申请/专利权人：深圳市先康达生命科学有限公司

申请日：2024-03-04

公开（公告）日：2024-05-14

公开（公告）号：CN118028231A

主分类号：C12N5/0783

分类号：C12N5/0783;C12N5/074;A61K35/17;A61P35/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.31#实质审查的生效;2024.05.14#公开

摘要：本发明公开了一种IPSC细胞诱导分化为NK细胞的培养方法及其应用；该培养方法包括步骤：将造血干细胞接种于NK分化培养基I中，培养6‑8天，获得造血分化细胞；将获得的造血分化细胞接种于含有OP9‑DL1小鼠饲养层细胞的24孔板中，采用NK分化培养基II进行分化培养，获得NK细胞。该培养方法，在不同培养阶段使用不同的培养基，实现IPSC细胞诱导分化和NK细胞并实现快速增殖；培养出来的NK细胞纯度较高，无需后续的筛选和纯化就可以直接应用。

主权项：1.一种IPSC细胞诱导分化为NK细胞的培养方法，其特征在于，包括如下步骤：将造血干细胞接种于6孔板中，采用NK分化培养基I于37℃、5vv％CO2条件下诱导培养6-8天，获得造血分化细胞；将获得的造血分化细胞接种于含有OP9-DL1小鼠饲养层细胞的24孔板中，采用NK分化培养基II进行NK细胞分化培养14-21天，直至获得NK细胞；其中，所述NK分化培养基I含有终浓度1-60vv％的DMEM高糖培养基、终浓度1-60vv％的Ham’sF-12NutrientMixGlutaMAXTMSupplement培养基、终浓度1-20vv％的热灭活的人AB血清、终浓度0.1-10mM的L-谷氨酸、终浓度0.1-10μM的2-巯基乙醇、终浓度为0.1-10ngmL的亚硒酸钠、终浓度为30-100μM氨基乙醇、终浓度为30-100μgmL的L-抗坏血酸、终浓度10-50ngmL的FGF2、终浓度5-50ngmL的BMP4、终浓度10-50ngmL的SCF、终浓度0.1-100ngmL的VEGF、终浓度0.1-20μM的Rho激酶抑制剂、终浓度1-10ngmL的IL-3、终浓度4-20ngmL的IL-15、终浓度2-30ngmL的IL-7及终浓度1-20ngmL的Flt3-L；所述NK分化培养基II含有终浓度1-60vv％的DMEM高糖培养基、终浓度1-60vv％的Ham’sF-12NutrientMixGlutaMAXTMSupplement培养基、终浓度1-20vv％的热灭活的人AB血清、终浓度0.1-10mM的L-谷氨酸、终浓度0.1-10μM的2-巯基乙醇、终浓度为0.1-10ngmL的亚硒酸钠、终浓度为30-100μM氨基乙醇、终浓度为30-100μgmL的L-抗坏血酸，终浓度1-10ngmL的IL-3、终浓度4-20ngmL的IL-15、终浓度10-50ngmL的SCF及终浓度1-20ngmL的Flt3-L。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 深圳市先康达生命科学有限公司 IPSC细胞诱导分化为NK细胞的培养方法及其应用

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