释剂，如注射用水、盐水溶液、固定油、聚乙二醇、甘油、丙二醇和或其他合成溶剂。肠胃外制剂还可包含抗菌剂如苄醇和或对羟基苯甲酸甲酯，解毒剂如抗坏血酸和或亚硫酸氢钠，以及螯合剂如EDTA。也可添加缓冲剂，如乙酸盐、柠檬酸盐和磷酸盐，以及涨度调节剂，如氯化钠和右旋糖。肠胃外制剂可封装在安瓿、一次性注射器和或玻璃或塑料制成的多剂量小瓶中。直肠施用包括将该组合物施用于直肠和或大肠。可使用栓剂和或灌肠剂来实现这种施用。可用本领域已知方法制备栓剂。透皮施用包括通过皮肤经皮吸收该组合物。透皮制剂包括贴剂、油膏剂、乳膏剂、凝胶剂、软膏剂等。本发明组合物可经鼻施用于患者。如本文所使用，经鼻施用或鼻施用包括将该组合物施用于患者鼻孔和或鼻腔的粘膜。可以根据本发明的方法使用本发明的药物组合物而用于预防、治疗或改善一种或多种与疾病、病症或感染相关的症状。可以考虑，本发明的药物组合物是无菌的，且是用于施用于受试者的合适形式。在一个实施方案中，本发明组合物是基本不含内毒素和或相关热原物质的无热原制剂。内毒素包括限定在微生物内并且在微生物破坏或死亡时释放的毒素。热原物质也包括来自细菌和其他微生物外膜的诱导发热的热稳定性物质糖蛋白。如果施用于人，这些物质都可以引起发热、低血压和休克。由于潜在的有害作用，从静脉内施用的药物溶液中除去即使很少量的内毒素，也是有利的。食品药品管理局＂FDA＂已经规定，在静脉内施用应用中，每小时上限是5内毒素单位EU剂量千克体重TheUnitedStatesPharmacopeialConvention，PharmacopeialForum261:2232000。当治疗性蛋白质施用量为几百或几千毫克千克体重时，正如单克隆抗体的情况，除去甚至痕量的内毒素也是有利的。在特定的实施方案中，该组合物中的内毒素和热原水平小于10EUmg，或小于5EUmg，或小于1EUmg，或小于0.1EUmg，或小于0.01EUmg，或小于0.001EUmg。本发明提供预防、治疗或改善与疾病、病症或感染有关的一种或多种症状的方法，所述方法包括：a将一个剂量的预防或治疗有效量的含有一种或多种Fc变体的组合物施用于需要其的受试者，和b随后施用一个或多个剂量的所述Fc变体，以将Fc变体的血浆浓度维持在所需水平如约0.1-100μgml，它连续结合抗原。在一个特定实施方案中，将Fc变体的血浆浓度维持在10μgml、15μgml、20μgml、25μgml、30μgml、35μgml、40μgml、45μgml或50μgml。在一个特定实施方案中，所述待施用Fc变体的有效量为每剂量至少1mgkg至8mgkg。在另一个特定实施方案中，所述待施用Fc变体的有效量为每剂量至少4mgkg至5mgkg。在又另一个特定实施方案中，所述待施用Fc变体的有效量为每剂量50mg至250mg。在仍另一个特定实施方案中，所述待施用Fc变体的有效量为每剂量100mg至200mg。本发明也包括预防、治疗或改善与疾病、病症或感染有关的一种或多种症状的方案，其中将Fc变体与Fc变体和或变体融合蛋白以外的治疗如预防或治疗剂联用。本发明部分基于下列认识：本发明Fc变体能加强其他癌症治疗包括现有的标准治疗和实验性化疗的作用、与其协同作用、提高其有效性、提高其耐受性和或降低其副作用。本发明联合疗法具有累加效力、累加治疗作用或协同作用。本发明联合疗法使得能够与Fc变体联合采用低剂量治疗如预防或治疗剂来预防、治疗或改善与疾病、病症或感染有关的一种或多种症状，和或以较低频率将这类预防或治疗剂施用于患有疾病、病症或感染的受试者，以提高所述受试者的生活质量和或实现预防或治疗作用。另外，本发明的联合疗法降低或避免与施用现有单一药物治疗和或现有联合治疗有关的不良或有害的副作用，进而提高患者对该治疗方案的顺应性。可与本发明Fc变体联用的许多分子是本领域众所周知的。参见例如，PCT公开WO02070007、WO03075957和美国专利公开2005064514。本发明提供了试剂盒，所述试剂盒在一个或多个容器中包含一种或多种Fc变体，所述Fc变体具有改变的与FcγR和或C1q的结合亲和力和改变的特异性结合抗原的ADCC和或CDC活性，所述Fc变体与可检测试剂、治疗剂或药物缀合或融合，其用于监测、诊断、预防、治疗或改善一种或多种与疾病、病症、或感染相关的症状。仅仅出于举例的目的，本发明包括但不限于如下技术方案：技术方案1.一种分离的异源二聚体Fc构建体，包含修饰的异源二聚的CH3结构域，所述修饰的CH3结构域包含：与野生型CH3结构域多肽相比包含至少三个氨基酸修饰的第一修饰的CH3结构域多肽，和与野生型CH3结构域多肽相比包含至少三个氨基酸修饰的第二修饰的CH3结构域多肽；其中所述第一和第二CH3结构域多肽中的至少一个包含K392J的氨基酸修饰，其中J选自L、I或侧链体积基本上不大于K的侧链体积的氨基酸；其中所述第一和第二修饰的CH3结构域多肽优先形成具有至少约74℃的熔解温度Tm和至少95％的纯度的异源二聚的CH3结构域；且其中至少一个氨基酸修饰不是在所述第一和所述第二CH3结构域多肽之间的接口处的氨基酸的修饰。技术方案2.根据技术方案1所述的分离的异源二聚体Fc构建体，包含至少一个T350X修饰，其中X是选自缬氨酸、异亮氨酸、亮氨酸、蛋氨酸、及其衍生物或变体的天然或非天然氨基酸。技术方案3.根据技术方案1所述的分离的异源二聚体Fc构建体，包含至少一个T350V修饰。技术方案4.根据技术方案1-3中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述修饰的CH3结构域具有至少约75℃或更高的熔解温度Tm。技术方案5.根据技术方案4所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述修饰的CH3结构域具有约77℃或更高的Tm。技术方案6.根据技术方案4-5中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述修饰的CH3结构域具有约80℃或更高的Tm。技术方案7.根据技术方案1-6中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中至少一个CH3结构域多肽是包含L351、F405和Y407中的至少一个的氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽。技术方案8.根据技术方案1-7中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中至少一个CH3结构域多肽是包含T366的氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽。技术方案9.根据技术方案1-8中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述第一CH3结构域多肽是包含在位置L351、F405和Y407处的氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽，并且所述第二CH3结构域多肽是包含在位置T366、K392和T394处的氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽。技术方案10.根据技术方案9所述的分离的异源二聚体Fc构建体，所述第一CH3结构域多肽包含氨基酸修饰L351Y、F405A和Y407V，并且所述第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T366L、K392M和T394W。技术方案11.根据技术方案9所述的分离的异源二聚体Fc构建体，所述第一CH3结构域多肽包含氨基酸修饰L351Y、F405A和Y407V，并且所述第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T366L、K392L和T394W。技术方案12.根据技术方案9所述的分离的异源二聚体Fc构建体，所述第一CH3结构域多肽包含氨基酸修饰L351Y、F405A和Y407V，并且所述第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T366I、K392M和T394W。技术方案13.根据技术方案9所述的分离的异源二聚体Fc构建体，所述第一CH3结构域多肽包含氨基酸修饰L351Y、F405A和Y407V，并且所述第二CH3结构域多肽包含氨基酸修饰T366I、K392L和T394W。技术方案14.根据技术方案1-11中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述第一和第二CH3结构域多肽中的至少一个是包含在位置S400处的氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽。技术方案15.根据技术方案12所述的分离的异源二聚体Fc构建体，包含所述修饰S400Z，其中Z选自带正电的氨基酸和带负电的氨基酸。技术方案16.根据技术方案1-13中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，所述第一CH3结构域多肽包含选自S400E和S400R的氨基酸修饰。技术方案17.根据技术方案1-11中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述第一和第二CH3结构域多肽中的至少一个是包含在位置N390处的氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽。技术方案18.根据技术方案15所述的分离的异源二聚体Fc构建体，包含所述修饰N390Z，其中Z选自带正电的氨基酸和带负电的氨基酸。技术方案19.根据技术方案1-16中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，所述第二CH3结构域包含所述氨基酸修饰N390R。技术方案20.根据技术方案1-17中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述第一CH3结构域多肽是包含所述氨基酸修饰S400E的修饰的CH3结构域多肽并且所述第二CH3结构域多肽是包含所述氨基酸修饰N390R的修饰的CH3结构域多肽。技术方案21.根据技术方案1-18中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述第一和第二CH3结构域多肽中的每一个是修饰的CH3结构域多肽，一个所述修饰的CH3结构域多肽包含所述氨基酸修饰Q347R且另一个所述修饰的CH3结构域多肽包含所述氨基酸修饰K360E。技术方案22.根据技术方案1-4中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中至少一个CH3结构域多肽是包含K409和T411中的至少一个的氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽。技术方案23.根据技术方案22所述的分离的异源二聚体Fc构建体，包含K409F、T411E和T411D中的至少一个。技术方案24.根据技术方案1-23中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中至少一个CH3结构域多肽是包含D399氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽。技术方案25.根据技术方案24所述的分离的异源二聚体Fc构建体，包含D399R和D399K中的至少一个。技术方案26.根据技术方案1-25中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述第一CH3结构域多肽是包含选自K409F、T411E和T411D的至少一个氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽，并且所述第二CH3结构域多肽是包含选自Y407A、Y407I、Y407V、D399R和D399K的至少一个氨基酸修饰的修饰的CH3结构域多肽。技术方案27.根据技术方案1-26中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，包含包含氨基酸修饰T366V、T366I、T366A、T366M和T366L中的一个的第一修饰的CH3结构域；和包含所述氨基酸修饰L351Y的第二修饰的CH3结构域。技术方案28.根据技术方案1-27中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，包含包含氨基酸修饰K392L或K392E中的一个的第一修饰的CH3结构域；和包含所述氨基酸修饰S400R或S400V中的一个的第二修饰的CH3结构域。技术方案29.一种分离的异源二聚体Fc构建体，包含包含第一修饰的CH3结构域多肽和第二修饰的CH3结构域多肽的修饰的CH3结构域，每个修饰的CH3结构域多肽包含至少四个氨基酸突变，其中所述第一和所述第二修饰的CH3结构域多肽中的至少一个包含选自N390Z和S400Z的突变，其中Z选自带正电的氨基酸和带负电的氨基酸，并且其中所述第一和第二修饰的CH3结构域多肽优先形成具有至少约70℃的熔解温度Tm和至少90％的纯度的异源二聚的CH3结构域，技术方案30.一种分离的异源二聚体Fc构建体，包含包含第一修饰的CH3结构域多肽和第二修饰的CH3结构域多肽的修饰的CH3结构域，每个修饰的CH3结构域多肽包含至少三个氨基酸突变，其中所述第一和所述第二修饰的CH3结构域多肽中的一个包含选自T411E和T411D的突变，且其中所述第一和第二修饰的CH3结构域多肽优先形成具有至少约70℃的熔解温度Tm和至少90％的纯度的异源二聚的CH3结构域。技术方案31.根据技术方案29-30中任一项所述的分离的异源二聚体，所述第一修饰的CH3结构域多肽包含在位置F405和Y407处的氨基酸修饰并且所述第二修饰的CH3结构域多肽包含在位置T394处的氨基酸修饰。技术方案32.根据技术方案31所述的分离的异源二聚体，所述第一修饰的CH3结构域多肽包含在位置L351处的氨基酸修饰。技术方案33.根据技术方案31所述的分离的异源二聚体，所述第二修饰的CH3结构域多肽包含位置T366和K392中的至少一个的修饰。技术方案34.根据技术方案29-34中任一项所述的分离的异源二聚体，其中所述修饰的CH3结构域具有至少约75℃的熔解温度Tm并且以至少约95％的纯度形成。技术方案35.根据技术方案29-34中任一项所述的分离的异源二聚体，至少一个修饰的CH3结构域多肽包含N390R、S400E和S400R中的至少一个的氨基酸修饰。技术方案36.根据技术方案29-35中任一项所述的分离的异源二聚体，所述第一和第二修饰的CH3结构域多肽中的一个包含位置347的氨基酸修饰而另一个修饰的CH3结构域多肽包含在位置360处的氨基酸修饰。技术方案37.根据技术方案29-36中任一项所述的分离的异源二聚体，所述第一和第二修饰的CH3结构域多肽中的至少一个包含T350V的氨基酸修饰。技术方案38.根据技术方案29-37中一项所述的分离的异源二聚体，所述第一修饰的CH3结构域多肽包含选自L351Y、F405A和Y407V至少一个氨基酸修饰；并且所述第二修饰的CH3结构域多肽包含选自T366L、T366I、K392L、K392M和T394W的至少一个氨基酸修饰。技术方案39.根据技术方案29-30中任一项所述的分离的异源二聚体，所述第一修饰的CH3结构域多肽包含在位置D399和Y407处的氨基酸修饰，并且第二修饰的CH3结构域多肽包含在位置K409和T411处的的氨基酸修饰。技术方案40.根据技术方案39所述的分离的异源二聚体，所述第一CH3结构域多肽包含在位置L351处的氨基酸修饰，并且所述第二修饰的CH3结构域多肽包含在位置T366和K392处的氨基酸修饰。技术方案41.根据技术方案40所述的分离的异源二聚体，所述第一和第二CH3结构域多肽中的至少一个包含T350V的氨基酸修饰。技术方案42.根据技术方案39-41中任一项所述的分离的异源二聚体，其中所述修饰的CH3结构域具有至少约75℃或更高的熔解温度Tm并且以至少约95％的纯度形成。技术方案43.根据技术方案39所述的分离的异源二聚体，所述第一修饰的CH3结构域多肽包含选自L351Y、D399R、D399K、S400D、S400E、S400R、S400K、Y407A和Y407V的氨基酸修饰；并且所述第二修饰的CH3结构域多肽包含选自T366V、T366I、T366L、T366M、N390D、N390E、K392L、K392I、K392D、K392E、K409F、K409W、T411D和T411E的氨基酸修饰。技术方案44.一种分离的异源二聚体Fc构建体，包含修饰的CH3结构域，所述修饰的CH3结构域包含包含氨基酸修饰L351Y、F405A和Y407V的第一修饰的CH3结构域多肽；和包含氨基酸修饰T366I、K392M和T394W的第二修饰的CH3结构域多肽。技术方案45.一种分离的异源二聚体Fc构建体，包含修饰的CH3结构域，所述修饰的CH3结构域包含包含氨基酸修饰L351Y、F405A和Y407V的第一修饰的CH3结构域多肽；和包含氨基酸修饰T366I、K392L和T394W的第二修饰的CH3结构域多肽。技术方案46.一种分离的异源二聚体Fc构建体，包含修饰的CH3结构域，所述修饰的CH3结构域包含包含氨基酸修饰L351Y、F405A和Y407V的第一修饰的CH3结构域多肽；和包含氨基酸修饰T366L、K392M和T394W的第二修饰的CH3结构域多肽。技术方案47.一种分离的异源二聚体Fc构建体，包含修饰的CH3结构域，所述修饰的CH3结构域包含包含氨基酸修饰L351Y、F405A和Y407V的第一修饰的CH3结构域多肽；和包含氨基酸修饰T366L、K392L和T394W的第二修饰的CH3结构域多肽。技术方案48.根据技术方案1-47中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，包含基于G型免疫球蛋白IgG的修饰的Fc区。技术方案49.根据技术方案48所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述IgG是IgG2和IgG3中的一个。技术方案50.根据技术方案1-47中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，包含基于免疫球蛋白MIgM的修饰的Fc区。技术方案51.根据技术方案1-47中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，包含基于免疫球蛋白AIgA的修饰的Fc区。技术方案52.根据技术方案1-47中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，包含基于免疫球蛋白DIgD的修饰的Fc区。技术方案53.根据技术方案1-47中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，包含基于免疫球蛋白EIgE的修饰的Fc区。技术方案54.根据技术方案1-49中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述异源二聚体是双特异性抗体。技术方案55.根据技术方案1-49中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中所述异源二聚体是多特异性抗体。技术方案56.一种组合物，包含根据技术方案1-55中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体和药学上可接受的载体。技术方案57.一种哺乳动物宿主细胞，包含编码根据技术方案1-55中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体的核酸。技术方案58.根据技术方案1-55中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，包含至少一种治疗性抗体。技术方案59.根据技术方案1-55中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体，其中其中所述异源二聚体包含选自由以下组成的组的至少一种治疗性抗体：阿巴伏单抗、阿达木单抗、阿伦珠单抗、奥罗格雷、巴匹珠单抗、巴利昔单抗、贝利木单抗、贝伐珠单抗、briakinumab、卡那单抗、卡妥索单抗、塞舍珠单抗、西妥昔单抗、达克珠单抗、地舒单抗、依法珠单抗、加利昔单抗、吉妥珠单抗奥佐米星、戈利木单抗、替伊莫单抗、英利昔单抗、伊匹木单抗、鲁昔单抗、美泊利单抗、莫他珠单抗、莫罗单抗、mycograb、那他珠单抗、尼妥珠单抗、奥瑞珠单抗、奥法木单抗、奥马珠单抗、帕利珠单抗、帕尼单抗、培妥珠单抗、雷珠单抗、瑞利珠单抗、利妥昔单抗、替利珠单抗、托珠单抗atlizumab、托西莫单抗、曲妥珠单抗、ProxiniumTM、RencarexTM、优特克单抗和扎芦木单抗。技术方案60.一种治疗患有由癌抗原表征的癌症的患者中的癌症的方法，所述方法包括向所述患者使用治疗有效量的根据技术方案1-59中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体。技术方案61.一种治疗患有由免疫抗原表征的免疫病症的患者中的免疫病症的方法，所述方法包括向所述患者施用治疗有效量的根据技术方案1-59中任一项所述的分离的异源二聚体Fc构建体。实施例给出下列实施例用来说明本发明的实施。它们不是用来限制或定义本发明的整个范围。实施例1：具有异源二聚体Fc结构域的二价单特异性抗体的产生。使用针对人哺乳动物表达优化的密码子经由基因合成构建编码抗体重链和轻链的基因。从已知Her2neu结合Ab生成Fab序列CarterP.等人1992HumanizationofanantiP185Her2antibodyforhumancancertherapy.ProcNatlAcadSci89,4285.且Fc是IgG1同种型SEQIDNO:1。将最终基因产物亚克隆到哺乳动物表达载体pTT5中NRC-BRI,CanadaDurocher,Y.,Perret,S.&Kamen,A.High-levelandhigh-throughputrecombinantproteinproductionbytransienttransfectionofsuspension-growinghumanHEK293-EBNA1cells.Nucleicacidsresearch30,E92002。经由pTT5模板载体的位点定向诱变引入CH3结构域中的突变。对于进行的修饰的CH3结构域突变的列表，参见表1和表6和表7。为了估计异源二聚体的形成和确定同源二聚体相比于异源二聚体的比例，设计了两条具有不同大小的C-末端延伸的异源二聚体重链具体地，具有C-末端的His标记的链A和具有C-末端mRFP加StrepTagII的链B。该分子量的差异使在非还原性SDS-PAGE中同源二聚体相比于异源二聚体存在差异，如图25A中所示。用1mgmL25kDa聚乙烯亚胺PEI,Polysciences以2.5:1的PEI:DNA比例在指数生长期1.5至2百万个细胞mL转染HEK293细胞。RaymondC.等人Asimplifiedpolyethylenimine-mediatedtransfectionprocessforlarge-scaleandhigh-throughputapplications.Methods.551:44-512011。为了确定用于形成异源二聚体的最佳浓度范围，以三个不同比例的两条重链转染DNA。例如，以2ml培养体积和转染DNA进行该步骤，所述转染DNA由下列构成：5％GFP、45％鲑精DNA、25％轻链和25％总重链，其中以10％65％、20％55％、40％35％的3个不同相对比例链_AHis链_BmRFP取样重链A质粒具有C末端His标记和重链B质粒具有C-末端StrepTagII加RFP以65％55％35％或10％20％40％确定WT_HisWT_mRFP异源二聚体的表观1:1表达比例接近于DNA比例20％55％。在转染后4至48小时，在F17无血清培养基Gibco中，添加TN1蛋白胨至0.5％的终浓度。通过SDS-PAGE分析表达的抗体，以确定用于形成最佳异源二聚体的重链和轻链的最佳比例参见图25B和C。如上所述选择的DNA比例，例如AZ33和AZ34的50％轻链质粒、25％重链A质粒、25％重链B，与5％GFP以及45％鲑精DNA，用于转染150mL细胞培养物。5-6天后收获转染的细胞，以4000rpm离心后收集培养液且用0.45μm滤器澄清。对于用于进一步分析生成的具有CH3突变的每种抗体，对于在按比例放大转染测定中使用的轻和重链A和B质粒的百分比列表，包括纯度和熔解温度的测定值，参见下表2。表2：实施例2：具有异源二聚体Fc结构域的二价单特异性抗体的纯化。将澄清的培养液上样到MabSelectSuReGEHealthcare蛋白A柱上，且用10倍柱体积的PBS缓冲液pH7.2进行洗涤。用10倍柱体积的柠檬酸盐缓冲液pH3.6洗脱抗体，合并的级分含有用pH11的TRIS中和的抗体。最后使用Econo-Pac10DG柱Bio-Rad将蛋白脱盐。通过在25℃在PBS中以1:10,000的比例将抗体与肠激酶NEB孵育过夜而去除在重链B上的C末端mRFP标记。通过凝胶过滤从混合物纯化抗体。对于凝胶过滤，将3.5mg抗体混合物浓缩至1.5mL，且以1mLmin的流速经由AKTAExpressFPLC上样至Sephadex200HiLoad16600200pg柱GEHealthcare。以1mLmin的流速使用pH7.4的PBS缓冲液。收集对应于纯化抗体的级分，浓缩至约1mgmL且储存于-80℃。使用非还原性SDS-PAGE和质谱测定与同源二聚体相比异源二聚体的形成。在肠激酶EK处理前，在4-12％梯度SDS-PAGE、非还原凝胶上运行蛋白A纯化的抗体，以确定形成的异源二聚体的百分比参见图26。对于质谱，在与WatersQ-TOF2质谱仪连接的Agilent1100HPLC系统上进行所有TrapLCMSESI-TOF实验。将5μg凝胶过滤纯化的抗体注射到蛋白MicroTrap1.0×8.0mm中，用1％乙腈洗涤8分钟，1至20％乙腈0.1％甲酸的梯度2分钟，然后用20至60％乙腈0.1％甲酸的梯度洗脱20分钟。将洗脱物30-50μLmin引导至光谱仪，每秒获得谱mz800至4,000。参见图28。除了AZ12和AZ14其中每种具有大于85％异源二聚体形成，选择具有大于90％异源二聚体的变体用于进一步分析。实施例3：使用差示扫描量热法DSC确定具有异源二聚体Fc结构域的二价单特异性抗体的稳定性。使用GEVP-毛细管仪器进行所有DSC实验。将蛋白缓冲交换至PBSpH7.4中，且稀释至0.4至0.5mgm，将0.137ml上样至样品室，且用1℃min的扫描速率20至100℃测量。使用Origin软件GEHealthcare分析数据，减去PBS缓冲液背景。参见图27。对于测试的变体和确定的熔解温度的列表，参见表3。对于具有70℃和以上的熔解温度的变体和对于每种变体的特定Tm的列表，参见表4。表3：与同源二聚体形成相比具有90％或更多异源二聚体形成的IgG1抗体中变体CH3结构域的熔解温度测量值表4：IgG1抗体中选择“变体”CH3结构域的熔解温度测量值变体Tm℃变体Tm℃变体Tm℃变体Tm℃野生型81.5AZ4270AZ7371AZ9171.5对照169AZ4471.5AZ7471AZ9271.5对照269AZ4670.5AZ7570AZ9371.5AZ12＞77AZ4770.5AZ7671.5AZ9473.5AZ14＞77AZ4870.5AZ7771AZ9572AZ1571.5AZ4971AZ7870AZ9870AZ1771AZ6371.5AZ7970AZ10071.5AZ1970.5AZ6474AZ8170.5AZ10174AZ2070AZ6573AZ8271AZ10674AZ2170AZ6672.5AZ8371AZ11471AZ2570.5AZ6772AZ8471.5AZ11570AZ2970AZ6872AZ8571.5AZ12271AZ3071AZ6971AZ8672.5AZ12370AZ3271.5AZ7075.5AZ8771AZ12470AZ3374AZ7171AZ8872AZ12970.5AZ3473.5AZ7270.5AZ8972.5AZ13071实施例4：使用表面等离子共振评价FcγR结合使用BioRadProteOnXPR36仪器在25℃用10mMHEPES，150mMNaCl，3.4mMEDTA，和0.05％Tween20pH7.4进行所有结合实验。通过以25μLmin将4.0μgmL注入10mMNaOAcpH4.5中而将重组HER-2neup185,ErbB-2eBiosciences,Inc.捕获在活化的GLM传感芯片上，直到固定约3000共振单位RU，猝灭剩余的活性基团。通过在注射缓冲液以建立稳定基线后当以25μLmin注射240s导致约500RU时结合Her-2neu蛋白而将40μgmL纯化的包含修饰的CH3结构域的抗HER-2neu抗体间接捕获在传感芯片上。以60μLmin注射FcγRCD16af同种异型和CD32b浓度6000、2000、667、222、和74.0nM持续120s，和180s解离相，以获得一组结合传感图。使用平衡拟合模型从结合等温线确定获得的KD值，报告值作为三次独立运行的平均值。用野生型IgG1Fc结构域进行比较，且结合表示为WTkD与变体kD的比值参见，表5。表5：不依赖于CD16a和CD32b的野生型IgG1与修饰的CH3结构域抗体结合的kD比值实施例5：使用Fc_CH3工程改造-支架11a和1b合理设计Fc变体且开发AZ17-62和AZ133-AZ2438为了获得具有高稳定性和纯度的AZ变体，采用了上述结构和计算策略。参见图24。例如，AZ8的深入结构-功能分析提供了对于与野生型人IgG1相比AZ8,L351Y_V397S_F405A_Y407VK392V_T394W的每个引入突变的详细理解，且表明重要的核心异源二聚体突变是L351Y_F405A_Y407VT394W，而V397S,K392V对于异源二聚体形成是无关的。核心突变L351Y_F405A_Y407VT394W在本文中被称为“支架1”突变。此外，分析显示，相对于野生型WT同源二聚体形成丢失的重要接口热点是WT-F405-K409、Y407-T366的相互作用和Y407-Y407和-F405的包装参见图29。这反映在包装、腔体和MD分析中，其显示在环区D399-S400-D401参见图30和在K370的相关的β-折叠中的较大构象差异。这导致K409-D399的链间相互作用的损失参见图30和K370与E357强氢键的减弱K370不再与S364和E357直接接触，但完全是溶剂暴露的。在WTIgG1CH3结构域中，这些区域拴系在边缘处的接口，保护核心相互作用免于大量溶剂竞争，且增加有利的疏水性范德华相互作用的动态发生。其结果是与WT相比AZ8的更低埋藏的表面区域和疏水核心的更高的溶剂可接近性。这表明对于AZ8相比于WT稳定性的更低稳定性的最重要因素是aWT-F405-K409相互作用和F405的包装的损失，和bY407-Y407和Y407-T366的强包装相互作用的损失。参见，图29。因此，我们鉴定了负责AZ8相比于WT的低稳定性的关键残基序列基序。为了改进AZ8的稳定性和异源二聚体特异性，因此将随后的阳性设计工程改造努力专注于将位置399-401的环构象稳定在更'封闭'-WT样构象中参见图30且对于在位置T366和L368处的疏水核心的总体稍微减少的更松散的包装进行补偿参见图29。为了实现在位置399-401处的环构象的这种稳定性，使用所述计算方法来评价不同的靶向设计思路。具体而言，分析对于Fc变体AZ8的3种不同的独立选择，以优化鉴定的关键区域用于改进稳定性。首先，评价在位置K409和F405A附近的结合袋的更好的疏水性包装以便既保护疏水核心又稳定399-400的环构象参见图30。这些包括但不限于在位置F405和K392处的额外点突变。其次，评价用于改进在位置399-409处的静电相互作用的选择，以稳定399-400的环构象且保护疏水核心。这包括但不限于在位置T411和S400处的额外点突变。第三，评价在T366、T394W和L368核心包装位置的结合袋以改进核心疏水包装参见图29。这些包括但不限于在位置T366和L368处的额外点突变。在计算机芯片上测试不同独立的阳性设计思路，且实验验证使用计算工具的某些良好变体AZ17-AZ62，用于如实施例1-4中所述的表达和稳定性。对于包含该设计策略的具有70℃或更高的熔解温度的某些基于Fc的异源二聚体构建体的列表，参见表4。Fc变体AZ33是开发Fc变体的实例，其中支架1进行修饰，导致支架1a突变以改进稳定性和纯度。基于AZ8设计该Fc变体，其目标在于改进在位置392-394-409和366处的疏水包装以便既保护疏水核心又稳定399-400的环构象。该Fc变体AZ33异源二聚体具有两个不同于核心突变AZ8、K392M和T366I的额外点突变。突变T366I_K392M_T394WF405A_Y407V在本文中被称为“支架1a”突变。设计突变K392M以改进K409和F405A位附近的腔体的包装以便保护疏水核心且稳定399-400的环构象参见图31。设计T366I以改进核心疏水包装且消除T394W链的同源二聚体的形成参见图29。对于AZ33的实验数据显示相对于其他阴性设计Fc变体例如AZ8Tm68℃的显著改进的稳定性，其中AZ33具有74℃的Tm和98％的异源二聚体含量。参见，图25C。在Fc变体异源二聚体的第三阶段设计中使用支架1突变开发Fc变体尽管AZ33提供了相对于初始起始变体AZ8的显著的稳定性和特异性或纯度改进，但是我们的分析表明，可以用进一步氨基酸修饰且使用AZ33的实验数据和上述设计方法进行对Fc变体异源二聚体的稳定性的进一步改进。已经独立地测试了不同设计思路的表达和稳定性，但是独立的设计思路是可转移的，且最成功的异源二聚体将含有不同设计的组合。具体而言，为了优化AZ8包装，已经不依赖于优化残基L366T-L368处的核心包装的突变而评价K409-F405A-K392附近的腔体处的突变。这两个区域366-368和409-405-392相互远离，且被认为是独立的。例如，已经关于在409-405-392、但不是在366-368处的包装对Fc变体AZ33进行优化，因为这些优化突变是分开评价的。366-368突变的比较表明，相比于T366和还有T366I在Fc变体AZ33的开发中使用的点突变，T366L具有改进的稳定性。因此，提出的实验数据立即表明通过引入T366L而非T366I例如的AZ33的进一步优化。因此，CH3结构域中的氨基酸突变T366L_K392M_T394WF405A_Y407V在本文中被称为“支架1b”突变。以类似的方式，已经分析了完整的实验数据以鉴定可以用于进一步改进目前的Fc变体异源二聚体AZ33的点突变。通过上述计算方法对这些鉴定的突变进行分析，且排序以产生基于AZ33的额外Fc变体异源二聚体的列表，如表6中所示。实施例6：使用Fc_CH3工程改造-支架2a和b合理设计Fc变体且开发AZ63-101和AZ2199-AZ2524为了改进初始阴性设计阶段Fc变体AZ15的稳定性和纯度，采用了上述结构和计算策略参见，图24。例如，Fc变体AZ15的深入结构-功能分析提供了对于与野生型WT人IgG1相比AZ15,L351Y_Y407AE357L_T366A_K409F_T411N的每个引入突变的详细理解，且表明重要的核心异源二聚体突变是L351Y_Y407AT366A_K409F，而E357L,T411N对于异源二聚体形成和稳定性不是直接相关的。核心突变L351Y_Y407AT366A_K409F在本文中被称为“支架2”突变。此外，分析显示，相对于野生型WT同源二聚体形成丢失的重要接口热点是盐桥D399-K409、氢键Y407-T366和包装Y407-Y407。下面提供的详细分析描述了我们如何改进我们的初始Fc变体AZ15和获得这些改进稳定性的Fc变体进行的位置和氨基酸修饰。使用支架2突变开发Fc变体和进一步开发支架2a突变。计算机芯片上分析表明，由于WT-Y407-Y407相互作用的损失，先前Fc变体设计例如AZ15突变K409F_T366A_Y407A的非最佳包装和疏水核心的总体减少的包装。用更优的包装设计本文所述的异源多聚体。本文所述的一些阳性设计努力集中在点突变以补偿初始Fc变体AZ15中的包装缺陷。靶向的残基包括T366、L351、和Y407位。在计算机芯片上测试这些的不同组合，且关于表达和稳定性实验验证使用计算工具的排序最佳的Fc变体AZ63-AZ70，如实施例1-4中所述。Fc变体AZ70是开发Fc变体的实例，其中支架2进行修饰，导致支架2a突变以改进稳定性和纯度。基于AZ15设计该Fc变体，其目标实现如上所述的疏水核心的更好包装。Fc变体AZ70具有与上述相同的支架2核心突变L351Y_Y407AT366A_K409F，除了将T366突变为T366V而非T366A图33。L351Y突变将366A_409F407A变体熔解温度从71.5℃改进至74℃，且366A至366V的额外改变将Tm改进至75.5℃。参见，表4中的AZ63、AZ64和AZ70，其分别具有71.5℃、74℃和75.5℃的Tm。核心突变L351Y_Y407AT366V_K409F在本文中被称为“支架2a”突变。对于Fc变体AZ70的实验数据显示相比于初始阴性设计Fc变体AZ15Tm71℃的显著改进的稳定性，其中AZ70具有75.5℃的Tm和90％的异源二聚体含量图33和27。使用支架2突变开发Fc变体和进一步开发支架2b突变。分子动力学模拟MolecularDynamicssimulation,MD和包装分析显示环399-400的优选的更'开放'构象，这可能是由于WT盐桥K409-D399的损失。这也导致不满意的D399，这依次优选与K392的补偿性相互作用，且诱导环的更'开放'构象。这种更'开放'环构象导致核心CH3结构域接口残基的总体下降的包装和更高的溶剂可接近性，这依次使异源二聚体的稳定性显著下降。因此，针对性的阳性设计努力之一是通过补偿D399-K409盐桥和K409的包装相互作用的损失的额外点突变而将该环拴系在更'封闭的'WT样构象中。靶向残基包括T411、D399、S400、F405、N390、K392以及它们的组合。在计算机芯片上针对上述位置测试不同包装、疏水性和静电阳性工程改造策略，且关于表达和稳定性实验验证使用计算工具测定的排序最佳的Fc变体AZ71-AZ101，如实施例1-4中所述。Fc变体AZ94是开发Fc变体的实例，其中支架2进行修饰，导致支架2b突变连同额外的点突变以改进稳定性和纯度。基于将环399-400拴系在更'封闭的'WT样构象中且补偿如上所述的D399-K409盐桥的损失的目标设计该Fc变体。Fc变体AZ94具有对于支架2的4个额外点突变L351Y_Y407AT366A_K409F，且将L351Y回复为野生型L351，留下Y407AT366A_K409F作为用于该Fc变体的核心突变。核心突变Y407AT366A_K409F在本文中被称为“支架2b”突变。AZ94的四个额外点突变是K392E_T411ED399R_S400R。将突变T411ED399R工程改造以形成额外的盐桥且弥补K409D399相互作用的损失图34。此外，设计这种盐桥以通过排除两个潜在同源二聚体中的电荷-电荷相互作用以防止同源二聚体形成。额外突变K392ES400R意在形成另一种盐桥，且因此进一步将399_400环拴系在更“封闭”的WT样构象中图34。对于AZ94的实验数据显示相对于初始阴性设计Fc变体AZ15Tm71℃,90％纯度的改进的稳定性和纯度，其中Fc变体AZ94具有74℃的Tm和95％的异源二聚体含量或纯度。在Fc变体异源二聚体的第三阶段设计中使用支架2突变开发Fc变体Fc变体AZ70和AZ94提供了相对于初始阴性设计Fc变体例如AZ15的稳定性和纯度的显著改进，但是我们的分析和AZ70和AZ94的比较直接表明，可以用进一步氨基酸修饰进行对Fc变体异源二聚体的稳定性的预期之中的改进。例如，设计Fc变体AZ70和AZ94靶向初始变体AZ15中的两个不同的非优化区域，这是通过改进疏水核心的包装和在核心接口残基的外部进行突变来完成的，导致额外的盐桥和氢键键合来使在位置399-401处的环构象稳定。Fc变体AZ70和AZ94的额外点突变相互远离，且因此对于设计在相同支架2核心突变包括2a和2b突变附近设计的其他Fc变体是独立的且是可转移的。具体而言，AZ70只携带优化的核心突变L351Y_Y407AT366A_K409F，但没有额外的盐桥，而AZ94包含四个额外静电突变K392E_T411ED399R_S400R，但在疏水核心接口中少一个突变Y407AT366A_K409F。这些支架2b突变比AZ70稳定性更差参见，例如AZ63，其具有和AZ94等同的核心突变和72℃的Tm，但是通过添加K392E_T411ED399R_S400R突变而补偿。提供的实验稳定性和纯度数据表明，结合AZ70的突变其优化了AZ94的疏水核心和静电突变应当进一步改进Fc变体异源二聚体的稳定性和纯度。以类似的方式，已经分析了支架2Fc变体AZ63-101完整的实验数据以鉴定可以用于进一步改进Fc变体异源二聚体AZ70和AZ94的点突变。通过上述计算方法对这些鉴定的突变进行进一步分析，且排序以产生基于AZ70和AZ94的额外Fc变体异源二聚体的列表，如表7中所示。实施例7：异源二聚体CH3对FcgR结合的影响作为异源二聚体Fc与FcgR的活性的典型实例，已经如实施例4中对于FcgR结合所述在SPR测定中测试了两种具有含有Her2结合Fab臂的异源二聚体Fc区的变体抗体A:K409D_K392DB:D399K_D356K对照1图35中的het1和A:Y349C_T366S_L368A_Y407VB:S354C_T366W对照4图35中的het2。如图35中所示，我们观察到，两种异源二聚体Fc区都以与野生型IgG1Fc区相同的相对强度结合不同的Fcγ受体，但是总体而言，异源二聚体Fc区与每种FcgR的结合略优于野生型抗体。这表明，Fc的CH3接口处的突变可以影响Fc区横跨CH2结构域对于Fcγ受体的结合强度，正如分子动力学模拟和分析中观察到的。实施例8：异源二聚体Fc的CH2中的不对称突变对FcgR结合的影响已知Fc区的CH2结构域中在位置267处的丝氨酸突变为天冬氨酸S267D当以同源二聚的方式引入CH2结构域的两条链中时增强与FcγIIbF、IIbY&IIaR受体的结合。可以将这种突变引入异源二聚体Fc分子的仅一个CH2结构域中以获得相对于当这种突变引入同源二聚体CH2Fc时约一半的结合强度的改进，如在图36A中提供的数据所表明的。另一方面，Fc的同源二聚体CH2结构域中的E269K突变防止了Fc区与FcgR的结合。我们提出了通过在Fc的CH2结构域中的两条链之一上不对称引入这些有利和不利突变而增强操作Fc区对于Fcg受体的结合强度的方案。以不对称方式将E269K突变引入异源二聚体Fc的一条CH2链上通过阻断FcgR在其存在的面处的结合、同时使Fc的另一面与FcgR以正常方式相互作用而充当极性驱动者。来自这些实验的结果提供在图36A中。经由Fc的两条链以独立方式选择性改变结合强度的机会提供了操作Fc和Fcg受体之间的结合强度和选择性的增加的机会。因此，CH2结构域中突变的这种不对称设计使我们能够引入阳性和阴性设计策略以支持或不支持某些结合模型，提供了引入选择性的更多的机会。在随后的实验中，我们已经改变了基础Fc突变体S239D_D265S_I332E_S298A的选择性概况，其显示与FcγIIIaF和IIIaV受体的增加的结合强度，同时继续表现出与FcγIIaR、IIbF和IIbY受体更弱的结合。这显示在图36B中显示的结合概况中。通过在链A中引入不对称突变E269K和在链B中避免I332E突变，我们能够生成新的FcgR结合概况，其进一步减弱IIa和IIb受体结合，且使Fc对于IIIa受体结合更加特异性。在图36C中显示的另一个实例中，突出了相对于同源二聚体Fc的不对称突变，其涉及CH2结构域中的突变S239DK326EA330LI332ES298A。相对于野生型IgG1Fc，这种变体显示了与IIIa受体结合的增加，但也比野生型Fc略强地结合IIa和IIb受体。以不对称方式A:S239DK326EA330LI332E和B:S298A引入这些突变、同时降低IIIa结合，也增加了IIaIIb受体结合，在这个过程中失去了选择性。通过在这种异源二聚体变体中引入不对称E269K突变即A:S239DK326EA330LI332EE269K和B:S298A，将IIaIIb结合降回至野生型水平。这突出了如下事实：在Fc的CH2结构域中使用不对称突变能够提供设计改进的FcγR选择性的重要机会。实施例中采用的试剂是商业上可获得的，或者可以使用商业上可获得的仪器、方法、或本领域已知的试剂来制备。上述实施例说明了本发明的各个方面和本发明的方法的实施。实施例并不意在提供本发明的许多不同实施方案的详尽描述。因此，尽管为了理解清晰，已借助例证和实例相当详细地描述了上述发明，对本领域普通技术人员而言容易理解的是，在没有背离所附的权利要求书的精神和范围的情况下，可以对本发明做一些改变和修饰。实施例9：通过SPR确定的FcRn结合。在两个不同的取向中通过SPR确定与FcRn的结合。1.使异源二聚体变体流经固定化FcRn：在该实验中，使用标准NHSEDC偶联制备约5000RU的高密度表面。一式三份地，以50uLmin注射100nMWT和每个变体持续120s，在MESpH6电泳缓冲液中解离600s。2.使FcRn流经间接捕获的异源二聚体变体：在该SPR实验中，使用山羊抗-人类IgG表面以间接捕获抗体各约400RU，随后注射3倍FcRn稀释液系列6000nM高浓度。电泳缓冲液为于pH6的10mMMES150mMNaCl3.4mMEDTA0.05Tween20。FcRn与山羊多克隆表面无显著结合。所有变体显示与WT传感图类似。下面表8显示通过间接固定用流式FcRn2.确定的Kd。表8：通过间接固定用流式FcRn确定的Kd实施例10：本文所述的Fc异源二聚体的双特异性结合使用具有突变链-A：L351Y_F405A_Y407V、链-B：T366L_K392M_T394W的Fc异源二聚体以及与Fc异源二聚体的链-A和链-B的N末端稠合的抗-HER2和抗-HER3scFv验证双特异性结合。在图40A中说明所获得的变体双特异性HER2HER3变体和两个单价-单特异性HER2、HER3变体。为了测试双特异性结合，一定剂量范围的两个单价变体抗-HER2单价和抗-HER2单价，在图40A中说明和双特异性抗-HER2HER3异源二聚体用MALME-M3黑素瘤分子孵育，随后FACS分析以确定每个分子的表观结合亲和力在图40B中所示。根据在以下文献中所述的方案建立测定系统："AntitumoractivityofanovelbispecificantibodythattargetstheErbB2ErbB3oncogenicunitandinhibitsheregulin-inducedactivationofErbB3",McDonaghCF等人，MolCancerTher.113:582-932012。实施例11：具有异源二聚体Fc结构域的二价单特异性抗体的表达和纯化以及通过LCMS对纯度的定量如实施例1和2中所述地产生并纯化异源二聚的变体AZ133A：L351YF405AY407V，B：T366LK392MT394W、AZ138A：F405AY407V，B：T366LK392MT394W、AZ3002A：T350VL351YF405AY407V，B：T350VT366LK392MT394W、AZ3003A：T350VL351YF405AY407V，B：T350VT366LK392LT394W和其他AZ构建体AZ3000-AZ3021。为了评估异源二聚体形成的稳健性和过量的一条异源二聚体链对异源二聚体纯度的影响，使用两条重链A和B的3种不同的DNA比例例如比例A:B＝1:1.5；1:1；1.5:1短暂表达选择的异源二聚体。如实施例1中详细所述地，经由基因合成使用针对人类哺乳动物表达优化的密码子来构建编码异源二聚体重链和轻链的基因。Fab序列由已知Her2neu结合Ab产生CarterP.等人1992HumanizationofanantiP185Her2antibodyforhumancancertherapy.ProcNatlAcadSci89,4285并且Fc为IgG1同种型SEQIDNO:1。如实施例1-2中所述地，使用1:1.5、1:1和1.5:1的3种不同的重链-A和重链-B比例通过短暂共表达来表达变体。通过蛋白-A亲和力色谱和制备型凝胶过滤纯化样品参见实施例2的细节。在37℃用PNGaseF将经纯化的样品脱糖基化过夜。在MS分析之前，将样品注射到PorosR2柱中并且以具有20-90％ACN、0.2％FA的梯度洗脱3分钟。LC柱的峰用LTQ-OrbitrapXL质谱仪锥孔电压：50V’镜筒透镜：215V；FT分辨率：7,500分析并且用软件Promass积分以产生分子重量特性。使用异源二聚体和同源二聚体的相对峰高以评估异源二聚体纯度参见图39。实施例12：异源二聚体AZ3002和AZ3003的晶体结构:在CHO中表达AZ3002和AZ3003的异源二聚的Fc构建体并通过pA和SEC纯化至同质性。经由悬滴式蒸汽扩散法借助于微接种在上述母液溶液中以2:1的比例孵育约24小时后，在18℃使纯化的Fc异源二聚体结晶，所述母液溶液由5％vv乙二醇、18％wv聚乙二醇3350和0.15M碘化铵组成。通过使乙二醇浓度增至30％vv且随后在液氮中急骤冷却对晶体进行冷冻保护。使用针对总计200度的0.5度振幅，在100K收集两种晶体的衍射数据，并且用XDS处理1。使用PDBID：2J6E作为查询蛋白，经由分子替换利用Phaser解析AZ3002的结构2。然后使用AZ3002的结构以类似的方式解析AZ3003。为了提供完善的双晶，用Refmac修正的Coot对存在于结晶学的不对称单元中的不对称异源二聚体各具有0.5原子占用率的两种可能的异源二聚体对的互反关系例如分子A的占用率可同样地由分子B描述，反之亦然进行建模3，4。衍射数据处理和结构修正统计示于表9中。表9：1.Kabsch，W.XDS.ActaCrystallogrDBiolCrystallogr66，125-1322010.2.McCoy，A.J.SolvingstructuresofproteincomplexesbymolecularreplacementwithPhaser.ActaCrystallogr.D.Biol.Crystallogr.63，32-412007.3.Emsley，P.&Cowtan，K.Coot：model-buildingtoolsformoleculargraphics.ActaCrystallogr.D.Biol.Crystallogr.60，2126-21322004.4.Murshudov，G.N.，Vagin，A.A.&Dodson，E.J.Refinementofmacromolecularstructuresbythemaximum-likelihoodmethod.ActaCrystallogr.D.Biol.Crystallogr.53，240-2551997.晶体结构的重迭显示于图42中。AZ3002和AZ3003异源二聚体的晶体结构显示与计算机芯片上模型非常一致并且符合所预测的关键核心包装残基的构象。实施例13：AZ3003的糖基化分析如实施例11中所述，表达并纯化AZ3003异源二聚体。使用标准制造商方案，用GlykoPrepTMRapidN-GlycanPreparation和InstantABTMProzyme分析聚糖。结果显示于图43中并且说明AZ3003具有典型的糖基化模式。实施例14：AZ3003在强制降解条件下的稳定性评估通过在强制降解条件下孵育来评估AZ3003异源二聚体的稳定性。mAb在强制降解条件下的稳定性对于长期和制剂稳定性可以是良好的评估。在没有聚集迹象下将纯化的异源二聚体样品如实施例11中所述的表达和纯化浓缩至100mgml。将样品稀释至适合的缓冲剂中并且如下表10中所述在强制降解条件下进行评价。通过SDS-PAGE和HPLC-SEC分析经处理的样品。用购自LONZA的预制梯度凝胶在还原R和非还原NR条件下进行SDS-PAGE。通过用CoomassieBrilliantBlueG-250染色使蛋白质条带可视化。使用Phenomenex,BIOSEP-SEC-S4000或BioRadBio-SilTSK4000HPLC柱以0.8mlmin流速用10mM磷酸钠、0.14MNaCl、10％异丙醇作为电泳缓冲液，进行分析型SEC-HPLC。这允许潜在的更高和更低的分子和物种的定量。表10：用于降解AZ3003的强制降解条件结果显示于图44中并表明AZ3003异源二聚体是稳定的，且表现出稳定性特征，这与工业标准mAb的稳定性一致。实施例15：AZ3003在下游的纯化评估使用如图45中所示的工业标准抗体纯化方法流程，进行AZ3003的可制造性评估以评价AZ3003的行为。该方法涉及三柱步阶平台，其包括用于产物捕获的蛋白A亲和色谱法，接着用于除去聚集体、滤取的蛋白A和HCP的阳离子交换CEX色谱法，以及最后在流经型模式中的阴离子交换AEX色谱法以捕获病毒、DNA和带负电的污染物。该评估用于在研究开发阶段早期鉴定候选药物的潜在的制造问题例如，方法稳定性、产物稳定性和质量。在可制造性评估期间，使用在图46中显示的工业标准纯化方法评价色谱行为、蛋白质稳定性和产物质。表11下面列出了用于评估即步骤收率、高分子量聚集体HMW含量和洗脱体积的主要标准。在纯化期间的高-步骤收率和低-洗脱体积指示功能良好的、稳定的蛋白质。在纯化期间HMW含量的监控及其去除是至关重要的，因为终产物中蛋白质聚集体HMW种类的存在可导致患者中的活性免疫原性反应的降低和或在药物产品半衰期期间的微粒形成。因为高水平的聚集体将需要用于去除的额外纯化步骤，所以具有最小初始HMW含量90％的产物。1.2低pH保持研究下游方法中的下一步骤为低pH保持，其为了灭活病毒而进行。从蛋白A柱洗脱后，用10％乙酸将Mab约10mgml,pH4.0滴定至pH3.6，并在搅拌下于RT孵育90min。通过SDS-PAGE、SEC-HPLC以及通过在A410nm的浊度测量评价AZ3003抗低pH处理的稳定性。AZ3003对低pH保持步骤的耐受性良好，显示在SDS-PAGE或SEC-HPLC中无变化。此外，在90-min孵育后检测到浊度增加，指示缺少不溶性聚集体的形成，这可在纯化期间是棘手的问题即，阻塞方法中的滤器和柱子，产物损失。这些数据显示AZ30003对低pH保持步骤稳定。1.3阳离子交换色谱法CEX作为纯化方法中的第二步骤研究CEX。评价以下两种树脂：来自MerkMillipore的FractogelEMDSO3M和来自GELifesciences的SPHP。FractogelEMDSO3M，pH5.2：通过添加10％vv1Mtris碱将MabSelectSuRe混合物35mg滴定至pH5.2，然后用平衡缓冲液20mM乙酸盐pH5.2进行2倍稀释。将该混合物施加至用5CV的20mM乙酸盐pH5.2平衡的FractogelEMDSO3M柱子。用平衡缓冲液洗涤柱子，直至A280吸光度达到稳定的基线。用超过10CV的0至600mMNaClpH5.2的线性盐梯度从柱子洗脱Mab。用20mM乙酸盐、1MNaCl、pH5.2，接着用1NNaOH处理将剩余的污染物从柱子脱去。进行SDS-PAGE和SEC-HPLC分析以监控HMW水平以及其从该柱子的主要Mab级分中的去除。步骤收率基于A280nm读数为73％。SPHP，pH5.2：通过添加10％vv1Mtris碱将MabSelectSuRe混合物50mg滴定至pH5.2，然后同样用平衡缓冲液20mM乙酸盐pH5.2稀释。将该混合物施加至用5CV的20mM乙酸盐pH5.2平衡的SPHP柱1.6×2.5cm5ml图21。将柱子用平衡缓冲液洗涤，直至A280吸光度达到稳定的基线。用超过10CV的0至600mMNaClpH5.2的线性盐梯度从柱子洗脱Mab。用20mM乙酸盐、1MNaCl、pH5.2，接着用1NNaOH处理将剩余的污染物从柱子脱去。进行SDS-PAGE和SEC-HPLC分析以监控聚集水平以及其在该柱子上的分离。步骤收率基于A280nm读数为87％。1.4阴离子交换色谱法AEX阴离子交换例如季胺，Q已广泛用于单克隆抗体纯化。在流经型模式中操作AEX介质，Mab在FT中出现同时允许HCP、DNA、病毒和内毒素的滞留。用1Mtris碱将FractogelSO3M混合物pH5.225mg滴定至pH7.0并将其施加至用5CV的10mM磷酸盐pH7.0平衡的1mlHiTrapQFF。用平衡缓冲液洗涤柱子。但是，在这种情况下，未达到稳定基线。因此，用PBS洗涤柱子以洗脱任何残留的结合Mab。然后，用10mM磷酸盐、1MNaCl、pH7.0洗涤柱子以除去任何结合的污染物。该步骤需要进一步优化以使所有Mab级分存在于流经型模式中。步骤收率基于A280nm读数为82％，通过SEC-HPLC估计纯度98％。1.5下游纯化的SDS-PAGE分析对来自每个纯化步骤的洗脱物进行SDS-PAGE图35以在整个方法中监控污染物去除以及评价终产物质量和纯度。凝胶分析显示，期望的Mab在非还原和还原条件下的迁移模式。来自两种CEX树脂的混合物的凝胶比较显示产物特性无主要差异。针对纯度和污染条带，来自CEX、CHT和HICpH5.0和pH7.0的主要混合物均看似类似的。1.7通过SEC-HPLC评价纯度在天然条件下通过SEC大小排阻-HPLC评价在三柱色谱法步骤蛋白A；CEX；AEX流经型模式后纯化的AZ3003图46。AZ3003显示单峰在期望的天然IgG1的150kDa区域内洗脱。纯度估计为98％。1.8用于纯化AZ3003的方法收率计算下游纯化方法的方法收率并且在图46中列出。对于使用工业标准三柱纯化方法纯化的IgG，AZ3003的步骤收率是典型的。使用工业标准纯化方法蛋白A亲和树脂，CEX，接着AEX，成功地从CM纯化AZ3003。这些结果指示，AZ3003在总体回收收率方面与标准mAb类似参见KelleyB.Biotechnol.Prog.2007,23,995-1008和最低程度观察到的聚集。也针对低pH保持&CHT陶瓷羟磷灰石和HIC疏水性相互作用色谱法PhenylHPpH5和pH7，评价AZ3003，其中无聚集体的回收率良好。图46说明，使用工业标准纯化方法蛋白A亲和树脂，CEX，接着AEX成功地从CM纯化先导异源二聚体。本说明书中所提到的所有出版物、专利以及专利申请都如同每篇出版物、专利或专利申请被特别且单独指出通过引用并入本文一样的程度通过引用并入本说明书。

权利要求：1.一种分离的异源多聚体Fc构建体，包含修饰的异源二聚的CH3结构域，所述修饰的异源二聚的CH3结构域包含：第一修饰的CH3结构域多肽和第二修饰的CH3结构域多肽，所述第一和第二修饰的CH3结构域多肽与野生型CH3结构域多肽相比各自包含氨基酸取代，其中所述氨基酸取代与同源二聚的CH3结构域相比促进异源二聚的CH3结构域的形成；其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中在位置F405和Y407处的氨基酸取代，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中在位置T366、K392和T394处的氨基酸取代；其中在位置T366处的氨基酸取代是T366I或T366L，在位置K392处的氨基酸取代是K392L、K392M或K392F，在位置T394处的氨基酸取代是T394W，在位置F405处的氨基酸取代是F405A、F405S、F405T或F405V，以及在位置Y407处的氨基酸取代是Y407V；其中所述第一和第二修饰的CH3结构域多肽各自进一步包含氨基酸取代T350V；其中所述第一和第二修饰的CH3结构域多肽形成具有74℃至83℃之间的熔解温度Tm和至少95％的纯度的异源二聚的CH3结构域；其中所述异源多聚体Fc构建体基于G型免疫球蛋白IgG，且其中氨基酸的编号根据Kabat中所述的EU索引。2.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述修饰的CH3结构域具有76℃至83℃之间的熔解温度Tm。3.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中在位置F405处的氨基酸取代为F405A。4.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述第一修饰的CH3结构域多肽进一步包含氨基酸取代L351Y。5.根据权利要求4所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述第二修饰的CH3结构域多肽中在位置K392处的氨基酸取代是K392L或K392M。6.根据权利要求4所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代L351Y、F405A和Y407V，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T366I或T366L、K392L或K392M、和T394W。7.根据权利要求1-6任一项所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述第一修饰的CH3结构域多肽进一步包含氨基酸取代S400E。8.根据权利要求7所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述第二修饰的CH3结构域多肽进一步包含氨基酸取代N390R。9.根据权利要求1-6任一项所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述第一修饰的CH3结构域多肽进一步包含氨基酸取代S400R。10.根据权利要求9所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述第二修饰的CH3结构域多肽进一步包含氨基酸取代N390D或N390E。11.根据权利要求1-6中任一项所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述第一修饰的CH3结构域多肽进一步包含氨基酸取代Q347R且所述第二修饰的CH3结构域多肽进一步包含氨基酸取代K360E。12.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、F405A和Y407V，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、T366L、K392M和T394W。13.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、L351Y、F405A和Y407V，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、T366L、K392M和T394W。14.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、L351Y、F405A和Y407V，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、T366L、K392L和T394W。15.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、L351Y、S400R、F405A和Y407V，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、T366L、K392M和T394W。16.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、L351Y、S400E、F405A和Y407V，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、T366L、N390R、K392M和T394W。17.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、L351Y、S400E、F405V和Y407V，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、T366L、N390R、K392M和T394W。18.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、L351Y、S400E、F405T和Y407V，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、T366L、N390R、K392M和T394W。19.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、L351Y、S400E、F405S和Y407V，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、T366L、N390R、K392M和T394W。20.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、S400E、F405A和Y407V，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、T366L、N390R、K392M和T394W。21.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、L351Y、S400E、F405A和Y407V，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、L351Y、T366L、N390R、K392M和T394W。22.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代Q347R、T350V、L351Y、S400E、F405A和Y407V，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、K360E、T366L、N390R、K392M和T394W。23.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、L351Y、S400R、F405A和Y407V，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、T366L、N390D、K392M和T394W。24.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、L351Y、S400R、F405A和Y407V，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、T366L、N390E、K392M和T394W。25.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、L351Y、S400E、F405A和Y407V，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、T366L、N390R、K392L和T394W。26.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、L351Y、S400E、F405A和Y407V，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、T366L、N390R、K392F和T394W。27.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代Y349C、T350V、L351Y、S400E、F405A和Y407V，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、S354C、T366L、N390R、K392M和T394W。28.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代Y349C、T350V、S400E、F405A和Y407V，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、S354C、T366L、N390R、K392M和T394W。29.根据权利要求1所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述氨基酸取代包含在所述第一修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代Y349C、T350V、F405A和Y407V，和在所述第二修饰的CH3结构域多肽中的氨基酸取代T350V、S354C、T366L、K392M和T394W。30.根据权利要求1-6和12-29中任一项所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述IgG是IgG2、IgG3和IgG4中的一个。31.根据权利要求1-6和12-29中任一项所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述IgG是IgG1。32.根据权利要求31所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述异源多聚体Fc构建体是双特异性或多特异性抗体。33.根据权利要求32所述的分离的异源多聚体Fc构建体，包含至少一种结合癌抗原的抗原结合结构域。34.根据权利要求1-6和12-29中任一项所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述异源多聚体Fc构建体是双特异性或多特异性抗体。35.根据权利要求34所述的分离的异源多聚体Fc构建体，包含至少一种结合癌抗原的抗原结合结构域。36.根据权利要求1-6和12-29中任一项所述的分离的异源多聚体Fc构建体，其中所述异源多聚体Fc构建体与治疗剂缀合。37.一种组合物，包含根据权利要求1-36中任一项所述的分离的异源多聚体Fc构建体和药学上可接受的载体。38.一种或多种多核苷酸，其编码根据权利要求1-35中任一项所述的分离的异源多聚体Fc构建体。39.一种或多种表达载体，其包含编码根据权利要求1-35中任一项所述的分离的异源多聚体Fc构建体的多核苷酸。40.一种多顺反子表达载体，其包含编码根据权利要求1-35中任一项所述的分离的异源多聚体Fc构建体的多核苷酸。41.一种哺乳动物宿主细胞，包含编码根据权利要求1-35中任一项所述的分离的异源多聚体Fc构建体的一种或多种多核苷酸。42.一种在哺乳动物细胞中表达根据权利要求1-35中任一项所述的分离的异源多聚体Fc构建体的方法，所述方法包括：a.使用一种或多种编码根据权利要求1-35中任一项所述的分离的异源多聚体Fc构建体的多核苷酸转染至少一种哺乳动物细胞，从而产生至少一种瞬时或稳定转染的哺乳动物细胞；和b.在适合表达所述分离的异源多聚体Fc构建体的条件下，培养所述瞬时或稳定转染的哺乳动物细胞。43.根据权利要求1-36中任一项所述的分离的异源多聚体Fc构建体在制备治疗患有由癌抗原表征的癌症的患者中的癌症的药物中的用途。44.根据权利要求1-32、34和36中任一项所述的分离的异源多聚体Fc构建体在制备治疗患有由免疫抗原表征的免疫病症的患者中的免疫病症的药物中的用途。

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