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申请/专利权人：天津大学
申请日：2024-01-26
公开（公告）日：2024-05-14
公开（公告）号：CN118028343A
主分类号：C12N15/81
分类号：C12N15/81;C12N15/90;C12N1/19;C12R1/645;C12R1/865;C12R1/84
优先权：
专利状态码：在审-实质审查的生效
法律状态：2024.05.31#实质审查的生效;2024.05.14#公开
摘要：本发明提供了一种将二倍体宿主向单倍体转变的方法及其在大片段DNA转移中的应用。该方法利用CRISPRCas9系统、着丝粒附近产生DSB诱导整条染色体删除技术以及URA35‑FOA反筛系统，实现了一次性多靶点地快速消除酵母16条染色体，从而在二倍体酵母中选择性消除一套基因组，最终保留另一套染色体，得到单倍体酵母，进一步基于该方法实现了1.024MbDNA片段的转移。该方法具有操作简单、周期短、成本低的特点，有望为含有着丝粒型染色体的其他酵母等真核微生物及动植物提供实现快速单倍体化的便捷途径，在生物育种等方面具有广泛的应用潜力，亦可用于其他定制化多条染色体删除的非整倍体细胞构建和大片段DNA的转移。
主权项：1.一种快速将二倍体宿主转变为单倍体宿主的方法，其特征在于，包括：a利用基因编辑技术，向二倍体宿主中待敲除的每条染色体中插入XT2片段和XT2-URA3片段，获得染色体被XT2-URA3修饰的二倍体宿主；所述XT2-URA3片段包括XT2片段和URA3营养标签表达盒；所述XT2片段由PAM序列和长度为20bp的随机序列K组成；所述随机序列K与宿主基因组序列不同源；所述插入的位置为：每条染色体着丝粒的上游20～200bp和下游20～200bp的位置；b将携带靶向XT2片段的sgRNA-XT2的质粒和表达Cas9蛋白的质粒，转入二倍体宿主中，sgRNA-XT2引导Cas9蛋白分别在XT2-URA3修饰的染色体的着丝粒附近切割，发生双链DNA断裂，导致XT2-URA3修饰的染色体缺失，获得单倍体宿主。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 天津大学 一种快速将二倍体宿主转变为单倍体的方法及其在大片段DNA转移中的应用
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