申请/专利权人：嘉兴学院

申请日：2018-09-18

公开（公告）日：2019-01-11

公开（公告）号：CN109182382A

主分类号：C12N15/88(2006.01)I

分类号：C12N15/88(2006.01)I;C12N5/10(2006.01)I

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2022.10.11#发明专利申请公布后的驳回;2019.02.12#实质审查的生效;2019.01.11#公开

摘要：本发明公开了用于抑制LGALS12基因表达的物质在抑制脂肪细胞分化中的应用。本发明要求保护用于抑制LGALS12基因表达的物质或用于抑制LGALS12蛋白活性的物质在抑制脂肪细胞分化中的应用、在抑制前体脂肪细胞分化中的应用、在抑制前体脂肪细胞向脂肪细胞分化中的应用、在猪的育种中的应用。本发明的发明人发现降低LGALS12蛋白水平可以抑制脂肪细胞分化。本发明对于瘦肉型猪的育种具有重大价值。

主权项：1.用于抑制LGALS12基因表达的物质或用于抑制LGALS12蛋白活性的物质在抑制脂肪细胞分化中的应用。

全文数据：用于抑制LGALS12基因表达的物质在抑制脂肪细胞分化中的应用技术领域本发明涉及用于抑制LGALS12基因表达的物质在抑制脂肪细胞分化中的应用。背景技术越来越多的研究结果表明脂肪组织不仅是被动的能量储存器官，而且是能够分泌多种激素类物质的内分泌器官。脂肪细胞分化及其调控失常与人类多种疾病如肥胖症、糖尿病、脂肪肝、高脂血症及乳腺癌等密切相关。对脂肪细胞分化机制及其调控的研究，不仅对于探讨上述疾病的致病过程具有重要理论意义，而且对于上述疾病的预防与治疗，特别是对于在细胞和分子水平上筛选针对上述疾病的药物，也具有实际意义。此外，脂肪细胞的分化调控相关的研究对于农业动物育种，尤其是优质瘦肉型猪新品种的培育也具有重要意义。我国是世界上最大的生猪养殖国和猪肉消费国，猪肉产量已经超过5000万吨。但随着生活水平的提高，人们对优质瘦肉猪的需求越来越旺盛。所谓的优质瘦肉猪，一方面要求皮下脂肪沉积较少，而同时肌内脂肪含量较高。如果想实现这样的育种目标，必须解析脂肪细胞分化调控的相关机理和调控措施。脂肪细胞的分化是一个复杂的过程，受到许多基因和多个信号通路调控。利用体外培养的细胞已经证明，脂肪细胞的形成可以分为两个阶段：间充质干细胞Mesenchymalstemcell,MSC可以分化为前体脂肪细胞preadipocyte；前体脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞adipocyte。脂肪组织中包含有大量的前体脂肪细胞，它们形态与成纤维细胞类似，Pref-1基因呈现高表达，并且具有一定的增殖能力。当给予一定的诱导条件，这些前体脂肪细胞能够启动分化进程，细胞形态由细长的成纤维样变成近圆形，胞内出现脂滴，前体脂肪细胞分化为成熟的脂肪细胞，Pref-1基因呈现低表达，油红O染色呈红色。当机体营养过剩或者激素水平异常，就可能诱导机体的前体脂肪细胞分化为成熟脂肪细胞。对于人类而言，可能会引起肥胖和其它代谢类疾病；对于农业动物而言，会引起体脂积累增加，瘦肉率降低。因此，研究前体脂肪细胞向脂肪细胞分化的调控过程，是研究动物脂类代谢的关键步骤，具有理论和实践的双重意义。发明内容本发明的目的是提供用于抑制LGALS12基因表达的物质在抑制脂肪细胞分化中的应用。本发明要求保护用于抑制LGALS12基因表达的物质或用于抑制LGALS12蛋白活性的物质在抑制脂肪细胞分化中的应用。所述脂肪细胞为猪脂肪细胞。所述脂肪细胞为肌肉组织来源的脂肪细胞或皮下脂肪组织来源的脂肪细胞。本发明要求保护用于抑制LGALS12基因表达的物质或用于抑制LGALS12蛋白活性的物质在抑制前体脂肪细胞分化中的应用。所述前体脂肪细胞为猪前体脂肪细胞。所述前体脂肪细胞为肌肉组织来源的前体脂肪细胞或皮下脂肪组织来源的前体脂肪细胞。本发明还保护用于抑制LGALS12基因表达的物质或用于抑制LGALS12蛋白活性的物质在抑制前体脂肪细胞向脂肪细胞分化中的应用。所述前体脂肪细胞为猪前体脂肪细胞。所述前体脂肪细胞为肌肉组织来源的前体脂肪细胞或皮下脂肪组织来源的前体脂肪细胞。本发明还保护用于抑制LGALS12基因表达的物质或用于抑制LGALS12蛋白活性的物质在猪的育种中的应用；所述育种目标为获得瘦肉型猪。本发明还保护用于抑制LGALS12基因表达的物质或用于抑制LGALS12蛋白活性的物质的应用，为降低脂肪细胞中脂滴的含量和或甘油三酯的含量。所述脂肪细胞为猪脂肪细胞。所述脂肪细胞为肌肉组织来源的脂肪细胞或皮下脂肪组织来源的脂肪细胞。本发明还保护用于抑制LGALS12基因表达的物质或用于抑制LGALS12蛋白活性的物质在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下a、b、c、d或e：a抑制脂肪细胞分化；b抑制前体脂肪细胞分化；c抑制前体脂肪细胞向脂肪细胞分化；d猪的育种；所述育种目标为获得瘦肉型猪；e降低脂肪细胞中脂滴的含量和或甘油三酯的含量。所述脂肪细胞为猪脂肪细胞。所述脂肪细胞为肌肉组织来源的脂肪细胞或皮下脂肪组织来源的脂肪细胞。所述前体脂肪细胞为猪前体脂肪细胞。所述前体脂肪细胞为肌肉组织来源的前体脂肪细胞或皮下脂肪组织来源的前体脂肪细胞。以上任一所述LGALS12蛋白为半乳糖凝集素12。以上任一所述LGALS12蛋白如序列表的序列1所示。以上任一所述LGALS12基因为编码LGALS12蛋白的基因。以上任一所述LGALS12基因为编码区如序列表的序列2所示的基因。以上任一所述用于抑制LGALS12基因表达的物质为LGALS12-siRNA2、LGALS12-siRNA1或LGALS12-siRNA3。本发明还保护LGALS12-siRNA2、LGALS12-siRNA1或LGALS12-siRNA3。LGALS12-siRNA1为由单链核酸分子1-1和单链核酸分子1-2组成的具有粘末端的双链核酸分子。LGALS12-siRNA2为由单链核酸分子2-1和单链核酸分子2-2组成的具有粘末端的双链核酸分子。LGALS12-siRNA3为由单链核酸分子3-1和单链核酸分子3-2组成的具有粘末端的双链核酸分子。单链核酸分子1-1如序列表的序列5所示。单链核酸分子1-2如序列表的序列6所示。单链核酸分子2-1如序列表的序列3所示。单链核酸分子2-2如序列表的序列4所示。单链核酸分子3-1如序列表的序列7所示。单链核酸分子3-2如序列表的序列8所示。本发明还保护序列表的序列1所示的蛋白质。本发明还保护序列表的序列1所示的蛋白质的编码基因。所述编码基因的编码区具体如序列表的序列2所示。本发明还保护序列表的序列1所示的蛋白质在促进脂肪细胞分化中的应用。所述脂肪细胞为猪脂肪细胞。所述脂肪细胞为肌肉组织来源的脂肪细胞或皮下脂肪组织来源的脂肪细胞。以上任一所述猪具体可为外三元猪。为了研究半乳糖凝集素12在猪前体脂肪细胞分化过程中的作用，本发明的发明人设计并制备了针对LGALS12基因的siRNA，将siRNA感染猪的肌肉组织来源的前体脂肪细胞或皮下脂肪组织来源的前体脂肪细胞，检测细胞分化情况，检测成脂标志基因表达情况以及ERK12蛋白水平。结果表明，LGALS12-siRNA显著降低了LGALS12基因的表达，LGALS12基因表达降低后，细胞的脂质积累被抑制，成脂关键基因表达水平降低，脂解基因表达水平升高，PKA和Erk12的磷酸化水平增加。LGALS12蛋白可能通过抑制PKA-ERK12的磷酸化促进脂肪细胞分化，而LGALS12-siRNA对于LGALS12蛋白具有抑制作用，从而可以抑制脂肪细胞分化。本发明对于瘦肉型猪的育种具有重大价值。附图说明图1为诱导成脂分化前和诱导成脂分化后标志基因的表达情况。图2为诱导成脂分化前和诱导成脂分化后在倒置生物显微镜下观察的照片。图3为siRNA对LGALS12基因的抑制效果。图4为分光光度计检测OD值的结果。图5为细胞中的甘油三酯含量。图6为相关基因表达情况。图7为Westernblot检测HSL蛋白、FAS蛋白的水平。图8为干扰LGALS12后促进Erk12的磷酸化的结果。具体实施方式以下的实施例便于更好地理解本发明，但并不限定本发明。下述实施例中的实验方法，如无特殊说明，均为常规方法。下述实施例中所用的试验材料，如无特殊说明，均为自常规生化试剂商店购买得到的。以下实施例中的定量试验，均设置3-5个重复处理，并设置三次重复试验，试验数据以平均值±标准误Mean±SEM表示，采用SPSS16.0软件进行数据分析，用Studentt检验进行显著性检验。实施例中，基因相对表达水平采用2-△△Ct法计算，以β-actin作为内参基因。本发明的发明人从外三元猪中获得了序列表的序列1所示的LGALS12蛋白。LGALS12蛋白的全称为半乳糖凝集素12。外三元猪中，LGALS12基因的编码框如序列表的序列2所示。实施例1、LGALS12-siRNA的设计LGALS12-siRNA1为由单链核酸分子1-1和单链核酸分子1-2组成的具有粘末端的双链核酸分子；单链核酸分子1-1序列表的序列5：5'-GCCAGAUAUUGCCAUCCAUTT-3'；单链核酸分子1-2序列表的序列6：5'-AUGGAUGGCAAUAUCUGGCTT-3'。LGALS12-siRNA2为由单链核酸分子2-1和单链核酸分子2-2组成的具有粘末端的双链核酸分子；单链核酸分子2-1序列表的序列3：5'-GCGUGAAUGGACUCCACUUTT-3'；单链核酸分子2-2序列表的序列4：5'-AAGUGGAGUCCAUUCACGCTT-3'。LGALS12-siRNA3为由单链核酸分子3-1和单链核酸分子3-2组成的具有粘末端的双链核酸分子；单链核酸分子3-1序列表的序列7：5'-GGCUGAAGUUGGCACUCAATT-3'；单链核酸分子3-2序列表的序列8：5'-UUGAGUGCCAACUUCAGCCTT-3'。Scramble-siRNA由单链核酸分子4-1和单链核酸分子4-2组成的具有粘末端的双链核酸分子；单链核酸分子4-1：5'-UUCUCCGAACGUGUCACGUTT-3'；单链核酸分子4-2：5'-ACGUGACACGUUCGGAGAATT-3'。实施例2、LGALS12-siRNA抑制脂肪细胞分化一、猪前体脂肪细胞的制备洗涤液pH7.2-7.4：NaCl2g、KCl0.05g、Na2HPO4·12H2O0.725g、KH2PO40.05g，定容至250mL，高压灭菌后加入青霉素和链霉素，使青霉素浓度为100IUmL、链霉素浓度为100μgmL，4℃备用。消化液：0.1gI型胶原酶Gibco、2g牛血清白蛋白，溶解于100mL超纯水，用0.22μm滤膜过滤，收集滤液，10mL支进行分装，-20℃保存备用。无菌状态下采集1-3日龄外三元猪仔猪的背最长肌，用洗涤液洗涤，然后剪成约1mm3的组织块；取组织块，浸没于消化液中，37℃振荡消化90-120min，然后用200目钢筛过滤并收集滤液；取滤液，常温、1500rpm离心10min，收集细胞沉淀，用DMEM完全培养基重悬，得到细胞悬液；将细胞悬液接种于35mm培养皿中接种密度为：5×104个细胞cm2，加入适量的DMEM完全培养基，置37℃、5％CO2培养箱培养1h；采用差速贴壁法，收集贴壁的细胞，即为肌肉组织来源的猪前体脂肪细胞。无菌状态下采集1-3日龄外三元猪仔猪的皮下脂肪组织，用洗涤液洗涤，然后剪成约1mm3的组织块；取组织块，浸没于消化液中，37℃振荡消化45-60min，然后用200目钢筛过滤并收集滤液；取滤液，常温、1500rpm离心10min，收集细胞沉淀，即为皮下脂肪组织来源的猪前体脂肪细胞。将肌肉组织来源的猪前体脂肪细胞和皮下脂肪组织来源的猪前体脂肪细胞进行形态观察。肌肉组织来源的猪前体脂肪细胞和皮下脂肪组织来源的猪前体脂肪细胞分别进行诱导成脂分化方法同步骤三的6，检测诱导成脂分化前和诱导成脂分化后标志基因pref-1基因的表达情况。结果见图1，IM对应肌肉组织来源的猪前体脂肪细胞，SC对应皮下脂肪组织来源的猪前体脂肪细胞。肌肉组织来源的猪前体脂肪细胞和皮下脂肪组织来源的猪前体脂肪细胞分别进行诱导成脂分化方法同步骤三的6，然后用10％甲醛固定30min，然后用PBS缓冲液充分洗涤细胞，然后用60％油红O工作液染色30min，然后用PBS缓冲液充分洗涤细胞，在倒置荧光生物显微镜下观察的照片见图2。图2中,A对应肌肉组织来源的猪前体脂肪细胞，B对应皮下脂肪组织来源的猪前体脂肪细胞。二、siRNA感染猪前体脂肪细胞后对LGALS12基因表达的影响供试siRNA为：LGALS12-siRNA1、LGALS12-siRNA2、LGALS12-siRNA3或Scramble-siRNA。供试细胞为：步骤一制备的肌肉组织来源的猪前体脂肪细胞或皮下脂肪组织来源的猪前体脂肪细胞。1、取0.6nmol供试siRNA，加入Opti-MEM培养基至体积为1.5ml，充分混匀，孵育5min。2、取30μl脂质体2000，加入Opti-MEM培养基至体积为1.5ml，充分混匀，孵育5min。3、将步骤1得到的溶液和步骤2得到的溶液混合，震荡混匀，孵育20min，得到混合液。4、将供试细胞接种至装有DMEM完全培养基的6孔细胞培养板约3×105个细胞孔，培养至细胞密度约80％-90％转染前2-4h更换新鲜的DMEM完全培养基。5、转染：将步骤3得到的混合液滴加到完成步骤4的细胞培养板中500μl孔，培养72小时。6、完成步骤5后，进行诱导成脂分化方法同步骤三的6，然后收集细胞，提取RNA，反转录得到cDNA。7、以步骤6得到的cDNA为模板，以β-actin基因为内参基因，采用real-timePCR检测LGALS12基因的相对表达水平。用于检测LGALS12基因的引物：CCCGACGGCTGTCACCAAGA；CAACCCTCGCTTCCATACCA。用于检测β-actin基因的引物：CGTGAAAAGATGACCCAGATCA；CACAGCCTGGATGGCTACGT。反应体系25μl：SYBRPremixExTaqTM2×12.5μl，上游引物10μmolL1μl，下游引物10μmolL1μl，cDNA模板2μl，ddH2O8.5μl。反应程序：95℃预变性30s、95℃变性5s、60℃退火30s，共45个循环。结果见图3。图3中，A为肌肉组织来源的猪前体脂肪细胞，B为皮下脂肪组织来源的猪前体脂肪细胞。LGALS12-siRNA1、LGALS12-siRNA2和LGALS12-siRNA3均能有效沉默LGALS12基因，抑制细胞中LGALS12基因的表达。对于肌肉组织来源的猪前体脂肪细胞来说，LGALS12-siRNA2的效果最好。对于皮下脂肪组织来源的猪前体脂肪细胞来说，三种LGALS12-siRNA效果无显著差异。三、沉默LGALS12基因对猪前体脂肪细胞分化的影响供试细胞为：步骤一制备的肌肉组织来源的猪前体脂肪细胞或皮下脂肪组织来源的猪前体脂肪细胞。1、取0.6nmol供试siRNALGALS12-siRNA2或Scramble-siRNA，加入Opti-MEM培养基至体积为1.5ml，充分混匀，孵育5min。2、取30μl脂质体2000，加入Opti-MEM培养基至体积为1.5ml，充分混匀，孵育5min。3、将步骤1得到的溶液和步骤2得到的溶液混合，震荡混匀，孵育20min，得到混合液。4、将供试细胞接种至装有DMEM完全培养基的6孔细胞培养板约106个细胞孔，培养至细胞密度约80％-90％转染前2-4h更换新鲜的DMEM完全培养基。5、转染：将步骤3得到的混合液滴加到完成步骤4的细胞培养板中500μl孔，培养72小时。6、完成步骤5后，收集细胞，诱导成脂分化。诱导成脂分化的具体步骤：在含0.5mMIBMX、1μMDEX和5μgmlinsulin的DMEM完全培养基中培养2天，然后转移至含5μgmlinsulin的DMEM完全培养基培养8天，然后弃除培养基并用PBS缓冲液充分洗涤细胞。7、完成步骤6后，用10％甲醛固定30min，然后用PBS缓冲液充分洗涤细胞，然后用60％油红O工作液染色30min，然后用PBS缓冲液充分洗涤细胞，在每孔加入1ml异丙醇，充分震荡1分钟，采用分光光度计检测OD值510nm。结果见图4。图4中，A为肌肉组织来源的猪前体脂肪细胞，B为皮下脂肪组织来源的猪前体脂肪细胞。8、完成步骤6后，收集细胞，利用甘油三酯试剂盒南京建成检测细胞中的甘油三酯含量，结果以单位细胞总蛋白g中甘油三酯的含量表示mmol。结果见图5。图5中，A为肌肉组织来源的猪前体脂肪细胞，B为皮下脂肪组织来源的猪前体脂肪细胞。结果表明，LGALS12-siRNA2能够抑制前体脂肪细胞进行诱导成脂分化后细胞中脂滴的积累**P0.01和胞内甘油三酯含量**P0.01，显著降低前体脂肪细胞向脂肪细胞的分化程度。四、相关基因表达情况成脂标志蛋白包括：过氧化物酶体增殖物激活受体γPeroxisomeproliferator-activatedreceptorγ,PPARγ、脂肪酸结合蛋白2Adipocyteprotein2,ap2和脂肪酸合成酶Fattyacidsynthetase，FAS。脂解蛋白包括：激素敏感脂肪酶Hormonesensitivelipase，HSL、脂肪甘油三酯脂肪酶Adiposetriglyceridelipase,ATGL、脂蛋白脂肪酶Lipoproteinlipase，LPL。完成步骤三的6后，利用TRIZOL收集细胞，提取RNA，反转录得到cDNA。以cDNA为模板，以β-actin基因为内参基因，采用real-timePCR检测PPARγ基因、aP2基因、FAS基因、HSL基因、ATGL基因、LPL基因的相对表达水平。检测PPARγ基因的引物：AGGACTACCAAAGTGCCATCAAA；GAGGCTTTATCCCCACAGACAC。检测aP2基因的引物：GAGCACCATAACCTTAGATGGA；AAATTCTGGTAGCCGTGACA。检测FAS基因的引物：AGCCTAACTCCTCGCTGCAAT；TCCTTGGAACCGTCTGTGTTC。检测HSL基因的引物：CACTGACTGCTGACCCCAAG；TCCTCACTGTCCTGTCCTTCAC。检测ATGL基因的引物：CGTGAAAAGATGACCCAGATCA；CACAGCCTGGATGGCTACGT。检测LPL基因的引物：GGAGAGAGGAAGGGAAAACAGAG；AGACCGACCAATAAACTGCAAAG。检测β-actin基因的引物：CGTGAAAAGATGACCCAGATCA；CACAGCCTGGATGGCTACGT。反应体系25μl：SYBRPremixExTaqTM2×12.5μl，上游引物10μmolL1μl，下游引物10μmolL1μl，cDNA模板2μl，ddH2O8.5μl。反应程序：95℃预变性30s、95℃变性5s、60℃退火30s，共45个循环。结果所见图6。图6中，IM对应肌肉组织来源的猪前体脂肪细胞，SC对应皮下脂肪组织来源的猪前体脂肪细胞。LGALS12-siRNA2明显降低了PPARγ基因、aP2基因和FAS基因的表达水平，并且显著上调了HSL基因的表达水平。对于皮下脂肪组织来源的猪前体脂肪细胞来说，LGALS12-siRNA2明显显著增加ATGL基因的表达水平。完成步骤三的6后，收集细胞，提取总蛋白，通过Westernblot检测HSL蛋白、FAS蛋白的水平通过灰度进行定量。结果见图7。图7中，IM对应肌肉组织来源的猪前体脂肪细胞，SC对应皮下脂肪组织来源的猪前体脂肪细胞。LGALS12-siRNA2明显下调了FAS蛋白的水平，并且显著上调了HSL蛋白的水平。五、干扰LGALS12后促进Erk12的磷酸化完成步骤三的6后，收集细胞，提取总蛋白，通过Westernblot检测检测PKA-Erk12信号通路关键蛋白的水平。结果见图8。图8中，IM对应肌肉组织来源的猪前体脂肪细胞，SC对应皮下脂肪组织来源的猪前体脂肪细胞。LGALS12-siRNA2明显促进了PKA和Erk12的磷酸化，即LGALS12蛋白可能通过PKA-Erk12信号通路促进猪前体脂肪细胞分化。SEQUENCELISTING110嘉兴学院120用于抑制LGALS12基因表达的物质在抑制脂肪细胞分化中的应用130GNCYX1816181608170PatentInversion3.52101211314212PRT213Susscrofadomesticus4001MetSerProGlyGluLysLeuAspProLeuProAspThrPheIleLeu151015GlnProProValPheHisProValValProTyrValThrThrIlePhe202530GlyGlyLeuArgAlaGlyLysMetValGlnLeuGlnGlyValValPro354045LeuAspAlaArgArgPheGlnValAspPheGlnCysGlyCysSerLeu505560HisProArgProAspIleAlaIleHisPheAsnProArgPheHisThr65707580ThrLysProHisValIleCysAsnThrLeuGlnGlyGlyHisTrpGln859095AlaGluAlaArgTrpProHisLeuAlaLeuGlnArgGlyAlaSerPhe100105110LeuIleLeuPheLeuPheGlyAsnGluGluMetLysValSerValAsn115120125GlyLeuHisPheLeuHisTyrArgTyrArgLeuProLeuSerArgVal130135140AspThrLeuGlyIleTyrGlyAspIleLeuValThrAlaValGlyPhe145150155160LeuAsnIleAsnProPheValGluGlyGlySerGluTyrProValGly165170175HisProPheLeuLeuGlnSerProArgLeuGluValProCysSerArg180185190AlaLeuProArgGlyLeuTrpProGlyGlnValIleIleValArgGly195200205LeuValLeuProGluProLysAspPheThrLeuArgLeuArgAspGlu210215220AlaAlaHisValProValThrLeuArgAlaSerPheAlaAspArgThr225230235240LeuAlaTrpValSerArgTrpGlyGlyLysLysLeuIleProAlaPro245250255PheLeuPheTyrProGlnArgPhePheGluValLeuLeuLeuCysGln260265270GluGlyGlyLeuLysLeuAlaLeuAsnGlyGlnGlyLeuGlyAlaThr275280285SerLeuGlyProGlnAlaLeuGluArgLeuArgGluLeuHisIleSer290295300GlySerIleGlnLeuTyrCysValHisTyr3053102102211945212DNA213Susscrofadomesticus4002atgtcacctggagagaaactggacccgcttcctgacaccttcatcctgcagccgccagtc60ttccacccggtggttccttatgtcacgacgatttttggtggcctgcgagcaggcaagatg120gtccagctccagggagtggtccctctagatgcgcgcaggttccaggtggacttccagtgc180ggctgcagcctacatccccggccagatattgccatccatttcaaccctcgcttccatacc240accaagccccacgtcatctgcaacacccttcagggtgggcactggcaagccgaggcccgg300tggccccacctggccctgcagagaggagccagcttcctcatcctctttctctttggaaat360gaggagatgaaggtgagcgtgaatggactccactttctccactaccgctaccggctcccg420ctgtcccgtgtagacaccctgggcatatacggtgacatcttggtgacagccgtcgggttt480ctgaacatcaacccgtttgtggagggcggtagcgagtatccagttggacaccctttcctg540ctgcagagccccaggctggaggtgccctgttcgcgtgcccttccccggggtctctggccc600ggacaggtcatcatagtgcggggactggtcttgccagagccgaaggatttcacgctccgt660c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权利要求：1.用于抑制LGALS12基因表达的物质或用于抑制LGALS12蛋白活性的物质在抑制脂肪细胞分化中的应用。2.用于抑制LGALS12基因表达的物质或用于抑制LGALS12蛋白活性的物质在抑制前体脂肪细胞分化中的应用。3.用于抑制LGALS12基因表达的物质或用于抑制LGALS12蛋白活性的物质在抑制前体脂肪细胞向脂肪细胞分化中的应用。4.用于抑制LGALS12基因表达的物质或用于抑制LGALS12蛋白活性的物质在猪的育种中的应用；所述育种目标为获得瘦肉型猪。5.用于抑制LGALS12基因表达的物质或用于抑制LGALS12蛋白活性的物质的应用，为降低脂肪细胞中脂滴的含量和或甘油三酯的含量。6.用于抑制LGALS12基因表达的物质或用于抑制LGALS12蛋白活性的物质在制备产品中的应用；所述产品的功能为如下a、b、c、d或e：a抑制脂肪细胞分化；b抑制前体脂肪细胞分化；c抑制前体脂肪细胞向脂肪细胞分化；d猪的育种；所述育种目标为获得瘦肉型猪；e降低脂肪细胞中脂滴的含量和或甘油三酯的含量。7.LGALS12-siRNA2、LGALS12-siRNA1或LGALS12-siRNA3；LGALS12-siRNA1为由单链核酸分子1-1和单链核酸分子1-2组成的具有粘末端的双链核酸分子；LGALS12-siRNA2为由单链核酸分子2-1和单链核酸分子2-2组成的具有粘末端的双链核酸分子；LGALS12-siRNA3为由单链核酸分子3-1和单链核酸分子3-2组成的具有粘末端的双链核酸分子；单链核酸分子1-1如序列表的序列5所示。单链核酸分子1-2如序列表的序列6所示。单链核酸分子2-1如序列表的序列3所示。单链核酸分子2-2如序列表的序列4所示。单链核酸分子3-1如序列表的序列7所示。单链核酸分子3-2如序列表的序列8所示。8.序列表的序列1所示的蛋白质。9.权利要求1所述蛋白质的编码基因。10.序列表的序列1所示的蛋白质在促进脂肪细胞分化中的应用。

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