申请/专利权人:丹娜(天津)生物科技有限公司
申请日:2016-02-29
公开(公告)日:2016-07-20
公开(公告)号:CN105784987A
主分类号:G01N33/531(2006.01)I
分类号:G01N33/531(2006.01)I;G01N30/02(2006.01)I;G01N21/31(2006.01)I
优先权:
专利状态码:失效-发明专利申请公布后的驳回
法律状态:2018.12.28#发明专利申请公布后的驳回;2016.08.17#实质审查的生效;2016.07.20#公开
摘要:本发明涉及一种新型隐球菌荚膜多糖GXM的制备方法,利用免疫亲和层析技术制备新型隐球菌荚膜多糖GXM,首先用醋酸钙和冰醋酸处理含荚膜多糖的分泌上清液后,用乙醇沉淀得到粗制荚膜多糖;然后用交联了荚膜多糖GXM单克隆抗体的免疫亲和层析柱对荚膜多糖GXM粗提物进行处理,得到纯化的荚膜多糖GXM。本方法简便、高效、成本低,并能够有效的避免使用有毒有害的化学试剂。此外,本发明还涉及一种新型隐球菌荚膜多糖GXM免疫亲和层析柱,用于纯化粗制荚膜多糖GXM,该免疫亲和层析柱可重复利用,有利于降低制备成本,提高制备效率,其制备方法简单易行。
主权项:一种新型隐球菌荚膜多糖GXM免疫亲和层析柱的制备方法,其特征在于,包括如下步骤:1将新型隐球菌荚膜多糖GXM单克隆抗体溶于溶液中,并与亲和层析基质混合成匀浆;2用交联缓冲液洗涤步骤1得到的匀浆,并离心,得到抗体与亲和层析基质的混合物;3用交联缓冲液重悬步骤2得到的抗体与亲和层析基质的混合物,向得到的混悬液中加入双功能结合剂,室温孵育20‑40分钟,并混匀,液固分离,得到亲和层析基质‑抗体交联复合物;4用封闭溶液洗涤步骤3得到的亲和层析基质‑抗体交联复合物;5将步骤4得到的亲和层析基质‑抗体交联复合物重悬于封闭溶液中,室温孵育1.5‑2.5小时,混匀;6装柱:将步骤5得到的亲和层析基质‑抗体交联复合物填充入层析柱中,制得新型隐球菌荚膜多糖GXM免疫亲和层析柱。
全文数据:
权利要求:
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