【发明公布】中药活性成分靶向筛选方法及试剂盒_西北大学_202010803669.X 

申请/专利权人:西北大学

申请日:2020-08-11

发明/设计人:赵新锋;王静;李倩;袁心怡

公开(公告)日:2020-11-24

代理机构:西安中科汇知识产权代理有限公司

公开(公告)号:CN111983215A

代理人:刘玲玲

主分类号:G01N33/53(20060101)

地址:710069 陕西省西安市碑林区太白北路229号

分类号:G01N33/53(20060101);C07K17/08(20060101)

优先权:

专利状态码:在审-公开

法律状态:2020.11.24#公开

摘要:本发明公开了一种中药活性成分靶向筛选方法及试剂盒,其中,在该靶向筛选方法中由于使用的中药活性成分靶向筛选介质基于大肠杆菌素蛋白E7DNA酶非活性突变体CL7与其同源免疫蛋白Im7之间超高亲和作用力,所以实现了细胞裂解液中CL7标签融合GPCRs的一步可逆固定化,因此该靶向筛选方法集Im7CL7之间的超高亲和力和受体识别药物的高特异性为一体,可实现GPCRs靶向中药活性成分的高特异性靶向快速筛选。

主权项:1.中药活性成分靶向筛选方法,其特征在于,具体包括以下步骤:Step1:在盐酸酸性条件下,将固体基质与亚硝酸钠反应生成重氮盐,其中,所使用的固体基质为羟基化、氨基化、巯基化或羧基化修饰的微球、固体平面或固相萃取微柱;Step2:将his标签重组Im7与Step1生成的重氮盐反应生成Im7亲和基质,其中,Step1生成的重氮盐具体是与his标签重组Im7中his标签的咪唑基发生重氮盐反应;Step3:利用CL7与Im7之间的超高亲和力,将CL7标签融合GPCRs与Step2生成的Im7亲和基质反应生成中药活性成分靶向筛选介质;Step4:将待筛选的中药提取液与Step3生成的中药活性成分靶向筛选介质进行孵育,孵育结束后4℃离心,去除上清液,然后用pH=7.0的20mM乙酸铵缓冲溶液对沉淀进行洗涤,4℃离心分离洗涤液和沉淀,所得洗涤液中含有与GPCRs发生特异性结合的中药活性成分,对所得沉淀在30℃、pH=7的条件下实施TEV蛋白酶定点酶切,获得高纯度无标签GPCRs和CL7标签修饰的Im7亲和基质;Step5:在高浓度盐酸胍存在的条件下,对CL7标签修饰的Im7亲和基质进行变性处理,获得CL7肽链和Im7肽链修饰化固体基质;Step6:用低浓度盐酸胍诱导Im7肽链修饰化固体基质,复性重新获得Im7亲和基质。

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