申请/专利权人：汕头大学

申请日：2023-05-25

公开（公告）日：2024-05-17

公开（公告）号：CN116769839B

主分类号：C12N15/89

分类号：C12N15/89;A01K67/033;C12N15/113

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.05.17#授权;2023.10.10#实质审查的生效;2023.09.19#公开

摘要：本发明公开了一种研究Abd‑A基因调控拟穴青蟹幼体腹肢发育的RNA干扰方法，步骤如下：1、根据Abd‑A基因序列设计用于扩增Abd‑A基因片段和合成dsRNA的特异性引物；2、以带有Abd‑A基因片段的质粒为模板进行PCR扩增，经体外转录合成dsRNA；3、将拟穴青蟹IV期溞状幼体置于特制琼脂糖凝胶板上，由头胸甲和腹部间隙处导入dsRNA；4、待幼体成长至V期，采用电镜观察幼体腹肢发育变化，本发明涉及水产生物技术领域。该研究Abd‑A基因调控拟穴青蟹幼体腹肢发育的RNA干扰方法，在干扰Abd‑A基因的表达之后，溞状幼体腹肢退化或缺失，表明Abd‑A基因调控着幼体腹肢的生长发育。本发明实现了Abd‑A基因在拟穴青蟹幼体腹肢发育中功能的研究，是探究拟穴青蟹幼体腹肢生长发育相关基因功能的有效手段。

主权项：1.一种通过RNA干扰调控拟穴青蟹幼体中Abd-A基因表达使拟穴青蟹幼体腹肢退化或缺失的方法，其特征在于：具体包括以下步骤：S1、根据Abd-A基因序列设计用于扩增Abd-A基因片段和合成dsRNA的特异性引物，在用于合成dsRNA的正反引物5’端添加保护碱基和T7启动子序列；S2、以带有Abd-A基因序列片段的质粒为模板进行PCR扩增和产物纯化，以此PCR产物为模板，经体外转录合成Abd-A基因干扰用dsRNA，用于合成dsRNA的上游引物为GATCACTAATACGACTCACTATAGGGTGGTAAACTACAATACGCAAGCTA，下游引物为GATCACTAATACGACTCACTATAGGGCTACAGGAGTTCAGTGGGTTAGT；S3、将拟穴青蟹IV期溞状幼体置于特制琼脂糖凝胶板上，再将dsRNA与注射指示剂混合，然后利用显微注射仪将混合物注射入幼体拟穴青蟹头胸甲与腹部连接处的背壳间隙处，注射dsRNA浓度为100ngμl，注射剂量为1μgg；S4、待幼体成长至V期，采用电镜观察幼体腹肢发育变化，幼体发育72h后腹部腹肢发生萎缩退化；所述Abd-A基因序列如序列1所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 汕头大学 一种研究Abd-A基因调控拟穴青蟹幼体腹肢发育的RNA干扰方法

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