申请/专利权人：内蒙古农业大学

申请日：2017-11-28

公开（公告）日：2021-05-11

公开（公告）号：CN109832193B

主分类号：A01H4/00(20060101)

分类号：A01H4/00(20060101)

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2021.05.11#授权;2019.06.28#实质审查的生效;2019.06.04#公开

摘要：本发明公开了一种鹅观草成熟胚愈伤组织诱导和再生的培养方法，其包括如下步骤：1外植体的消毒灭菌处理，2诱导愈伤组织的培养，3愈伤组织的分化培养，4诱导分化芽的生根培养，5移栽培养。本发明的优点在于，鹅观草成熟时收获的每粒种子中都包含1个成熟胚，种子可以保存多年，只要有种子可以随时诱导愈伤，解除了取材时间限制；成熟胚诱导愈伤组织时，不需要将成熟胚剥离出来，直接用消毒灭菌处理后的种子即可，简化了操作步骤，降低了操作难度；通过添加一定配比的2，4‑D、KT，可将愈伤组织的诱导率提高到78％；在分化培养到再生培养过程中，通过添加一定浓度配比的6‑BA、KT，使愈伤组织分化率达90％以上，分化苗生根率达97％以上。

主权项：1.鹅观草成熟胚愈伤组织诱导和再生的培养方法，其特征在于，其包括如下步骤：（1）外植体的消毒灭菌处理，（2）诱导愈伤组织的培养，（3）愈伤组织的分化培养，（4）诱导分化芽的生根培养，（5）移栽培养；其中，（1）外植体的消毒灭菌处理：选取颗粒饱满、无病虫害的鹅观草种子，去除所述鹅观草种子的内外稃，之后将所述鹅观草种子置于质量浓度为70%的乙醇中浸泡30～60s，再以无菌蒸馏水冲洗3～5次，得到预处理种子；将所述预处理种子置于种子消毒剂中浸泡2～2.5h，消毒结束后，以无菌蒸馏水冲洗3～5次，得到消毒种子；所述消毒剂是在质量浓度为3%次氯酸钙中添加体积百分数为≤1%的Tween80制得的混合溶液；将所述消毒种子置于质量浓度为5%植物组培抗菌剂中浸泡8～12h，杀菌结束后，得到待诱导种子；（2）诱导愈伤组织的培养：所述（1）外植体的消毒灭菌处理完成后，将所述待诱导种子置于愈伤诱导培养基上，在温度为24～26℃的条件下，黑暗培养30～60d，所述愈伤诱导培养基组成如下：MS液体培养基、2，4-D、KT、麦芽糖及结冷胶，所述2，4-D的添加浓度为2.0mgL，所述KT的添加浓度为0.5mgL，所述麦芽糖的添加浓度为40gL，所述结冷胶的添加浓度为4gL；愈伤诱导培养结束后，得到愈伤组织；（3）愈伤组织的分化培养：所述（2）诱导愈伤组织的培养完成后，将所述愈伤组织置于分化培养基上，在温度为24～26℃、光照强度为2200～2500Lx、光照时间为12hd的条件下，培养至诱导产生分化芽，所述分化培养基组成如下：MS液体培养基、6-BA、KT、蔗糖和琼脂粉，所述6-BA的添加浓度为2.0mgL，所述KT的添加浓度为0.2mgL，所述蔗糖的添加浓度为30gL，所述琼脂粉的添加浓度为7.5gL；所述分化培养基每25～30d更换一次；（4）诱导分化芽的生根培养：所述（3）愈伤组织的分化培养完成后，将所述分化芽置于生根培养基上，所述生根培养基为12MS固体培养基，在温度为24～26℃、光照强度为2200～2500Lx、光照时间为12hd的条件下，培养至诱导所述分化芽生根，得到鹅观草生根苗；（5）移栽培养：所述（4）诱导分化芽的生根培养完成后，将所述鹅观草生根苗移栽至混有蛭石的营养土中，在空气湿度为50～60%、避免强光照的条件下，培养5～7d。

全文数据：鹅观草成熟胚愈伤组织诱导和再生的培养方法技术领域：本发明涉及生物技术领域，特别涉及一种鹅观草成熟胚愈伤组织诱导和再生的培养方法。背景技术：鹅观草为禾本科鹅观草属下的一个种，是一种常见的草本植物，可作牲畜的饲料，产草量大，可食性高，且其拥有小麦等粮食作物所需的高产、抗病虫害、抗逆等优良基因，可作为麦类作物培育新品种的宝贵资源。作为具有重要应用价值的优良草种，高效再生体系的构建对建立分子遗传系统至关重要，也是利用基因编辑技术研究基因功能和转基因研究的技术基础。目前，对鹅观草再生方面的研究报道仅有一例，一种高频的鹅观草幼胚愈伤组织诱导和再生的培养方法公告号CN103210843A，首次公开以鹅观草的幼胚为材料诱导愈伤组织，建立了一套高频的幼胚愈伤组织诱导和再生的培养方法。但是，以幼胚为外植体进行愈伤组织诱导和再生的培养存在以下问题：1、取材时间受生育期限制，鹅观草幼胚只能在鹅观草孕穗后期和抽穗初期从活的植物体上取材，不能一年四季随时获得外植体，取材适宜时间仅可持续20天左右，这极其不利于鹅观草高效再生体系构建的研究；2、鹅观草幼胚很小，大约0.5mm×0.5mm，需要借助解剖镜在无菌条件下从未成熟的种子中将其剥离出来，且不能损伤幼胚，所以要求操作人员具备较高的技术水平，操作难度大，不利于大规模扩繁。发明内容：本发明的目的在于提供一种取材不受时间限制、操作步骤简单、诱导率高、生根率高的鹅观草成熟胚愈伤组织诱导和再生的培养方法。本发明的目的由如下技术方案实施，鹅观草成熟胚愈伤组织诱导和再生的培养方法，其包括如下步骤：1外植体的消毒灭菌处理，2诱导愈伤组织的培养，3愈伤组织的分化培养，4诱导分化芽的生根培养，5移栽培养；其中，1外植体的消毒灭菌处理：选取颗粒饱满、无病虫害的鹅观草种子，去除所述鹅观草种子的内外稃，之后将所述鹅观草种子置于质量浓度为70％的乙醇中浸泡30～60s，再以无菌蒸馏水冲洗3～5次，得到预处理种子；将所述预处理种子置于种子消毒剂中浸泡2～2.5h，消毒结束后，以无菌蒸馏水冲洗3～5次，得到消毒种子；将所述消毒种子置于质量浓度为5％植物组培抗菌剂中浸泡8～12h，杀菌结束后，得到待诱导种子；2诱导愈伤组织的培养：所述1外植体的消毒灭菌处理完成后，将所述待诱导种子置于愈伤诱导培养基上，在温度为24～26℃的条件下，黑暗培养30～60d，愈伤诱导培养结束后，得到愈伤组织；3愈伤组织的分化培养：所述2诱导愈伤组织的培养完成后，将所述愈伤组织置于分化培养基上，在温度为24～26℃、光照强度为2200～2500Lx、光照时间为12hd的条件下，培养至诱导产生分化芽，所述分化培养基每25～30d更换一次；4诱导分化芽的生根培养：所述3愈伤组织的分化培养完成后，将所述分化芽置于生根培养基上，在温度为24～26℃、光照强度为2200～2500Lx、光照时间为12hd的条件下，培养至诱导所述分化芽生根，得到鹅观草根苗，所述分化培养基每25～30d更换一次；5移栽培养：所述4诱导分化芽的生根培养完成后，将所述鹅观草根苗移栽至混有蛭石的营养土中，在空气湿度为50～60％、避免强光照的条件下，培养5～7d。进一步的，在所述1外植体的消毒灭菌处理中，所述消毒剂是在质量浓度为3％次氯酸钙添加体积百分数为≤1％的Tween80制得的混合溶液。进一步的，在所述2诱导愈伤组织的培养中，所述愈伤诱导培养基包括如下MS液体培养基、2，4-D、KT、麦芽糖及结冷胶，所述2，4-D的添加浓度为2.0mgL，所述KT的添加浓度为0.5mgL，所述麦芽糖的添加浓度为40gL，所述结冷胶的添加浓度为4gL。进一步的，在所述3愈伤组织的分化培养中，所述分化培养基包括MS液体培养基、6-BA、KT、蔗糖和琼脂粉，所述6-BA的添加浓度为2.0mgL，所述KT的添加浓度为0.2mgL，所述蔗糖的的添加浓度为30gL，所述琼脂粉的添加浓度为7.5gL。进一步的，在所述4诱导分化芽的生根培养中，所述生根培养基12MS固体培养基。本发明的优点：1、鹅观草成熟时收获的每粒种子中都包含1个成熟胚，种子可以保存多年，只要有种子可以随时诱导愈伤，解除了取材时间限制；2、成熟胚诱导愈伤组织时，不需要将成熟胚剥离出来，直接用消毒灭菌处理后的种子即可，简化了操作步骤，降低了操作难度，对操作人员技术要求低，有利于大规模扩繁；3、在导愈伤组织培养过程中，添加植物组培抗菌剂PPM，能有效抑制内生真菌的生长，有效避免培养污染问题的发生，通过添加一定配比的2，4-D、Kinetin可有效将愈伤组织的诱导率提高到78％；4、在分化培养到再生培养过程中，通过添加一定浓度配比的植物生长调节剂，使愈伤组织分化率达90％以上，分化苗生根率达97％以上。附图说明：为了更清楚地说明本发明实施例或现有技术中的技术方案，下面将对实施例或现有技术描述中所需要使用的附图作简单地介绍，显而易见地，下面描述中的附图仅仅是本发明的一些实施例，对于本领域普通技术人员来讲，在不付出创造性劳动的前提下，还可以根据这些附图获得其他的附图。图1为鹅观草成熟胚置于愈伤诱导培养基上培养；图2为鹅观草成熟胚诱导出的愈伤组织；图3为愈伤组织在分化培养基上分化成苗；图4为分化苗置于生根培养基上培养；图5为分化苗置于生根培养基上的生根情况；图6为生根分化苗移栽情况。具体实施方式：实施例1：鹅观草成熟胚愈伤组织诱导和再生的培养方法，其包括如下步骤：1外植体的消毒灭菌处理，2诱导愈伤组织的培养，3愈伤组织的分化培养，4诱导分化芽的生根培养，5移栽培养；其中，1外植体的消毒灭菌处理：选取颗粒饱满、无病虫害的鹅观草种子，去除鹅观草种子的内外稃，之后将鹅观草种子置于质量浓度为70％的乙醇中浸泡30s，再以无菌蒸馏水冲洗3次，得到预处理种子；在1外植体的消毒灭菌处理中，消毒剂是在质量浓度为3％次氯酸钙添加体积百分数为≤1％的Tween80制得的混合溶液；将预处理种子置于种子消毒剂中浸泡2h，消毒结束后，以无菌蒸馏水冲洗3次，得到消毒种子；将消毒种子置于质量浓度为5％植物组培抗菌剂中浸泡8h，杀菌结束后，得到待诱导种子；在常规操作中，一般采用升汞作为消毒剂对种子进行消毒，其使用后的废液需要特殊处理，直接排放会对环境造成严重的污染；但在本实施1外植体的消毒灭菌处理过程中，采用次氯酸钙作为消毒剂，确保了药剂使用的安全性，消毒后次氯酸钠易去除，对鹅观草种子损伤小。而在消毒剂中添加的Tween80主要作为乳化剂和增溶剂，增加次氯酸钙在水中的溶解性，避免次氯酸钙发生沉淀，有利于次氯酸钙更好的发挥其消毒作用。同时，在1外植体的消毒灭菌处理过程中，采用植物组培抗菌剂杀菌种子中的真菌和霉菌，避免真菌和霉菌的污染，影响后续操作；采用5％的植物组培抗菌剂浸泡8h，后续培养过程中的污染率就可降低至1％以下，消毒杀菌效果好。2诱导愈伤组织的培养：1外植体的消毒灭菌处理完成后，将待诱导种子置于愈伤诱导培养基上，在温度为24℃的条件下，黑暗培养30d，愈伤诱导培养结束后，得到愈伤组织；在2诱导愈伤组织的培养中，愈伤诱导培养基包括如下MS液体培养基、2，4-D、KT、麦芽糖及结冷胶，2，4-D的添加浓度为2.0mgL，KT的添加浓度为0.5mgL，麦芽糖的添加浓度为40gL，结冷胶的添加浓度为4gL。3愈伤组织的分化培养：2诱导愈伤组织的培养完成后，将愈伤组织置于分化培养基上，在温度为24℃、光照强度为2200Lx、光照时间为12hd的条件下，培养至诱导产生分化芽，分化培养基每25d更换一次；在3愈伤组织的分化培养中，分化培养基包括MS液体培养基、6-BA、KT、蔗糖和琼脂粉，6-BA的添加浓度为2.0mgL，KT的添加浓度为0.2mgL，蔗糖的的添加浓度为30gL，琼脂粉的添加浓度为7.5gL。4诱导分化芽的生根培养：3愈伤组织的分化培养完成后，将分化芽置于生根培养基上，在温度为24℃、光照强度为2200Lx、光照时间为12hd的条件下，培养至诱导分化芽生根，得到鹅观草根苗，分化培养基每25d更换一次；在4诱导分化芽的生根培养中，生根培养基12MS固体培养基。5移栽培养：4诱导分化芽的生根培养完成后，将鹅观草根苗移栽至混有蛭石的营养土中，在空气湿度为50％、避免强光照的条件下，培养5d。实施例2：鹅观草成熟胚愈伤组织诱导和再生的培养方法，其包括如下步骤：1外植体的消毒灭菌处理，2诱导愈伤组织的培养，3愈伤组织的分化培养，4诱导分化芽的生根培养，5移栽培养；其中，1外植体的消毒灭菌处理：选取颗粒饱满、无病虫害的鹅观草种子，去除鹅观草种子的内外稃，之后将鹅观草种子置于质量浓度为70％的乙醇中浸泡50s，再以无菌蒸馏水冲洗4次，得到预处理种子；在1外植体的消毒灭菌处理中，消毒剂是在质量浓度为3％次氯酸钙添加体积百分数为≤1％的Tween80制得的混合溶液；将预处理种子置于种子消毒剂中浸泡2.2h，消毒结束后，以无菌蒸馏水冲洗4次，得到消毒种子；将消毒种子置于质量浓度为5％植物组培抗菌剂中浸泡8～12h，杀菌结束后，得到待诱导种子；在常规操作中，一般采用升汞作为消毒剂对种子进行消毒，其使用后的废液需要特殊处理，直接排放会对环境造成严重的污染；但在本实施1外植体的消毒灭菌处理过程中，采用次氯酸钙作为消毒剂，确保了药剂使用的安全性，消毒后次氯酸钠易去除，对鹅观草种子损伤小。而在消毒剂中添加的Tween80主要作为乳化剂和增溶剂，增加次氯酸钙在水中的溶解性，避免次氯酸钙发生沉淀，有利于次氯酸钙更好的发挥其消毒作用。同时，在1外植体的消毒灭菌处理过程中，采用植物组培抗菌剂杀菌种子中的真菌和霉菌，避免真菌和霉菌的污染，影响后续操作；采用5％的植物组培抗菌剂浸泡10h，后续培养过程中的污染率就可降低至1％以下，消毒杀菌效果好。2诱导愈伤组织的培养：1外植体的消毒灭菌处理完成后，将待诱导种子置于愈伤诱导培养基上，在温度为25±1℃的条件下，黑暗培养40d，愈伤诱导培养结束后，得到愈伤组织；在2诱导愈伤组织的培养中，愈伤诱导培养基包括如下MS液体培养基、2，4-D、KT、麦芽糖及结冷胶，2，4-D的添加浓度为2.0mgL，KT的添加浓度为0.5mgL，麦芽糖的添加浓度为40gL，结冷胶的添加浓度为4gL。3愈伤组织的分化培养：2诱导愈伤组织的培养完成后，将愈伤组织置于分化培养基上，在温度为25℃、光照强度为2400Lx、光照时间为12hd的条件下，培养至诱导产生分化芽，分化培养基每27d更换一次；在3愈伤组织的分化培养中，分化培养基包括MS液体培养基、6-BA、KT、蔗糖和琼脂粉，6-BA的添加浓度为2.0mgL，KT的添加浓度为0.2mgL，蔗糖的的添加浓度为30gL，琼脂粉的添加浓度为7.5gL。4诱导分化芽的生根培养：3愈伤组织的分化培养完成后，将分化芽置于生根培养基上，在温度为25℃、光照强度为2300Lx、光照时间为12hd的条件下，培养至诱导分化芽生根，得到鹅观草根苗，分化培养基每27d更换一次；在4诱导分化芽的生根培养中，生根培养基12MS固体培养基。5移栽培养：4诱导分化芽的生根培养完成后，将鹅观草根苗移栽至混有蛭石的营养土中，在空气湿度为55％、避免强光照的条件下，培养6d。实施例3：鹅观草成熟胚愈伤组织诱导和再生的培养方法，其包括如下步骤：1外植体的消毒灭菌处理，2诱导愈伤组织的培养，3愈伤组织的分化培养，4诱导分化芽的生根培养，5移栽培养；其中，1外植体的消毒灭菌处理：选取颗粒饱满、无病虫害的鹅观草种子，去除鹅观草种子的内外稃，之后将鹅观草种子置于质量浓度为70％的乙醇中浸泡60s，再以无菌蒸馏水冲洗5次，得到预处理种子；在1外植体的消毒灭菌处理中，消毒剂是在质量浓度为3％次氯酸钙添加体积百分数为≤1％的Tween80制得的混合溶液；将预处理种子置于种子消毒剂中浸泡2.5h，消毒结束后，以无菌蒸馏水冲洗5次，得到消毒种子；将消毒种子置于质量浓度为5％植物组培抗菌剂中浸泡12h，杀菌结束后，得到待诱导种子；在常规操作中，一般采用升汞作为消毒剂对种子进行消毒，其使用后的废液需要特殊处理，直接排放会对环境造成严重的污染；但在本实施1外植体的消毒灭菌处理过程中，采用次氯酸钙作为消毒剂，确保了药剂使用的安全性，消毒后次氯酸钠易去除，对鹅观草种子损伤小。而在消毒剂中添加的Tween80主要作为乳化剂和增溶剂，增加次氯酸钙在水中的溶解性，避免次氯酸钙发生沉淀，有利于次氯酸钙更好的发挥其消毒作用。同时，在1外植体的消毒灭菌处理过程中，采用植物组培抗菌剂杀菌种子中的真菌和霉菌，避免真菌和霉菌的污染，影响后续操作；采用5％的植物组培抗菌剂浸泡12h，后续培养过程中的污染率就可降低至1％以下，消毒杀菌效果好。2诱导愈伤组织的培养：1外植体的消毒灭菌处理完成后，将待诱导种子置于愈伤诱导培养基上，在温度为26℃的条件下，黑暗培养60d，愈伤诱导培养结束后，得到愈伤组织；在2诱导愈伤组织的培养中，愈伤诱导培养基包括如下MS液体培养基、2，4-D、KT、麦芽糖及结冷胶，2，4-D的添加浓度为2.0mgL，KT的添加浓度为0.5mgL，麦芽糖的添加浓度为40gL，结冷胶的添加浓度为4gL。3愈伤组织的分化培养：2诱导愈伤组织的培养完成后，将愈伤组织置于分化培养基上，在温度为26℃、光照强度为2500Lx、光照时间为12hd的条件下，培养至诱导产生分化芽，分化培养基每30d更换一次；在3愈伤组织的分化培养中，分化培养基包括MS液体培养基、6-BA、KT、蔗糖和琼脂粉，6-BA的添加浓度为2.0mgL，KT的添加浓度为0.2mgL，蔗糖的的添加浓度为30gL，琼脂粉的添加浓度为7.5gL。4诱导分化芽的生根培养：3愈伤组织的分化培养完成后，将分化芽置于生根培养基上，在温度为26℃、光照强度为2500Lx、光照时间为12hd的条件下，培养至诱导分化芽生根，得到鹅观草根苗，分化培养基每30d更换一次；在4诱导分化芽的生根培养中，生根培养基12MS固体培养基。5移栽培养：4诱导分化芽的生根培养完成后，将鹅观草根苗移栽至混有蛭石的营养土中，在空气湿度为60％、避免强光照的条件下，培养7d。实施例4：一、试验分组设计：以本发明为试验组、以一种高频的鹅观草幼胚愈伤组织诱导和再生的培养方法公告号CN103210843A为对照组。二、内生真菌抑制的对比试验组以5％的植物组培抗菌剂浸泡8～12h杀灭鹅观草种子的内生真菌，再将鹅观草种子接种于愈伤诱导培养基上进行诱导愈伤组织的培养；对照组以添加15mgL苯莱特Benlate的MSD2接种处理后的无菌鹅观草幼胚进行诱导愈伤组织的培养。试验组与对照组在诱导愈伤组织的培养过程中的污染率对比结果，如表1所示。表1试验组与对照组在诱导愈伤组织的培养过程中的污染率对比结果由表1可知，本发明采用5％的植物组培抗菌剂浸泡8～12h杀灭鹅观草种子的内生真菌，在后期诱导愈伤组织的培养的平均污染率为0.5％，与对照组相比，其污染率可降低84.8％，有效避免培养污染问题的发生。三、愈伤诱导培养基的选择如图1所示，以鹅观草种子即成熟胚为外植体进行愈伤组织诱导培养，愈伤诱导培养基以MS液体培养基为基础，在MS液体培养基中添加浓度为40gL的麦芽糖，浓度为4gL的结冷胶；在愈伤诱导培养基中添加不同浓度组合的2，4-D和6-BA对出愈率、愈伤组织出愈状态及褐化率的影响，如表2所示；在愈伤诱导培养基添加不同浓度组合的2，4-D和KT对出愈率、愈伤组织出愈状态及褐化率的影响，如表3所示。表2各愈伤诱导培养基对出愈率、愈伤组织状态及褐化率的影响表3各愈伤诱导培养基对出愈率、愈伤组织状态及褐化率的影响由表2可知，在愈伤诱导培养基添加浓度为2.0mgL的2，4-D和浓度为0.5mgL的6-BA，外植体的出愈率为56％，愈伤组织出愈状态为乳白、结构紧实，褐化率为7.1％；由表3可知，在愈伤诱导培养基添加浓度为2.0mgL的2，4-D和浓度为0.5mgL的KT，外植体的出愈率为78％，愈伤组织出愈状态为乳白、结构紧实，褐化率为3.8％；由表2和表3可知，鹅观草成熟胚在添加浓度为2.0mgL的2，4-D和浓度为0.5mgL的KT的愈伤诱导培养基上进行愈伤组织诱导培养时的出愈率最高、愈伤组织出愈状态最好、同时褐化率相对较大，有利于愈伤组织的分化培养，如图2所示。四、分化培养基的选择如图3所示，将鹅观草种子诱导出的愈伤组织接种于分化培养基上，分化培养基以MS液体培养基为基础，在MS液体培养基中添加浓度为30gL的蔗糖，浓度为7.5gL的琼脂粉；在分化培养基中添加不同浓度组合的6-BA和NAA对分化率的影响，如表4所示；在分化培养基中添加不同浓度组合的6-BA和KT对分化率的影响，如表5所示。表4各分化培养基对分化率的影响表5各分化培养基对分化率的影响由表4可知，在分化培养基添加浓度为1.5mgL的6-BA和浓度为1.5mgL的NAA，分化率为75％；由表5可知，在分化培养基添加浓度为2.0mgL的6-BA和浓度为0.2mgL的KT，分化率为90.3％；由表4和表5可知，鹅观草种子诱导出的愈伤组织在添加浓度为2.0mgL的6-BA和浓度为0.2mgL的KT的分化培养基上进行愈伤组织分化培养时的分化率最高，有利于分化芽的生根培养。五、生根培养基的选择如图4所示，将鹅观草愈伤组织分化苗接种于生根培养基上，生根培养基选择MS培养基或12MS培养基，生根培养基对生根率及根系生长状况的影响，如表6所示。表6各生根培养基对生根率及根系生长状况的影响由表6可知，生根培养基采用12MS培养基的生根情况较好，生根率为97.59％，分化苗根系长且数量多，如图5所示；有利于移栽培养，如图6所示。以上所述仅为本发明的较佳实施例而已，并不用以限制本发明，凡在本发明的精神和原则之内，所作的任何修改、等同替换、改进等，均应包含在本发明的保护范围之内。

权利要求：1.鹅观草成熟胚愈伤组织诱导和再生的培养方法，其特征在于，其包括如下步骤：1外植体的消毒灭菌处理，2诱导愈伤组织的培养，3愈伤组织的分化培养，4诱导分化芽的生根培养，5移栽培养；其中，1外植体的消毒灭菌处理：选取颗粒饱满、无病虫害的鹅观草种子，去除所述鹅观草种子的内外稃，之后将所述鹅观草种子置于质量浓度为70％的乙醇中浸泡30～60s，再以无菌蒸馏水冲洗3～5次，得到预处理种子；将所述预处理种子置于种子消毒剂中浸泡2～2.5h，消毒结束后，以无菌蒸馏水冲洗3～5次，得到消毒种子；将所述消毒种子置于质量浓度为5％植物组培抗菌剂中浸泡8～12h，杀菌结束后，得到待诱导种子；2诱导愈伤组织的培养：所述1外植体的消毒灭菌处理完成后，将所述待诱导种子置于愈伤诱导培养基上，在温度为24～26℃的条件下，黑暗培养30～60d，愈伤诱导培养结束后，得到愈伤组织；3愈伤组织的分化培养：所述2诱导愈伤组织的培养完成后，将所述愈伤组织置于分化培养基上，在温度为24～26℃、光照强度为2200～2500Lx、光照时间为12hd的条件下，培养至诱导产生分化芽，所述分化培养基每25～30d更换一次；4诱导分化芽的生根培养：所述3愈伤组织的分化培养完成后，将所述分化芽置于生根培养基上，在温度为24～26℃、光照强度为2200～2500Lx、光照时间为12hd的条件下，培养至诱导所述分化芽生根，得到鹅观草根苗，所述分化培养基每25～30d更换一次；5移栽培养：所述4诱导分化芽的生根培养完成后，将所述鹅观草根苗移栽至混有蛭石的营养土中，在空气湿度为50～60％、避免强光照的条件下，培养5～7d。2.根据权利要求1所述的鹅观草成熟胚愈伤组织诱导和再生的培养方法，其特征在于，在所述1外植体的消毒灭菌处理中，所述消毒剂是在质量浓度为3％次氯酸钙添加体积百分数为≤1％的Tween80制得的混合溶液。3.根据权利要求1所述的鹅观草成熟胚愈伤组织诱导和再生的培养方法，其特征在于，在所述2诱导愈伤组织的培养中，所述愈伤诱导培养基包括如下MS液体培养基、2，4-D、KT、麦芽糖及结冷胶，所述2，4-D的添加浓度为2.0mgL，所述KT的添加浓度为0.5mgL，所述麦芽糖的添加浓度为40gL，所述结冷胶的添加浓度为4gL。4.根据权利要求1所述的鹅观草成熟胚愈伤组织诱导和再生的培养方法，其特征在于，在所述3愈伤组织的分化培养中，所述分化培养基包括MS液体培养基、6-BA、KT、蔗糖和琼脂粉，所述6-BA的添加浓度为2.0mgL，所述KT的添加浓度为0.2mgL，所述蔗糖的的添加浓度为30gL，所述琼脂粉的添加浓度为7.5gL。5.根据权利要求1所述的鹅观草成熟胚愈伤组织诱导和再生的培养方法，其特征在于，在所述4诱导分化芽的生根培养中，所述生根培养基12MS固体培养基。

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