申请/专利权人：中国农业科学院植物保护研究所

申请日：2019-02-10

公开（公告）日：2021-02-23

公开（公告）号：CN109757521B

主分类号：A01N63/30(20200101)

分类号：A01N63/30(20200101);A01N51/00(20060101);A01N43/56(20060101);A01P7/04(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2021.02.23#授权;2019.06.11#实质审查的生效;2019.05.17#公开

摘要：本发明属于农业技术领域，具体涉及一种布氏白僵菌菌剂及其应用。本发明的布氏白僵菌菌剂包括布氏白僵菌BRNS50206、混合辅助剂、矿物载体和谷物载体，其中，布氏白僵菌BRNS50206的保藏编号为CGMCCNo.15993。本发明将布氏白僵菌BRNS50206做为菌剂活性组分，专性侵染昆虫而对脊椎动物安全，无毒副作用，与环境天然融合，无损无污染，是环保安全的生物农药；本发明可应用于防治农作物、林木、草坪、牧草的蛴螬、根象甲、地老虎等种类害虫中。

主权项：1.布氏白僵菌菌剂，其特征在于，所述布氏白僵菌菌剂包括布氏白僵菌BRNS50206孢子粉、混合辅助剂、矿物载体、谷物载体和增效剂，其中，布氏白僵菌BRNS50206的保藏编号为CGMCCNo.15993，布氏白僵菌BRNS50206孢子粉5重量份、混合辅助剂4重量份、矿物载体20重量份、谷物载体10重量份，增效剂1重量份，所述增效剂为10%吡虫啉可湿性粉剂，所述布氏白僵菌菌剂的含孢量为19.2亿孢g，所述混合辅助剂为烷基丁二酸磺酸钠、半纤维素、海藻酸钠、壳聚糖按照质量比为15:5:4:1混合，所述矿物载体为凹凸棒土，所述谷物载体为花生荚壳粉。

全文数据：布氏白僵菌菌剂及其应用技术领域本发明属于农业技术领域，具体涉及布氏白僵菌菌剂及其应用。背景技术地下害虫包括蛴螬、根象甲、根叶甲、地老虎、蝼蛄、根蛆等200多种，其生活周期中至少有一个阶段生活在土壤中，取食作物、林木、花卉、牧草等植物的种子、种苗、根茎和地下果实，致使缺苗倒苗、植株因营养吸收不足而萎蔫甚至死亡，其为害隐蔽，难以预测预报。长期以来，我国主要依赖于化学农药防治害虫，由于化学杀虫剂的大量、连年施用，农产品、土壤和水域受到农药残留污染，对人类健康已构成严重威胁和损害。害虫抗药性的增强，使得用药量不断增加，防治费用倍增；有益天敌生物被大量损伤，生态环境遭到严重破坏，导致害虫的再增猖獗。为保护生态环境、保证食品和饲料的产量、品质和安全性，应用生物防治技术大面积控制农业害虫，采取害虫可持续治理措施势在必行昆虫病原真菌是最重要的杀虫微生物类群，在自然条件下约70％的昆虫病害是真菌引起的。其致病机制复杂，不会引起害虫产生抗性，对解决害虫的抗药性问题极具潜力。因此，昆虫病原真菌作为重要的替代农药。其中，布氏白僵菌Beauveriabrongniartii是一类昆虫病原真菌，能寄生7个目的70多种昆虫，通过附着于昆虫表皮、产生芽管穿透虫体表皮侵入、消耗虫体营养、自身快速繁殖、产生毒素，造成虫体组织损害和病变死亡。然而，田间应用发现，人工应用的白僵菌等在田间有一定的自然衰减，而其侵染目标昆虫需要一定机率和致病过程时间，因此，往往不能达到理想防治效果。发明内容本发明的目的在于提供一种布氏白僵菌菌剂。本发明的再一目的在于提供上述布氏白僵菌菌剂的应用。根据本发明具体实施方式的用于防治地下害虫的布氏白僵菌菌剂，包括布氏白僵菌BRNS50206、混合辅助剂、矿物载体和谷物载体，其中，布氏白僵菌BRNS50206的保藏编号为CGMCCNo.15993。根据本发明具体实施方式的用于防治地下害虫的布氏白僵菌菌剂，其包括以下重量份原料：布氏白僵菌孢子粉5～50份、混合辅助剂4～10份、矿物载体20～60份、谷物载体10～70份，其中，布氏白僵菌孢子粉的含量范围25-250亿g。根据本发明具体实施方式的布氏白僵菌菌剂，包括以下重量份原料：布氏白僵菌菌丝体15～25份、混合辅助剂4～10份、矿物载体20～60份、谷物载体10～70份，其中，菌丝体按含干重2.5％计算。根据本发明具体实施方式的布氏白僵菌菌剂，混合辅助剂为烷基丁二酸磺酸钠、半纤维素、海藻酸钠、壳聚糖按照质量比为15:5:4:1混合得到。根据本发明具体实施方式的布氏白僵菌菌剂，其特征在于，所述矿物载体为凹凸棒土、滑石粉、硅藻土、白炭黑、碳酸钙、陶土中的一种或多种。根据本发明具体实施方式的布氏白僵菌菌剂，所述谷物载体为花生荚壳粉、玉米芯粉、玉米秸粉、麦秸粉、稻秸粉、甜菜粉、蔗渣粉中的一种或多种。根据本发明具体实施方式的布氏白僵菌菌剂，所述布氏白僵菌菌剂还包括粘合剂0.1～6份，所述粘合剂为聚乙烯醇或羧甲基纤维素。根据本发明具体实施方式的布氏白僵菌菌剂，所述布氏白僵菌菌剂还包括增效剂1～4份。根据本发明具体实施方式的布氏白僵菌菌剂，所述增效剂为10％吡虫啉可湿性粉剂、25％噻虫嗪可湿性粉剂或20％氯虫苯甲酰胺悬浮剂。本发明的有益效果：本发明将布氏白僵菌BRNS50206做为菌剂活性组分，专性侵染昆虫而对脊椎动物安全，无毒副作用，与环境天然融合，无损无污染，是环保安全的生物农药；本发明可应用于防治农作物、林木、草坪、牧草的蛴螬、根象甲、地老虎等种类害虫中。混合辅助剂保护布氏白僵菌BRNS50206的生物活性和田间存活能力；增效剂与布氏白僵菌产生协同作用，加速了布氏白僵菌的侵染，提高了侵染效率；矿物载体、谷物载体在负载和分散活性组分的同时，还具有辅助保护布氏白僵菌活性、疏松土壤环境、促进布氏白僵菌田间存活和侵染的作用；粘合剂可在制造颗粒剂时加入，便于成型、利于投撒应用。附图说明图1显示本发明菌剂对小地老虎的毒力测定结果。本发明的布氏白僵菌BeauveriabrongniartiiBRNS50206菌株的保藏编号为CGMCCNo.15993，该菌株于2018年07月17日保存于中国普通微生物菌种保藏中心，保藏中心地址：北京市朝阳区北辰西路1号院中国科学院微生物研究所。具体实施方式实施例11将菌种孢子接种到液体培养基，其中含蔗糖3％、蛋白胨1％、酵母浸出粉0.25％、硫酸镁0.01％，余量为水，培养48-60小时，得到液体种子；然后将液体培养物接种到固体培养基，其中含谷物皮壳35～60％、麦麸35～60％、玉米粉5～10％，培养5～9天后，干燥后直接粉碎基质或分离抽提得到孢子粉；2按重量比配制烷基丁二酸磺酸钠:半纤维素:海藻酸钠:壳聚糖＝15:5:4:1的混合辅助剂；3将5重量份孢子粉、4重量份辅助剂与10重量份花生壳粉混合；4将1重量份10％吡虫啉可湿性粉剂加入到20重量份凹凸棒土中，混合均匀；5将步骤3、4得到的混合物再次混合，得到布氏白僵菌微粒剂。实施例21将菌种孢子接种到液体培养基，其中含蔗糖3％、蛋白胨1％、酵母浸出粉0.25％、硫酸镁0.01％，余量为水，培养48-60小时，得到液体种子；然后将液体培养物接种到固体培养基，其中含谷物皮壳35～60％、麦麸35～60％、玉米粉5～10％，培养5～9天后，干燥后直接粉碎基质或分离抽提得到孢子粉；2按重量比配制烷基丁二酸磺酸钠:半纤维素:海藻酸钠:壳聚糖＝15:5:4:1的混合辅助剂；3将20重量份孢子粉、6重量份辅助剂与10重量份玉米芯粉混合；4将2重量份25％噻虫嗪可湿性粉剂加入到20重量份硅藻土中，混合均匀；5将步骤3、4得到的混合物再次混合，得到布氏白僵菌微粒剂。实施例31将菌种孢子接种到液体培养基，其中含蔗糖3％、蛋白胨1％、酵母浸出粉0.25％、硫酸镁0.01％，余量为水，培养48-60小时，得到液体种子；然后将液体培养物接种到固体培养基，其中含谷物皮壳35～60％、麦麸35～60％、玉米粉5～10％，培养5～9天后，干燥后直接粉碎基质或分离抽提得到孢子粉；2按重量比配制烷基丁二酸磺酸钠:半纤维素:海藻酸钠:壳聚糖＝15:5:4:1的混合辅助剂；3将50重量份孢子粉、10重量份辅助剂与70重量份蔗渣粉混合；4将3重量份10％吡虫啉可湿性粉剂加入到60重量份凹凸棒土中，进行混合；5最后将6重量份羧甲基纤维素与上述步骤3和步骤4的混合物，再混合均匀，挤压造粒，得到布氏白僵菌颗粒剂。实施例41将菌种孢子接种到一级液体培养基，其中含蔗糖3％、蛋白胨1％、酵母浸出粉0.25％、硫酸镁0.01％，余量为水，培养48-60小时，得到一级液体物；然后作为菌种再转接到含二级液体培养基，其中含蔗糖2％、可溶性淀粉1％、啤酒酵母1％、胡萝卜干粉0.4-0.6％、磷酸氢二钾0.1％、硫酸镁0.05％，余量为水，培养48-72小时，得到二级液体培养物；通过离心去除大部分水分，得到浓缩菌丝体；2按重量比配制烷基丁二酸磺酸钠:半纤维素:海藻酸钠:壳聚糖＝15:5:4:1的混合辅助剂；3将15重量份菌丝体、4重量份辅助剂与10重量份麦秸粉混合；4将1重量份10％吡虫啉可湿性粉剂加入到38重量份硅藻土和6重量份碳酸钙中，混合均匀；5将步骤3、4得到的混合物再次混合，得到布氏白僵菌微粒剂。实施例51将菌种孢子接种到一级液体培养基，其中含蔗糖3％、蛋白胨1％、酵母浸出粉0.25％、硫酸镁0.01％，余量为水，培养48-60小时，得到一级液体物；然后作为菌种再转接到含二级液体培养基，其中含蔗糖2％、可溶性淀粉1％、啤酒酵母1％、胡萝卜干粉0.4-0.6％、磷酸氢二钾0.1％、硫酸镁0.05％，余量为水，培养48-72小时，得到二级液体培养物；通过离心去除大部分水分，得到浓缩菌丝体；2按重量比配制烷基丁二酸磺酸钠:半纤维素:海藻酸钠:壳聚糖＝15:5:4:1的混合辅助剂；3将20重量份菌丝体、7重量份辅助剂与35重量份玉米芯粉混合；4将1.5重量份25％噻虫嗪可湿性粉剂加入到46重量份硅藻土中，混合均匀；5将5重量份羧甲基纤维素与步骤3和步骤4的混合物混合均匀，挤压造粒，得到布氏白僵菌颗粒剂。实施例61将菌种孢子接种到一级液体培养基，其中含蔗糖3％、蛋白胨1％、酵母浸出粉0.25％、硫酸镁0.01％，余量为水，培养48-60小时，得到一级液体物；然后作为菌种再转接到含二级液体培养基，其中含蔗糖2％、可溶性淀粉1％、啤酒酵母1％、胡萝卜干粉0.4-0.6％、磷酸氢二钾0.1％、硫酸镁0.05％，余量为水，培养48-72小时，得到二级液体培养物；通过离心去除大部分水分，得到浓缩菌丝体；2按重量比配制烷基丁二酸磺酸钠:半纤维素:海藻酸钠:壳聚糖＝15:5:4:1的混合辅助剂；3将25重量份菌丝体、10重量份辅助剂与70重量份麦秸粉混合均匀；4将4重量份20％氯虫苯甲酰胺悬浮剂加入到38重量份凹凸棒土和16重量份白炭黑中，混合均匀5将5重量份聚乙烯醇与步骤3、步骤4的混合物再混合均匀，挤压造粒，得到布氏白僵菌颗粒剂。实施例7布氏白僵菌制剂的杀虫毒力测试从玉米田中采集小地老虎Agrotisypsilon幼虫，在实验室内进行杀虫毒力测定。设置以下4个处理组：布氏白僵菌孢子粉、上述实施例1的布氏白僵菌微粒剂、10％吡虫啉可湿性粉剂和对照。处理步骤如下：1从田间取回土壤，过筛后经160℃2小时烘烤，凉至室温；2经测算，孢子粉的含量为320亿孢g、微粒剂中含量为19.2亿孢g和含0.003g吡虫啉g；3称取1g孢子粉，用544mL0.1％吐温80水润湿并稀释，然后加入到3199g土壤中，混拌均匀，得到含孢量1×107g、含水量17:100v:w的处理土壤；4称取20g微粒剂，用649mL0.1％吐温80水润湿并稀释，然后加入到3820g土壤中，混拌均匀，得到含孢量1×107g、含15.6×10-6g吡虫啉g、含水量17:100v:w的处理土壤；5称取0.468g10％吡虫啉可湿性粉剂，510mL用0.1％吐温80水稀释，然后加入到3000g土壤中，混拌均匀，得到含15.6×10-6g吡虫啉g、含水量17:100v:w的处理土壤；6量取510mL0.1％吐温80水，加入到3000g土壤中，混拌均匀，得到对照土壤；7将上述土壤分别分装到养虫盒中，每盒约50g，各放入1头试虫。每处理60头盒，以20头为1组，分3组重复。置于24-26℃室温饲养2周，于第4、6、8、10、12、14天检查死亡虫数，根据死亡率和死亡速率评价杀虫作用，结果见表1、图1。表1布氏白僵菌及制剂对小地老虎的毒力作用结果表明，布氏白僵菌孢子导致死亡率为79.3％，LT50为8.25天，而布氏白僵菌微粒剂或颗粒剂提高死亡率达到93.1％，LT50缩短为6.46天，证明菌株对小地老虎有高毒力作用，配方菌剂提高了侵染速率和死亡率。实施例8布氏白僵菌制剂的药效试验以大黑鳃金龟Holotrichiaoblita2龄幼虫对上述实施例1-6的布氏白僵菌微粒剂和颗粒剂进行杀虫毒力测定。设置以下8个处理：布氏白僵菌孢子粉、上述实施例1-6的布氏白僵菌微粒剂或颗粒剂编号为菌剂I、菌剂II、菌剂III、菌剂IV、菌剂V、菌剂VI和对照。处理步骤如下：1从田间取回土壤，过筛后经160℃2小时烘烤，凉至室温；2经测算，孢子粉的含量为320亿孢g、菌剂1含量为19.2亿孢g、菌剂2含量为51.2亿孢g、菌剂3含量为38.4亿孢g、菌剂4含量为6.1亿cfug、菌剂5含量为5.3cfu亿孢g、菌剂6含量为4.8cfu亿孢g；3称取1g孢子粉，用544mL0.1％吐温80水润湿并稀释，然后加入到3199g土壤中，混拌均匀，得到含孢量1×107g、含水量17:100v:w的处理土壤；4按重量分别称取15.6g菌剂I、5.9g菌剂II、7.8g菌剂III、49.2g菌剂IV、56.6g菌剂V、62.5g菌剂VI，各用510mL0.1％吐温80水润湿并稀释，然后加入到3000-mg土壤中m为菌剂的重量，混拌均匀，得到含量1×107g、含水量17:100v:w的各菌剂处理土壤。6量取510mL0.1％吐温80水，加入到3000g土壤中，混拌均匀，得到对照土壤；7将上述土壤分别分装到养虫盒中，每盒约50g，各放入1头试虫。每处理60头盒，以20头为1组，分3组重复。置于24-26℃室温饲养2周，于第4、6、8、10、12、14天检查死亡虫数，根据死亡率和死亡速率评价杀虫作用，结果见表2。表2布氏白僵菌及制剂对大黑鳃金龟的毒力作用结果表明，布氏白僵菌孢子导致死亡率为62.8％，LT50为9.35天，而布氏白僵菌微粒剂或颗粒剂提高死亡率达到71.3～84.1％，LT50缩短为6.56天，证明菌株对大黑鳃金龟有高毒力作用，配方菌剂提高了侵染速率和死亡率。实施例8布氏白僵菌制剂的田间药效试验在花生田间进行金龟子幼虫防控试验。在大约4亩的花生地中选取中央部分间隔划定为21个5m×5m的小区，3横×7纵排列，进行以下处理：上述实施例1的布氏白僵菌微粒剂按每亩100g用量处理和200g用量处理，上述实施例4的布氏白僵菌颗粒剂按每亩100g用量处理和200g用量处理，10％吡虫啉可湿性粉剂按在微粒剂或颗粒剂中等同用量即每亩3g和6g处理，空白对照处理。每处理设3小区重复，在小区随机分配排列。处理方法：在花生播种时，将菌剂或药剂用大约1kg细土稀释，撒施到种穴中然后点种。种植过程按常规统一管理。在花生收获时在每小区中部随机5点取样，每样点3棵连续植株，调查花生虫果率和产量，并检查植株周围20cm方块内的蛴螬残余数量，评价菌株防治害虫蛴螬的作用效果，结果如表3所示。表3布氏白僵菌制剂防治花生田间蛴螬效果结果表明，田间使用本发明的布氏白僵菌制剂后，花生好果数和重量显著提高，虫果率和虫口减退率较对照组有较大幅度的提高。因此，田间应用布氏白僵菌菌剂能够减少蛴螬危害，从而降低虫果率，增加花生产量。

权利要求：1.布氏白僵菌菌剂，其特征在于，所述布氏白僵菌菌剂包括布氏白僵菌BRNS50206、混合辅助剂、矿物载体和谷物载体，其中，布氏白僵菌BRNS50206的保藏编号为CGMCCNo.15993。2.根据权利要求1所述的布氏白僵菌菌剂，其特征在于，所述布氏白僵菌菌剂包括以下重量份原料：布氏白僵菌孢子粉5～50份、混合辅助剂4～10份、矿物载体20～60份、谷物载体10～70份。3.根据权利要求1所述的布氏白僵菌菌剂，其特征在于，所述布氏白僵菌菌剂包括以下重量份原料：布氏白僵菌菌丝体15～25份、混合辅助剂4～10份、矿物载体20～60份、谷物载体10～70份。4.根据权利要求1所述的布氏白僵菌菌剂，其特征在于，混合辅助剂为烷基丁二酸磺酸钠、半纤维素、海藻酸钠、壳聚糖按照质量比为15:5:4:1混合。5.根据权利要求1所述的布氏白僵菌菌剂，其特征在于，所述矿物载体为凹凸棒土、滑石粉、硅藻土、白炭黑、碳酸钙、陶土中的一种或多种。6.根据权利要求1所述的布氏白僵菌菌剂，其特征在于，所述谷物载体为花生荚壳粉、玉米芯粉、玉米秸粉、麦秸粉、稻秸粉、甜菜粉、蔗渣粉中的一种或多种。7.根据权利要求1所述的布氏白僵菌菌剂，其特征在于，所述布氏白僵菌菌剂还包括粘合剂0.1～6份，所述粘合剂为聚乙烯醇或羧甲基纤维素。8.根据权利要求1～7任意一项所述的布氏白僵菌菌剂，其特征在于，所述布氏白僵菌菌剂还包括增效剂1～4份。9.根据权利要求8所述的布氏白僵菌菌剂，其特征在于，所述增效剂为10％吡虫啉可湿性粉剂、25％噻虫嗪可湿性粉剂或20％氯虫苯甲酰胺悬浮剂。10.权利要求1所述的布氏白僵菌菌剂的应用。

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