申请/专利权人：南京黎明生物制品有限公司

申请日：2019-08-12

公开（公告）日：2019-10-01

公开（公告）号：CN110296878A

主分类号：G01N1/30(20060101)

分类号：G01N1/30(20060101);G01N21/64(20060101)

优先权：

专利状态码：失效-发明专利申请公布后的驳回

法律状态：2022.10.11#发明专利申请公布后的驳回;2019.11.01#实质审查的生效;2019.10.01#公开

摘要：本发明提供毛囊虫荧光染色液，具体涉及毛囊虫检测技术领域，包括纯化水、二甲基亚砜、甘油、荧光素、氢氧化钾和伊文思蓝，所述二甲基亚砜体积浓度为10%‑50%，所述甘油体积浓度为10%‑50%，所述荧光素质量浓度为2mgml‑10mgml，所述氢氧化钾质量浓度为0.05gml‑0.2gml，所述伊文思蓝质量浓度为5mgml‑50mgml，余量为纯化水。本发明操作简单，准确，染色用时短，一分钟内即可观察，提高了诊断效率。

主权项：1.毛囊虫荧光染色液，其特征在于，包括纯化水、二甲基亚砜、甘油、荧光素、氢氧化钾和伊文思蓝，所述二甲基亚砜体积浓度为10%-50%，所述甘油体积浓度为10%-50%，所述荧光素质量浓度为2mgml-10mgml，所述氢氧化钾质量浓度为0.05gml-0.2gml，所述伊文思蓝质量浓度为5mgml-50mgml，余量为纯化水。

全文数据：毛囊虫荧光染色液技术领域本发明属于毛囊虫检测技术领域，具体涉及毛囊虫荧光染色液。背景技术毛囊虫又称蠕形螨或毛囊螨，寄生于人的毛囊和皮脂腺，以上皮细胞、腺细胞和皮脂为营养，引起的皮肤慢性炎症称之为毛囊虫皮炎或蠕形螨病。毛囊虫多寄生于皮脂腺发达的面部，尤其多见于鼻、颧、颊、下颌等处。临床表现为持久性、反复发作的面部潮红，轻度毛细血管扩张，常伴烧灼感及刺痛，遇热遇光时症状更明显。多见于20-50岁女性，常被误诊为其它疾病而延误治疗。鉴于其临床症状与下列疾病有相似性，所以当临床诊断为玫瑰痤疮、并无明确长期外用激素软膏史的激素依赖性皮炎、原因不明的颜面再发性皮炎、屡治屡发的面部接触性皮炎、无明确过敏源的化妆品皮炎、症状较重的脂溢性皮炎、口周皮炎、酒渣鼻、痤疮等疾病时，均应该向患者建议进行毛囊虫检测，以排除毛囊虫感染的可能性。快速准确地诊断感染的原因对选择适合治疗至关重要，临床上常用的毛囊虫病诊断主要依据临床表现和显微镜直接镜检，操作不简便，检测速度慢，不利于及时诊治。显微镜直接镜检阳性率低，准确率低，背景杂质干扰多。检查方法受限于临床医生送检样本的敏感性、取材者的经验和检验医师的检测水平，且耗时长，不利于病人的治疗，尤其给重症病人的治疗带来了严重的危害。因此，急需一种能够解决现有问题的毛囊虫荧光染色液。发明内容本发明的目的是提供毛囊虫荧光染色液，该毛囊虫荧光染色液中的荧光素将结合毛囊虫细胞壁上的β-多糖，在荧光显微镜下可看到特定波长激发光下产生的荧光，有助于更清楚的观察毛囊虫结构。本发明操作简单，准确，染色用时短，一分钟内即可观察，提高了诊断效率。本发明提供了如下的技术方案：毛囊虫荧光染色液，包括纯化水、二甲基亚砜、甘油、荧光素、氢氧化钾和伊文思蓝，所述二甲基亚砜体积浓度为10％-50％，所述甘油体积浓度为10％-50％，所述荧光素质量浓度为2mgml-10mgml，所述氢氧化钾质量浓度为0.05gml-0.2gml，所述伊文思蓝质量浓度为5mgml-50mgml，余量为纯化水。优选的，还包括4-氨基安替比林，所述4-氨基安替比林质量浓度为0.02gml-0.1gml。4-氨基安替比林在碱性条件下也可显色，加强反应。优选的，所述荧光素为荧光白M2R中的Uvitex2B复合物或钙荧光白。荧光白M2R是一组被称为荧光增白剂或亮白剂或漂白剂的复合物。其中包括Uvitex2B复合物，该复合物在造纸、纺织及相关工业中得到了广泛的运用，主要是用于纸张和纺织物的增白及防治变黄。其与beta1-3和beta1-4多糖，比如说纤维素和几丁质，当用紫外和紫光照射时，会激发出浅蓝白色的荧光。Uvitex2B相对于钙荧光白CFW，作用相同，价格便宜，运用广泛。优选的，所述荧光素为荧光白M2R中的Uvitex2B复合物时，所述二甲基亚砜体积浓度为35％，所述甘油体积浓度为35％，所述Uvitex2B质量浓度为2mgml，所述氢氧化钾质量浓度为0.1gml，所述伊文思蓝质量浓度为10mgml，所述4-氨基安替比林质量浓度为0.4gml，余量为纯化水。优选的，荧光素为钙荧光白时，在荧光显微镜下可看到380nm-420nm的激发光下产生荧光，荧光素为荧光白M2R中的Uvitex2B复合物时，在荧光显微镜下可看到在波长为480nm激发光下产生的荧光。本发明中毛囊虫荧光染色液是一种含有荧光素和抑制背景荧光着色试剂的复合溶液。如果待测标本中含有毛囊虫，荧光素将结合毛囊虫细胞壁上的β-多糖，如几丁质和纤维素等，在荧光显微镜下可看到特定波长激发光下产生的荧光。KOH可用于溶解角质和皮脂，有助于更清楚的观察毛囊虫结构。本发明的有益效果是：本发明创新性的利用荧光素与毛囊虫细胞壁上的β-多糖结合，使用荧光素为钙荧光白，在荧光显微镜下可看到380nm-420nm的激发光下产生荧光，使用荧光素为荧光白M2R中的Uvitex2B复合物，在荧光显微镜下可看到在波长为480nm激发光下产生的荧光，从而检测出毛囊虫。操作简便，有利于及时诊治。附图说明附图用来提供对本发明的进一步理解，并且构成说明书的一部分，与本发明的实施例一起用于解释本发明，并不构成对本发明的限制。在附图中：图1为本发明的实施例2中的试剂1检测的效果图。具体实施方式实施例1荧光染色试剂的配制试剂1：于纯化水中加入二甲基亚砜、甘油、Uvitex2B、氢氧化钾、伊文思蓝和4-氨基安替比林，充分溶解，得到二甲基亚砜体积浓度为35％、甘油体积浓度为35％、Uvitex2B质量浓度2mgml、氢氧化钾质量浓度为0.1gml、伊文思蓝质量浓度为10mgml，4-氨基安替比林质量浓度为0.4gml的混合溶液。试剂2：于纯化水中加入二甲基亚砜、甘油、Uvitex2B、氢氧化钾和伊文思蓝，充分溶解，得到二甲基亚砜体积浓度为35％、甘油体积浓度为35％、Uvitex2B质量浓度2mgml、氢氧化钾质量浓度为0.1gml、伊文思蓝质量浓度为10mgml的混合溶液。实施例2皮脂标本的染色对比选取2份有毛囊虫感染的皮脂标本，分别放置于载玻片上，分别用试剂1,2进行染色染色1分钟，加上盖玻片，而后在荧光显微镜下观察毛囊虫，将显示出蓝色或蓝绿色虫体。结果显示两种试剂都能将皮脂标本中的毛囊虫染色，都属于合格产品，现将二者的对比效果，如表1所示：皮脂标本的染色对比试剂1试剂2染色效果好差显色时间长长有无杂质无无荧光亮度亮暗表1从上结果可知，试剂1的效果更好。实施例3溶液稳定性考察将试剂1，试剂2放置于室温6个月，然后对皮脂标本进行染色。从染色效果判断试剂的稳定性，结果如表2所示：试剂1和试剂2的稳定性测试试剂1试剂2染色效果好差沉淀结晶无无外观颜色不变不变表2结果表明，室温放置放置6个月后，试剂1、试剂2外观颜色均不变，无沉淀结晶现象，试剂能保持稳定，其中试剂1效果最好。以上所述，仅为本发明较佳的具体实施方式，但本发明的保护范围并不局限于此，任何熟悉本技术领域的技术人员在本发明揭露的技术范围内，根据本发明的技术方案及其发明构思加以等同替换或改变，都应涵盖在本发明的保护范围之内。

权利要求：1.毛囊虫荧光染色液，其特征在于，包括纯化水、二甲基亚砜、甘油、荧光素、氢氧化钾和伊文思蓝，所述二甲基亚砜体积浓度为10%-50%，所述甘油体积浓度为10%-50%，所述荧光素质量浓度为2mgml-10mgml，所述氢氧化钾质量浓度为0.05gml-0.2gml，所述伊文思蓝质量浓度为5mgml-50mgml，余量为纯化水。2.根据权利要求1所述的毛囊虫荧光染色液，其特征在于，还包括4-氨基安替比林，所述4-氨基安替比林质量浓度为0.02gml-0.1gml。3.根据权利要求2所述的毛囊虫荧光染色液，其特征在于，所述荧光素为荧光白M2R中的Uvitex2B复合物或钙荧光白。4.根据权利要求3所述的毛囊虫荧光染色液，其特征在于，所述荧光素为荧光白M2R中的Uvitex2B复合物时，所述二甲基亚砜体积浓度为35%，所述甘油体积浓度为35%，所述Uvitex2B质量浓度为2mgml，所述氢氧化钾质量浓度为0.1gml，所述伊文思蓝质量浓度为10mgml，所述4-氨基安替比林质量浓度为0.4gml，余量为纯化水。5.根据权利要求1所述的毛囊虫荧光染色液，其特征在于，所述荧光素为钙荧光白时，在荧光显微镜下可看到380nm-420nm的激发光下产生荧光；所述荧光素为荧光白M2R中的Uvitex2B复合物时，在荧光显微镜下可看到在波长为480nm激发光下产生的荧光。

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