申请/专利权人：南方科技大学

申请日：2021-08-06

公开（公告）日：2024-05-17

公开（公告）号：CN113684246B

主分类号：C12Q1/6804

分类号：C12Q1/6804

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.17#授权;2021.12.10#实质审查的生效;2021.11.23#公开

摘要：本发明公开了核酸检测方法，该核酸检测方法包括以下步骤：提供待测样本、磁珠、一抗和二抗；将待测样本、磁珠、一抗和二抗混合反应，形成磁珠复合体；根据磁珠复合体的检测标记进行检测，得到检测结果。根据本申请实施例的核酸检测方法，至少具有如下有益效果：采用磁珠作为整个反应的反应基底和最小反应单元，能够在后续的免疫反应中起到浓缩和放大的作用。通过磁珠标记的核苷酸链与待测样本中的待测核酸片段相互配对形成杂交双链体，并通过一抗对杂交双链体进行捕获，利用二抗对杂交双链体进行检测，增加了检测的特异性和灵敏度，无需另外对待测核酸片段进行扩增。

主权项：1.一种非疾病诊断目的的核酸检测方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、提供待测样本、磁珠、一抗和二抗，所述磁珠标记有核苷酸链，所述核苷酸链用于与所述待测样本中的待测核酸片段发生互补配对形成杂交双链体，所述一抗用于与所述杂交双链体发生特异性结合，所述二抗用于与所述一抗发生特异性结合，所述二抗具有检测标记；S2、将所述待测样本、所述磁珠、所述一抗和所述二抗混合反应，形成含磁珠-DNA：RNA-一抗-二抗的磁珠复合体的混合水溶液；S3、提供油相与所述磁珠复合体的混合水溶液；以所述油相为流动相，以所述磁珠复合体的混合水溶液为分散相，与荧光底物溶液在压力和或剪切力的作用下封装形成油包水的液滴，其步骤为：将所述磁珠复合体的混合水溶液从第一进液口注入微流控芯片，同时将所述荧光底物溶液从第三进液口注入微流控芯片，将含1wt％的氟碳表面活性剂的氟油HFE7500从第二进液口注入微流控芯片，所述第一进液口、第二进液口和第三进液口的流速分别为0.1mLh、0.4mLh和0.1mLh，混合反应，形成油包水的液滴；S4、根据所述液滴中的所述检测标记进行检测，得到检测结果；其中，所述磁珠的直径为0.5~2μm，所述一抗为Anti-DNA：RNAhybrid抗体，所述二抗为含检测标记的羊抗鼠抗体，所述检测标记为酶；所述酶选自β-半乳糖苷酶、辣根过氧化物酶、碱性磷酸酶、脲酶、葡萄糖氧化酶中的至少一种；所述酶能够催化荧光底物产生荧光信号；所述液滴的体积为1～10×10-15L。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南方科技大学 高灵敏度、无需扩增的核酸检测方法及其应用

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