申请/专利权人：江苏省农业科学院

申请日：2019-07-08

公开（公告）日：2019-09-24

公开（公告）号：CN110272846A

主分类号：C12N1/20(20060101)

分类号：C12N1/20(20060101);A23L2/38(20060101);A23C9/123(20060101);A23L19/20(20160101);A23L33/00(20160101);C12R1/25(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2023.10.27#发明专利申请公布后的驳回;2019.10.22#实质审查的生效;2019.09.24#公开

摘要：本发明公开了一株具有ABTS自由基和PTIO自由基清除活性的植物乳杆菌，其分类命名为植物乳杆菌Lactobacillusplantarum，菌株号FM‑LP‑9，该菌株于2018年11月5在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，保藏号为CGMCCNo.16701。该菌具有较强抗氧化能力，优良的发酵性能和较好的产酸和耐酸性能，并且具有很高ABTS自由基和PTIO自由基清除活性，有利于黑莓、蓝莓果汁的色泽稳定性保持。本发明的植物乳杆菌FM‑LP‑9，对提高其作为发酵菌种的发酵制品的抗氧化性能有很大的作用，具有广泛的应用前景。

主权项：1.一株具有ABTS自由基和PTIO自由基清除活性的植物乳杆菌，其分类命名为植物乳杆菌Lactobacillusplantarum，菌株号FM-LP-9，该菌株于2018年11月5在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，保藏号为CGMCCNo.16701。

全文数据：具有ABTS自由基和PTIO自由基清除活性的植物乳杆菌及其应用技术领域本发明属于微生物技术领域，具体涉及一种具有ABTS自由基和PTIO自由基清除活性的植物乳杆菌及其应用。背景技术乳酸菌Lacticacidbacteria，LAB主要来源于传统发酵食品乳制品、开菲尔、发酵茶、发酵肉、泡菜等，也是肠道微生物的重要菌群。研究表明，乳酸菌具有多种功能作用，在机体的氧化应激、胆固醇降解、免疫力调节、炎症抵抗、肠道菌群的平衡调节和病原菌抑制等方面发挥着重要作用。因此，乳酸菌已经成为食品与药物等相关产品的主要配料，用于生产功能性发酵食品、保健品或是抗衰老药品。在生物体体内存在促氧化和抗氧化的动态平衡，当促氧化因素超出了细胞抗氧化机制的调节能力，促氧化和抗氧化的动态平衡被打破而偏向于促氧化方向时，一些自由基和活性氧的水平就会超出正常水平，由此机体和细胞就会处在一个氧化应激Oxidativestress的状态。氧化应激与损伤与一些常见的疾病如糖尿病、高血压、哮喘、过敏、阿尔茨海默氏病、帕金森氏病、慢性炎症、癌症等有着十分密切的关系。目前，活性氧和自由基与疾病的关系越来越受到重视，已成为生命科学和医学的前沿和热点，与之相应的抗氧化剂开发也成为食品学科的重要课题。开发具有自主知识产权的抗氧化功能的乳酸菌种将会是今后科技攻关与产品创新的重点和难点，也是一个热点，已经成为一个很有实际意义的研究课题。国内外对乳酸菌及其抗氧化能力进行了大量的研究，研究结果也显示，具有抗氧化能力的乳酸菌很多，常见的有干酪乳杆菌、鼠李糖乳杆菌、发酵乳杆菌、双歧杆菌、植物乳杆菌等，但真正成功利用于发酵功能食品只有为数不多的几株菌，其中包括发酵乳杆菌ME-3，299v菌株。发明内容本发明所要解决的技术问题是提供一株产酸快、耐酸性强、ABTS自由基和PTIO自由基高清除活性的植物乳杆菌菌株。本发明还要解决的技术问题是提供上述植物乳杆菌的应用，本发明菌株可用于抗氧化功能发酵食品和微生态制剂的开发。为解决上述技术问题，本发明采用的技术方案如下：一株具有ABTS自由基和PTIO自由基清除活性的植物乳杆菌，其分类命名为植物乳杆菌Lactobacillusplantarum，菌株号FM-LP-9，该菌株于2018年11月5在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，保藏地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中科院微生物研究所，保藏号为CGMCCNo.16701。本发明以MRS培养基为筛选培养基，从南京传统发酵酸豆、东北酸菜、潮州泡菜三种发酵蔬菜样品中分离筛选到75株单菌落，根据革兰氏染色和过氧化氢接触酶实验结果，初步鉴定出55株乳酸菌，以ABTS自由基清除率为初筛实验，筛选出9株清除率大于50％的菌株。然后对筛选出13株菌的DPPH自由基清除能力、PTIO自由基清除率、总还原力、超氧化化物歧化酶活力测定试验、谷胱甘肽过氧化物酶活性测定试验、胆盐耐受性试验、耐酸性试验进行复筛，综合复筛试验结果，筛选出一株产酸快、耐酸性强、ABTS自由基和PTIO自由基高清除活性的乳酸菌，命名为FM-LP-9，通过测定16srDNA序列如SEQIDNo.：1所示进行系统发育分析鉴定该菌株，鉴定结果是该菌株为植物乳杆菌。上述植物乳杆菌在制备发酵剂中的应用也在本发明的保护范围之内。上述植物乳杆菌在发酵制备高酸型蓝莓汁或黑莓汁产品中的应用也在本发明的保护范围之内。上述植物乳杆菌在发酵制备酸奶产品中的应用也在本发明的保护范围之内。上述植物乳杆菌在发酵制备泡菜产品中的应用也在本发明的保护范围之内。本发明提供一株新的植物乳杆菌菌株FM-LP-9，该菌株不仅产酸快，并且具有优良的耐酸和耐胆盐能力，同时该菌株还具有ABTS自由基和PTIO自由基高清除活性；并且该菌株具有较好的发酵性能，可以作为发酵菌种进行食品发酵，经该菌株发酵的酸奶，其抗氧化性能显著提高；经该菌株发酵制作的泡菜的抗氧化能力也显著提高；利用该菌株发酵高酸型蓝莓和黑莓水果，不仅能提高其抗氧化能力，也能有效的保持果汁中的花色苷含量，提高果汁的色泽稳定性，为抗氧化保健食品的开发提供可靠的菌株资源。有益效果：本发明与现有技术相比主要有如下优点和积极效果：1.植物乳杆菌LactobacillusplantarumFM-LP-9，分离南京传统发酵酸豆中，来源安全。2.植物乳杆菌LactobacillusplantarumFM-LP-9，具有较高的抗氧化活性，特别是ABTS自由基和PTIO自由基的高清除活性，并且具有较好的耐酸能力和发酵性能，可作为发酵菌种进行奶制品、蔬菜及水果的发酵，提高发酵制品的抗氧化能力。3.该菌株在高酸型的蓝莓和黑莓汁能够生长，并且能有效的保持果汁中的花色苷含量，提高果汁的色泽稳定性。4.经测定，菌株FM-LP-9的ABTS自由基清除活性特别高，在菌体密度为1.01×109～2.01×109cfuml条件下，清除率高达85％以上，菌株FM-LP-9的PTIO自由基清除活清除率高达75％以上，在目前已发表的文献中还未见到具有如此高还原活性的菌株。综合测定的体外抗氧化性能实验结果，FM-LP-9是一株具有高抗氧化活性的菌株，特别是其ABTS自由基和PTIO自由基清除活性特别高。5.试验证明，菌株FM-LP-9比较耐酸，在PH2.5的PBS缓冲液中保持4h，菌体密度仍能保持在2.32×108cfuml；其耐胆盐能力也较强，在牛胆汁盐含量为0.5％wv、PH8.0的PBS缓冲液中保持4h，菌体密度能保持在4.54×107cfuml。6.在发酵剂种添加了FM-LP-9，凝乳时间与纯商业发酵剂发酵的酸奶相比，没有显著差异。其发酵奶的粘度与接种纯商业发酵剂发酵酸奶的粘度没有显著差异。但添加了FM-LP-9发酵的酸奶的ABTS自由基和PTIO自由基清除活性是商业发酵剂发酵酸奶的1.45和1.29倍。可见经FM-LP-9发酵的酸奶的抗氧化性能显著提高。7.FM-LP-9接种发酵的产酸能力强，相同的发酵时间内，泡菜汁的pH值比自然发酵的pH值低约1.1，经FM-LP-9发酵的萝卜的ABTS自由基和PTIO自由基清除活性显著提高，是自然发酵萝卜的1.57倍和1.51倍，可见，经FM-LP-9接种发酵，能显著提高其抗氧化能力。发酵泡菜的感观评定高于自然发酵的泡菜。8.蓝莓、黑莓是高酸型水果，果汁的pH值在2.9左右，很多乳酸菌在其中不能生长，甚至存活时间不长，而FM-LP-9能够在其中存活，并且能够增殖，在45％黑莓汁和45％蓝莓汁里，菌体密度可以达到2.54×108cfuml接种量在1.54×107cfuml，与未发酵的相同浓度汁相比，FM-LP-9发酵的黑莓和蓝莓汁的清除ABTS自由基和PTIO自由基能力显著提高p江苏省农业科学院具有ABTS自由基和PTIO自由基清除活性的植物乳杆菌及其应用1SIPOSequenceListing1.011447DNALactobacillusplantarum植物乳杆菌1ccgctatcatgcagtcgaacgaactctggtattgattggtgcttgcatcatgatttacat60ttgagtgagtggcgaactggtgagtaacacgtgggaaacctgcccagaagcgggggataa120cacctggaaacagatgctaataccgcataacaacttggaccgcatggtccgagcttgaaa180gatggcttcggctatcacttttggatggtcccgcggcgtattagctagatggtggggtaa240cggctcaccatggcaatgatacgtagccgacctgagagggtaatcggccacattgggact300gagacacggcccaaactcctacgggaggcagcagtagggaatcttccacaatggacgaaa360gtctgatggagcaacgccgcgtgagtgaagaagggtttcggctcgtaaaactctgttgtt420aaagaagaacatatctgagagtaactgttcaggtattgacggtatttaaccagaaagcca480cggctaactacgtgccagcagccgcggtaatacgtaggtggcaagcgttgtccggattta540ttgggcgtaaagcgagcgcaggcggttttttaagtctgatgtgaaagccttcggctcaac600cgaagaagtgcatcggaaactgggaaacttgagtgcagaagaggacagtggaactccatg660tgtagcggtgaaatgcgtagatatatggaagaacaccagtggcgaaggcggctgtctggt720ctgtaactgacgctgaggctcgaaagtatgggtagcaaacaggattagataccctggtag780tccataccgtaaacgatgaatgctaagtgttggagggtttccgcccttcagtgctgcagc840taacgcattaagcattccgcctggggagtacggccgcaaggctgaaactcaaaggaattg900acgggggcccgcacaagcggtggagcatgtggtttaattcgaagctacgcgaagaacctt960accaggtcttgacatactatgcaaatctaagagattagacgttcccttcggggacatgga1020tacaggtggtgcatggttgtcgtcagctcgtgtcgtgagatgttgggttaagtcccgcaa1080cgagcgcaacccttattatcagttgccagcattaagttgggcactctggtgagactgccg1140gtgacaaaccggaggaaggtggggatgacgtcaaatcatcatgccccttatgacctgggc1200tacacacgtgctacaatggatggtacaacgagttgcgaactcgcgagagtaagctaatct1260cttaaagccattctcagttcggattgtaggctgcaactcgcctacatgaagtcggaatcg1320ctagtaatcgcggatcagcatgccgcggtgaatacgttcccgggccttgtacacaccgcc1380cgtcacaccatgagagtttgtaacacccaaagtcggtggggtaaccttttaggaaccagc1440cgcctag1447

权利要求：1.一株具有ABTS自由基和PTIO自由基清除活性的植物乳杆菌，其分类命名为植物乳杆菌Lactobacillusplantarum，菌株号FM-LP-9，该菌株于2018年11月5在中国微生物菌种保藏管理委员会普通微生物中心进行保藏，保藏号为CGMCCNo.16701。2.权利要求1所述的植物乳杆菌在制备发酵剂中的应用。3.权利要求1所述的植物乳杆菌在发酵制备高酸型蓝莓汁或黑莓汁产品中的应用。4.权利要求1所述的植物乳杆菌在发酵制备酸奶产品中的应用。5.权利要求1所述的植物乳杆菌在发酵制备泡菜产品中的应用。

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