申请/专利权人：广东恒诚制药有限公司

申请日：2017-12-20

公开（公告）日：2019-06-28

公开（公告）号：CN109939137A

主分类号：A61K36/489(2006.01)I

分类号：A61K36/489(2006.01)I;A61K9/16(2006.01)I;A61P35/00(2006.01)I

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的视为撤回

法律状态：2021.06.01#发明专利申请公布后的视为撤回;2019.06.28#公开

摘要：本发明公开了一种金菊五花茶颗粒的新工艺，由金银花15g，木棉花135g，葛花30g，野菊花15g，槐花60g，甘草5g作为原料药制成，采用超临界萃取制备而成，使得有效成分含量有很大提高，本发明还提供了金菊五花茶颗粒在制备抑制人淋巴瘤细胞U‑937细胞增殖药物中的应用。

主权项：1.一种金菊五花茶颗粒的新工艺，由其特征在于，由以下重量百分比的原料组成金银花15g，木棉花135g，葛花30g，野菊花15g，槐花60g，甘草5g作为原料药制成，其特征在于所述的方法由下列步骤组成：取金银花、木棉花、葛花、野菊花、槐花加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为3－5%，萃取压力10－30MPa，萃取时间45‑75min，温度40－50℃，CO2流量1－3m1g生药·min，得超临界萃取物，将上述超临界萃取物、加入蔗糖适量，混和，70%乙醇制颗粒，制成颗粒160g，即得。

全文数据：一种金菊五花茶颗粒的新工艺及应用技术领域本发明涉及中药技术领域，具体涉及一种金菊五花茶颗粒的新工艺及应用。背景技术金菊五花茶颗粒记载于《卫生部药品标准》中药成方制剂第十册第92页，由金银花15g，木棉花135g，葛花30g，野菊花15g，槐花60g，甘草5g作为原料药制成。以上六味，加水煎煮二次，第一次1.5小时，第二次1小时，合并煎液，滤过，滤液浓缩至相对密度约为1.14（热测），放冷至室温，加乙醇使含醇量达70%，搅拌，静置24h，取上清液，浓缩成相对密度为1.28〜1.30（60〜65°C）的清膏。取清膏1份、蔗糖4.4份及乙醇适量，制成颗粒，干燥，即得。能清热利湿，凉血解毒，清肝明目。用于大肠湿热所致的泄泻、痔血以及肝热目赤，风热咽痛，口舌溃烂。现有技术中，尚未有金菊五花茶颗粒在提取制备方面采用超临界技术的报道，而采用蒸水煎煮、醇沉的方法，工艺粗糙、落后，杂质多，提取率低，不能将某些高沸点，低挥发度的成分全部提取出来，而且长时间处于高温状态下，药物的挥发性成分容易逸散，某些易热解的物质或化学不稳定性成分也易被破坏，药材的有效成分损失巨大，严重影响了药物的疗效。因此，需要开发一种有效成分高、质量稳定可靠，适用于现代化生产金菊五花茶颗粒。发明内容发明目的：为了解决上述问题，本发明的目的在于提供一种有效成分高、质量稳定可靠，适用于现代化生产金菊五花茶颗粒的新工艺。本发明的另一个目的在于提供一种金菊五花茶颗粒在制备抑制人淋巴瘤细胞U-937细胞增殖药物中的应用。技术方案：本发明的目的是通过如下的方案实现的：一种金菊五花茶颗粒的新工艺，由其特征在于，由以下重量百分比的原料组成金银花15g，木棉花135g，葛花30g，野菊花15g，槐花60g，甘草5g作为原料药制成，其特征在于所述的方法由下列步骤组成：取金银花、木棉花、葛花、野菊花、槐花加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为3－5%，萃取压力10－30MPa，萃取时间45-75min，温度40－50℃，CO2流量1－3m1g生药·min，得超临界萃取物，将上述超临界萃取物、加入蔗糖适量，混和，70%乙醇制颗粒，制成颗粒160g，即得。上述一种金菊五花茶颗粒的新工艺，其特征在于所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%。上述一种金菊五花茶颗粒的新工艺，其特征在于所述微波萃取功率500W，每次萃取10分钟。上述一种金菊五花茶颗粒的新工艺，其特征在于所述CO2超临界萃取的萃取萃取压力20MPa，萃取时间60min，萃取温度45℃，CO2流量2m1g生药·min。上述一种金菊五花茶颗粒在制备抑制人淋巴瘤细胞U-937细胞增殖药物中的应用。现有技术中，金菊五花茶颗粒一次10g，一日2次，采用本发明制备成的金菊五花茶颗粒一次6g，一日服用1次，在具有更多活性成分的条件下大大减少了服用量。此结论可以通过下述试验证明。试验一、不同方法制备的金菊五花茶颗粒中绿原酸含量的比较1、仪器及试药本发明金菊五花茶颗粒：按实施例3方法制备，使用260g原料药，经提取制成160g。原金菊五花茶颗粒，按《中华药典》2010版标准方法制备，使用260g原料药，经提取制成160g。UltiMate3000高效液相色谱仪；BP211D电子分析天平；绿原酸对照品中国药品生物制品检定所。2、方法以十八烷基硅烷键合硅胶为填充剂；以乙腈-0.3%磷酸溶液（9：91为流动相；检测波长为327nm。理论板数按绿原酸峰计算应不低于3000。对照品溶液的制备：取绿原酸对照品适量，精密称定，置棕色量瓶中，加50%甲醇制成每1ml含15μg的溶液，即得。供试品溶液的制备：取本发明金菊五花茶颗粒和原金菊五花茶颗粒，研细，混匀，取0.2g，精密称定，置具塞锥形瓶中，精密加入50%乙醇50ml，密塞，称定重量，超声处理（功率250W，频率40kKz）10分钟，放冷，再称定重量，用50%乙醇补足减失的重量，摇匀，滤过，取续滤液，即得。测定法分别精密吸取对照品溶液与供试品溶液各10μl，注入液相色谱仪，测定，即得。3、结果结果表明，本发明金菊五花茶颗粒中绿原酸的含量为17.88mg10g；而金菊五花茶颗粒中葛根素的含量为7.48mg10g，在服用量减少的情况下，绿原酸含量有很大提高。上述研究表明，采用本发明制备的金菊五花茶颗粒，有效成分含量高于《卫生部药品标准》标准法制备的金菊五花茶颗粒。具体实施方式以下通过实施例形式，对本发明的上述内容再作进一步的详细说明，但不应将此理解为本发明上述主题的范围仅限于以下的实例，凡基于本发明上述内容所实现的技术均属于本发明的范围。实施例1取金银花、木棉花、葛花、野菊花、槐花加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为3%，萃取压力10MPa，萃取时间45min，温度40℃，CO2流量1m1g生药·min，得超临界萃取物，将上述超临界萃取物、加入蔗糖适量，混和，70%乙醇制颗粒，制成颗粒160g，即得。经检测，成品中绿原酸的含量为16.42mg10g。实施例2取金银花、木棉花、葛花、野菊花、槐花加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为5%，萃取压力30MPa，萃取时间75min，温度50℃，CO2流量3m1g生药·min，得超临界萃取物，将上述超临界萃取物、加入蔗糖适量，混和，70%乙醇制颗粒，制成颗粒160g，即得。经检测，成品中绿原酸的含量为15.83mg10g。实施例3取金银花、木棉花、葛花、野菊花、槐花加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%，萃取压力20MPa，萃取时间60min，温度45℃，CO2流量1－3m1g生药·min，得超临界萃取物，将上述超临界萃取物、加入蔗糖适量，混和，70%乙醇制颗粒，制成颗粒160g，即得。经检测，成品中绿原酸的含量为17.88mg10g。实施例4：金菊五花茶颗粒抑制人淋巴瘤细胞U-937细胞增殖的实验研究资料1实验材料1.1实验用细胞株人淋巴瘤细胞U-937细胞增殖，上海酶联检测技术有限公司，DMEM+10%FBS常规培养。1.2实验药物研究药物：本发明金菊五花茶颗粒：按实施例3方法制备。药液储液：称取100mg金菊五花茶颗粒，溶于5ml无水乙醇中，0.2μm滤器过滤，500μldoff管分装，-20℃存储，同时0.2μm滤器过滤无水乙醇以备对照组之用。1.3实验试剂DMEM（卡迈舒（上海）生物科技有限公司批号：20161102）；胎牛血清FBS（广州蕊特生物科技有限公司批号：20161005）；NaHCO3（广州市昱浩贸易有限公司批号：20160501）；Trypsin（上海雅心生物技术有限公司批号：20160401）；EDTA（广州崇骏化工有限公司批号：201510）；PenicillinGSodiumSalt（大连美仑生物技术有限公司批号：20160214）；StreptomycinSulfate（上海浩然生物技术有限公司批号：20160809）；无水乙醇（南阳市恒鑫光电物资有限公司批号：160910145）；MTT上海博谷生物科技有限公司批号：20161023;PBS（实验室自配）；1.4实验器材金相倒置显微镜（SEEPACK型号：L-323）；可见-紫外光微孔板检测仪（德国Eppendorf型号：PlateReaderAF2200）；CO2培养箱（启前型号：QQ-80A-II）；超净台（东莞市利安达环境科技有限公司型号：LCJT-2A）；纯水仪（超康型号：CK）；精密移液器（BG-easyPIPET移液器S1000）；电子天平（德国赛多利斯有限公司型号：BP211D）；全自动高压灭菌锅（上海博迅公司型号：YXQ-LS-75SII）；台式电热鼓风干燥箱（苏州江东精密仪器有限公司型号：DHG-9123A）；液氮罐（四川山立低温设备有限公司型号：CMSH100）；低速离心机上海家舜玻璃仪器有限公司型号：TDL-40B）；0.2μm滤器（密理博:MPGP02001）；10cm培养皿泰州市建军医疗用品厂、96孔培养板（泰州市建军医疗用品厂）；细胞计数板；离心管、移液管、Tips若干。2实验方法1）U-937细胞用DMEM+10%FBS于37℃、5%CO2进行常规培养（10cm培养皿），当细胞生长至对数期时，收集细胞，弃去培养液，PBS轻洗3遍，加入3ml0.25%胰蛋白酶-0.04%EDTA，37℃消化2min后，向其中加入5ml完全培养基中和反应，吹打细胞后将其转入离心管中，1000rpm离心5min，调整细胞悬液浓度3×104个ml。2）将细胞种入96孔培养板中，每孔加入细胞悬液180μl，培养板放入细胞培养箱中（37℃，5%CO2）常规培养。3）根据细胞生长情况，一般长至50%-70%，加入金菊五花茶颗粒溶液，继续培养24h。4）24h后加入20μlMTT溶液（5mgml，即0.5%MTT），继续培养4h。5）4h后扣板法倒去上清，用吸水纸轻轻拍干，每孔加入200μl二甲基亚砜，置摇床上低速振荡10min，使结晶物充分溶解。在酶联免疫检测仪490nm处测量各孔的吸光值。6）同时设置本底（不加细胞，只加培养液），对照孔（细胞、相同浓度的药物溶解介质、培养液、MTT、二甲基亚砜），每组设定6个复孔。7）结果以药物对细胞的抑制率表示：细胞增值抑制率（%）=（对照孔OD值-给药孔OD值）对照孔OD值×100%。实验重复3次。3统计处理采用MicrosoftExcel2003软件中的相关分析和Studentt检验，数据以mean±S.D.表示。4实验结果MTT法实验后统计结果显示，与对照组比较，当剂量达到5mgml时，对PC-3细胞增殖抑制有差异（P0.05），剂量在10mgml时该差异具有显著性（P0.01），当剂量达到15-20mgml时有极显著性差异（P0.001）。表1金菊五花茶颗粒对U-937细胞增殖抑制影响研究（X±SD）组别药物浓度mgml抑制率（%）对照组001516.7±10.5221029.5±13.49*31536.6±15.36**42047.5±16.71**注：与对照组比较，*P0.01；**P0.0015实验结论金菊五花茶颗粒可以抑制U-937细胞增殖，减少U-937细胞的细胞生长数目，该作用呈剂量依赖性。

权利要求：1.一种金菊五花茶颗粒的新工艺，由其特征在于，由以下重量百分比的原料组成金银花15g，木棉花135g，葛花30g，野菊花15g，槐花60g，甘草5g作为原料药制成，其特征在于所述的方法由下列步骤组成：取金银花、木棉花、葛花、野菊花、槐花加入到CO2超临界萃取器中，乙醇作为夹带剂，夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为3－5%，萃取压力10－30MPa，萃取时间45-75min，温度40－50℃，CO2流量1－3m1g生药·min，得超临界萃取物，将上述超临界萃取物、加入蔗糖适量，混和，70%乙醇制颗粒，制成颗粒160g，即得。2.根据权利要求1所述一种金菊五花茶颗粒的新工艺，其特征在于所述CO2超临界萃取夹带剂占总萃取溶剂的体积百分比为4%。3.根据权利要求1所述一种金菊五花茶颗粒的新工艺，其特征在于所述CO2超临界萃取的萃取采用萃取压力15MPa，萃取时间60min，萃取温度45℃，CO2流量2m1g生药·min。4.根据权利要求1所述一种金菊五花茶颗粒在制备抑制人淋巴瘤细胞U-937细胞增殖药物中的应用。

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