申请/专利权人：浙江大学

申请日：2014-07-09

公开（公告）日：2014-12-17

公开（公告）号：CN104212834A

主分类号：C12N15/85(2006.01)I

分类号：C12N15/85(2006.01)I;C12N15/66(2006.01)I;C12N5/10(2006.01)I;C12Q1/02(2006.01)I

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的视为撤回

法律状态：2017.02.08#发明专利申请公布后的视为撤回;2015.01.07#实质审查的生效;2014.12.17#公开

摘要：本发明提供构建pcDNA3.1（+）-hMATE1重组质粒的方法，获得的pcDNA3.1+-hMATE1重组质粒用于构建MDCK-hMATE1、MDCK-hOCT1hMATE1和MDCK-hOCT2hMATE1三种细胞模型。建立的MDCK-hMATE1细胞模型在MDCK细胞上稳定高表达hMATE1，可作为快速、高通量筛选hMATE1的底物和抑制剂的研究模型；可预测由hMATE1介导的药物-药物相互作用；可运用本发明建立的MDCK-hOCT1hMATE1和MDCK-hOCT2hMATE1双转染细胞模型研究细胞对hOCT1hOCT2和MATE1共同底物药物的转运研究。

主权项：一种构建pcDNA3.1（+）‑hMATE1重组质粒的方法，其特征在于，通过以下步骤实现：先从冰冻人肾脏组织中提取总RNA，经逆转录PCR获得cDNA文库，通过设计含有Hind Ⅲ和KpnⅠ两个酶切位点的特异性引物，其核苷酸序列如SEQ ID No：1和SEQ ID No：2所示，以该cDNA为模板特异性扩增获得人SLC47A1基因的编码区域片段，得到的目的基因片段通过Hind Ⅲ和KpnⅠ两个酶切位点连接到表达载体质粒pcDNA3.1+‑Hygro上，构建pcDNA3.1+‑hMATE1重组质粒。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江大学 稳定表达人MATE1转运体的细胞模型的构建及应用

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