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申请/专利权人：生态环境部华南环境科学研究所(生态环境部生态环境应急研究所)
申请日：2023-09-18
公开（公告）日：2024-05-14
公开（公告）号：CN117126843B
主分类号：C12N15/10
分类号：C12N15/10
优先权：
专利状态码：有效-授权
法律状态：2024.05.14#授权;2023.12.15#实质审查的生效;2023.11.28#公开
摘要：本发明公开了一种用于小型浮游动物单个体的DNA提取方法，涉及浮游动物DNA提取技术领域，该方法依次包括以下步骤：1将所采集的小型浮游动物用中性鲁格氏液固定，转移至计数框中，冲洗，吸取小型浮游动物单个体置于PCR管内，晾干；2加入DNA裂解液裂解，热敷，将PCR管埋入保温盒中并置于超声波均质器下，超声破碎；3立即置于水浴加热，然后置于超声波均质器下，再次超声破碎；4将再次超声破碎后的PCR管热敷，置于冰上，急速冷冻，再取出至室温下离心，得小型浮游动物单个体DNA。本发明能较大限度减少提取过程中DNA损耗，有效解决了现有技术提取过程中外壳及细胞破碎困难和DNA浓度纯度低等问题。
主权项：1.一种用于小型浮游动物单个体的DNA提取方法，其特征在于，依次包括以下步骤：1将所采集的小型浮游动物用中性鲁格氏液固定，然后在体视显微镜下使用毛细玻璃管将单个个体分离并转移至无菌的1mL计数框中，无菌超纯水冲洗2-3次，使用毛细玻璃管吸取小型浮游动物单个体置于PCR管内，最后加入无水乙醇晾干；2向PCR管内加入DNA裂解液裂解，在50-60℃温度下热敷4-6h软化，然后将PCR管埋入装有冰的保温盒中并置于超声波均质器下，将超声探头埋入被包裹的PCR管旁，超声破碎；所述DNA裂解液为Tris-HCl9-11mM，Na2EDTA0.4-0.6mM，其余为ddH2O，pH为8.0；3立即将超声破碎后PCR管置于80℃温度下水浴加热，然后置于超声波均质器下，将超声探头埋入PCR管旁，再次超声破碎；4将再次超声破碎后的PCR管在95℃温度下热敷30min，然后将PCR管置于冰上，在-80℃温度下急速冷冻10min，再取出至室温下离心，得小型浮游动物单个体DNA。
全文数据：
权利要求：
百度查询： 生态环境部华南环境科学研究所(生态环境部生态环境应急研究所) 一种用于小型浮游动物单个体的DNA提取方法
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