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【发明授权】一种植物程序化花粉自清除CRISPR/Cas基因编辑方法_中国农业科学院作物科学研究所_202310424412.7 

申请/专利权人:中国农业科学院作物科学研究所

申请日:2023-04-20

公开(公告)日:2024-05-14

公开(公告)号:CN116926109B

主分类号:C12N15/82

分类号:C12N15/82;C12N15/56;A01H6/46;A01H5/00

优先权:

专利状态码:有效-授权

法律状态:2024.05.14#授权;2023.11.10#实质审查的生效;2023.10.24#公开

摘要:本发明公开了一种植物程序化花粉自清除CRISPRCas基因编辑方法,涉及基因工程技术领域。本发明将花粉特异性启动子驱动的玉米α‑淀粉酶基因ZmAA1引入CRISPRCas9系统,得到程序化花粉自清除CRISPRCasPSEC系统;当PSEC存在且为半合子的情况下,衍生的单拷贝PSEC系会导致花粉“自杀”,并通过雌配子将PSEC遗传给下一代,且在活体中仍能发挥CRISPRCas基因编辑活性以创制受体目标突变。

主权项:1.一种植物程序化花粉自清除CRISPRCas系统,其特征在于,所述系统为将花粉特异性启动子驱动的玉米α-淀粉酶基因ZmAA1引入CRISPRCas9系统,得到程序化花粉自清除CRISPRCas系统;所述玉米α-淀粉酶基因ZmAA1的核苷酸序列如SEQIDNo.1所示;所述花粉特异性启动子为启动子PG47;所述启动子PG47的核苷酸序列如SEQIDNo.2所示;所述CRISPRCas9系统包括Cas9蛋白表达盒;所述Cas9蛋白表达盒自上游至下游依次包括用于启动Cas9蛋白表达的启动子、Cas9蛋白的编码基因和终止子;所述用于启动Cas9蛋白表达的启动子为玉米UBI启动子,所述终止子为NOS终止子;所述CRISPRCas9系统包括sgRNA1、sgRNA5和sgRNA6,能够对受体玉米基因组中的生长调节因子基因进行编辑;所述sgRNA1的编码基因的核苷酸序列如SEQIDNo.27第7086-7188位所示;所述sgRNA5的编码基因的核苷酸序列如SEQIDNo.27第7589-7691位所示;所述sgRNA6的编码基因的核苷酸序列如SEQIDNo.27第8092-8194位所示;所述生长调节因子基因为编码ZmGRF1、ZmGRF5、ZmGRF6蛋白的基因;所述ZmGRF1基因的核苷酸序列SEQIDNo.8所示;所述ZmGRF5基因的核苷酸序列SEQIDNo.9所示;所述ZmGRF6基因的核苷酸序列SEQIDNo.10所示。

全文数据:

权利要求:

百度查询: 中国农业科学院作物科学研究所 一种植物程序化花粉自清除CRISPR/Cas基因编辑方法

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