申请/专利权人：中国科学院生态环境研究中心

申请日：2022-09-30

公开（公告）日：2024-05-17

公开（公告）号：CN115521903B

主分类号：C12N5/074

分类号：C12N5/074;C12N5/0793

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.17#授权;2023.01.13#实质审查的生效;2022.12.27#公开

摘要：本发明提供了一种体外诱导人多能干细胞分化为多巴胺能神经元的方法，包括：中脑腹侧神经前体诱导阶段：诱导人多能干细胞分化为中脑腹侧神经前体细胞，其中使用多种小分子通路调控剂以及白藜芦醇促进中脑腹侧神经前体分化；多巴胺能神经元分化阶段：诱导中脑腹侧神经前体细胞分化为多巴胺能神经元，其中利用香胶甾酮促进多巴胺能神经元的分化成熟。本发明还提供了体外诱导人多能干细胞分化为多巴胺能神经元的试剂盒。

主权项：1.一种体外诱导人多能干细胞分化为多巴胺能神经元的方法，其特征在于，包括：中脑腹侧神经前体诱导阶段：诱导人多能干细胞分化为中脑腹侧神经前体细胞，其中使用多种小分子通路调控剂以及白藜芦醇促进所述中脑腹侧神经前体分化；多巴胺能神经元分化阶段：诱导所述中脑腹侧神经前体细胞分化为多巴胺能神经元，其中利用香胶甾酮促进所述多巴胺能神经元的分化成熟；其中，所述中脑腹侧神经前体诱导阶段包括：采用第一培养基，对人诱导多能干细胞进行培养，得到第一中间培养细胞，其中，所述第一培养基包括：所述白藜芦醇、所述多种小分子通路调控剂以及第一基础培养基；所述第一基础培养基包括48.5%DMEMF-12培养基和加入1%N2补充剂以及2%B27补充剂的48.5%NeuroBasal培养基；采用第二培养基，对所述第一中间培养细胞进行培养，得到所述中脑腹侧神经前体细胞；其中，所述第二培养基包括：所述白藜芦醇、所述多种小分子通路调控剂以及第二基础培养基；所述第二基础培养基包括49.25%DMEMF-12培养基和加入0.5%N2补充剂以及1%B27补充剂的49.25%NeuroBasal培养基；所述多巴胺能神经元分化阶段包括：采用所述第二基础培养基，对所述中脑腹侧神经前体细胞进行培养，得到第二中间培养细胞；采用第三培养基，对所述第二中间培养细胞进行培养，得到所述多巴胺能神经元；其中，所述第三培养基包括：加入2%B27补充剂的NeuroBasal培养基、所述香胶甾酮以及抗坏血酸；所述多种小分子通路调控剂为：TGF-β通路抑制剂、BMP通路抑制剂、WNT通路激活剂以及Hedegehog通路小分子激动剂，所述Hedegehog通路小分子激动剂为嘌吗啡胺，所述TGF-β通路抑制剂为SB431542，所述BMP通路抑制剂为LDN193189，所述WNT通路激活剂为CHIR99021；所述采用第一培养基，对所述人诱导多能干细胞进行培养，得到第一中间培养细胞的时间为3~6天；所述采用第二培养基，对所述第一中间培养细胞进行培养，得到所述中脑腹侧神经前体细胞的时间为3~8天；采用所述第二基础培养基，对所述中脑腹侧神经前体细胞进行培养，得到第二中间培养细胞的时间为1~4天；所述采用第三培养基，对所述第二中间培养细胞进行培养，得到所述多巴胺能神经元的时间根据所述多巴胺能神经元的用途确定。

全文数据：

权利要求：

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