申请/专利权人：华中农业大学

申请日：2024-03-08

公开（公告）日：2024-05-14

公开（公告）号：CN118028357A

主分类号：C12N15/82

分类号：C12N15/82;C12N15/113;C12N9/22;C12N15/29;A01H5/00;A01H6/54

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.05.31#实质审查的生效;2024.05.14#公开

摘要：本发明提供了一种用于提高大豆产量的CRISPRCas9基因编辑载体及其制备方法和应用，属于基因工程技术领域。本发明的CRISPRCas9基因编辑载体能够对大豆GmSPL家族的15个靶基因进行编辑，将该载体转化入大豆中，获得的突变体植株分枝数和主茎节数均有所增加，单株荚数显著增加，表明大豆基因GmSPL家族的15个靶基因在调控大豆分枝数、主茎节数、单株荚数方面发挥了作用，本发明的CRISPRCas9基因编辑载体对提高大豆产量具有重大意义。

主权项：1.一种用于提高大豆产量的CRISPRCas9基因编辑载体，其特征在于，所述的CRISPRCas9基因编辑载体是将靶点的SgRNA与SgRNA载体连接后，插入骨架载体制备而成；所述靶点包括SPL2ab、SPL6ab、SPL6cd、SPL9ab、SPL9cd、SPL13Aab、SPL13Acd、SPL6e；靶点SPL2ab和SPL9cd的SgRNA分别与SgRNA载体1的启动子U3d连接，靶点SPL6ab和SPL13Aab的SgRNA分别与SgRNA载体2中的启动子U3b连接，靶点SPL6cd和SPL13Acd的SgRNA与SgRNA载体3中的启动子U6-1连接，靶点SPL9ab的SgRNA和靶点SPL6e的SgRNA分别与SgRNA载体4中的启动子U6-29连接；靶点SgRNA和启动子序列位于骨架载体的两个酶切位点中间，连接启动子的靶点在表达载体上从5’端到3’端的顺序依次为：SPL2ab-U3d、SPL6ab-U3b、SPL6cd-U6-1、SPL9ab-U6-29、SPL9cd-U3d、SPL13Aab-U3b、SPL13Acd-U6-1、SPL6e-U6-29；所述靶点的SgRNA包括Sg1和Sg2，Sg1和Sg2退火成双链后再与对应的SgRNA载体连接；靶点SPL2ab的Sg1序列如SEQIDNO:2所示，Sg2序列如SEQIDNO:3所示；SPL6ab的Sg1序列如SEQIDNO:5所示，Sg2序列如SEQIDNO:6所示；SPL6cd的Sg1序列如SEQIDNO:8所示，Sg2序列如SEQIDNO:9所示；SPL9ab的Sg1序列如SEQIDNO:11所示，Sg2引物序列如SEQIDNO:12所示；SPL9cd的Sg1序列如SEQIDNO:14所示，Sg2引物序列如SEQIDNO:15所示；SPL13Aab的Sg1序列如SEQIDNO:17所示，Sg2引物序列如SEQIDNO:18所示；SPL13Acd的Sg1序列如SEQIDNO:20所示，Sg2引物序列如SEQIDNO:21所示；SPL6e的Sg1序列如SEQIDNO:23所示，Sg2引物序列如SEQIDNO:24所示。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 华中农业大学 一种用于提高大豆产量的CRISPR/Cas9基因编辑载体及其制备方法和应用

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