申请/专利权人：千禧制药公司

申请日：2012-05-02

公开（公告）日：2022-09-20

公开（公告）号：CN108129565B

主分类号：C07K16/28

分类号：C07K16/28;A61K39/395;A61K47/26;A61K47/18;A61K9/19;A61P1/00

优先权：["20110502 US 61/481,533","20111024 US 61/550,545","20120112 US 61/585,859"]

专利状态码：有效-授权

法律状态：2022.09.20#授权;2020.09.15#著录事项变更;2018.07.03#实质审查的生效;2018.06.08#公开

摘要：本发明公开了抗α4β7抗体的制剂。具体地讲，本发明描述一种包含非还原糖、抗α4β7抗体和至少一种游离氨基酸的混合物的稳定制剂，所述制剂呈固体形式，且非还原糖与抗α4β7抗体的摩尔比摩尔:摩尔大于600:1。公开的制剂具有提高的稳定性、减少的聚集体形成，且可延迟其中抗α4β7抗体的降解或展现这些特性的任何组合。本发明进一步提供这些抗体制剂的一种易于遵循且在体内产生治疗有效量的所述抗α4β7抗体的安全给药方案。

主权项：1.300mg抗体的第一剂量、在所述第一剂量两周之后300mg所述抗体的第二剂量、在所述第一剂量六周之后300mg所述抗体的第三剂量、以及这之后每八周300mg所述抗体的剂量在制备用于静脉投予的药物中的用途，所述药物用于在人类患者中实现中度至重度活动性克罗恩氏病的临床反应和缓解，所述人类患者缺少对TNFα拮抗剂的充分反应、丢失对TNFα拮抗剂的反应或不耐受TNFα拮抗剂，其中所述抗体为IgG1同种型且对人α4β7整合素具有结合特异性并且包含SEQIDNO:2的氨基酸20到140的重链可变区域序列和SEQIDNO:4的氨基酸20到131的轻链可变区域序列，并且其中所述药物为冻干饼或冻干粉末。

全文数据：抗α4β7抗体的制剂[0001]本申请是申请日为2012年5月2日、申请号为201280030450.4、发明名称为“抗α4β7抗体的制剂”的发明专利申请的分案申请。技术领域[0002]本申请涉及包含非还原糖、抗α4β7抗体和至少一种游离氨基酸的混合物的稳定制剂。[0003]相关申请[0004]本申请要求2012年1月12日提交的美国临时申请61585，859、2011年10月24日提交的美国临时申请61550,545和2011年5月2日提交的美国临时申请61481,533的权益。前述申请的全部内容据此以引用的方式并入本文。[0005]序列表[0006]本申请含有已通过EFS网以ASCII格式提交且据此以全文引用的方式并入本文的序列表。2012年4月30日创建的所述ASCII拷贝名为92596615.txt且大小为17,024字节。[0007]发明背景[0008]生物技术的进步使得有可能使用重组DNA技术产生多种蛋白质用于医药应用。因为蛋白质比传统有机和无机药物更大且更复杂（即除复杂三维结构外还具有多个官能团），所以配制所述蛋白质会造成特殊问题。为了使蛋白质保持生物活性，制剂必须保持蛋白质氨基酸的至少一个核心序列的构象完整性，同时保护蛋白质的多个官能团免遭降解。蛋白质可遭受缺乏稳定性，且单克隆和多克隆抗体特别可相对不稳定（参见例如Wang等，J.PharmSci.96:1-262007。许多配制选项是可用的，但没有一种方法或系统适于所有蛋白质。已报道待考虑的若干因素参见例如Wang等）。[0009]许多特征可影响蛋白质的稳定性。实际上，即使在纯化抗体的情况下，抗体结构也可能是异质的，此进一步使配制所述系统复杂化。此外，包括于抗体制剂中的赋形剂优选使任何潜在免疫反应减至最小。[0010]在抗体的情况下，保持构象完整性甚至更加重要。蛋白质的降解路径可涉及化学不稳定性即涉及通过键形成或裂解来修饰蛋白质，从而产生新化学实体的任何过程或物理不稳定性（即蛋白质的更高级结构变化）。化学不稳定性以例如脱酰胺、异构化、水解、氧化、片段化、聚糖β消除或双硫键互换disulfideexchange形式表现。物理不稳定性可由例如变性、聚集、沉淀或吸附造成。四种最常见蛋白质降解路径是蛋白质片段化、聚集、脱酰胺和氧化。治疗性蛋白质的化学或物理不稳定性的后果包括有效施用剂量减少、疗法的安全性归因于例如刺激或免疫反应性而降低以及归因于存放期较短而使制造更频繁。[0011]冷冻干燥是一种通常用于保存蛋白质的技术;冷冻干燥用于从相关蛋白质制剂移除水。冷冻干燥或冻干是一种待干燥物质首先冷冻且接着通过在真空下升华而移除冰或冷冻溶剂所用的方法。赋形剂可包括于预冻干制剂中以在冻干过程期间稳定蛋白质和或提高冻干蛋白质制剂的稳定性（PikalM·，Biopharm·3926-301990和Arakawa等Pharm.Res.83:285-2911991。[0012]数个公布已大体上公开治疗炎症性肠病的各种方法，且提供用于施用旨在治疗炎症性肠病的药剂的给药方案。例如，WO9624673公开粘膜血管地址素addressin及对与因白细胞结合于表达MAdCAM的细胞所致的白细胞募集至胃肠道相关的疾病的治疗。U.S.20050095238描述治疗与白细胞浸润粘膜组织相关的疾病的方法及向人施用有效量的对α4β7整合素（integrin具有结合特异性的人或人源化免疫球蛋白或抗原结合片段。U.S.20050095238进一步描述各种剂量（例如每千克体重0.15mg、约0.5mg、约I.Omg、约1.5mg或约2.Omg免疫球蛋白或片段）和剂量之间的各种间隔（7天、14天、21天、28天或30天）。然而，以上提及的专利和公布并未公开本文中描述且要求的抗α4β7抗体的特定制剂或特定剂量和给药方案。重要的是，以上提及的专利并未公开为本文中描述且要求的治疗方法（由临床试验数据支持提供的制剂、剂量和给药方案。[0013]本发明的抗体制剂可适用于抑制白细胞结合于表达MAdCAM的细胞且因此帮助治疗患者的炎症性肠病。因此，急需发现这些化合物的适合剂量和给药时程，且急需开发在长时间段内以稳定及适宜形式产生稳态治疗有效血液含量的抗体制剂的制剂，优选为静脉内制剂。[00Μ]发明概述[0015]本发明是关于鉴定作为适用于配制抗α4β7抗体制剂的赋形剂的非还原糖和至少一种氨基酸，所述制剂的不稳定性使其易经受脱酰胺、氧化、异构化和或聚集。制剂会提高稳定性，减少聚集体形成且延迟其中抗体的降解。[0016]因此，在第一方面，本发明是关于一种包含非还原糖、抗〇術抗体和至少一种游离氨基酸的混合物的稳定制剂，且非还原糖与抗α4β7抗体的摩尔比（摩尔：摩尔）大于600:1。制剂可为液体制剂或干燥制剂例如冻干制剂）。制剂也可含有缓冲剂。在一些实施方案中，非还原糖是甘露糖醇、山梨糖醇、蔗糖、海藻糖或其任何组合。[0017]在一些实施方案中，制剂的游离氨基酸为组氨酸、丙氨酸、精氨酸、甘氨酸、谷氨酸或其任何组合。制剂可包含约50mM至约175mM之间的游离氨基酸。制剂可包含约IOOmM与约175mM之间的游离氨基酸。游离氨基酸与抗体的摩尔比可为至少250:1。[0018]制剂也可含有表面活性剂。表面活性剂可为聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、泊洛沙姆poIoxamer或其任何组合。[0019]在一些方面，制剂可使抗α4β7抗体的免疫原性减至最小。[0020]例如呈干燥状态的制剂可在40°C、75%相对湿度RH下稳定至少三个月。[0021]在另一方面，将制剂冻干且其在冻干之前包含至少约5%至约10%抗α4β7抗体。制剂可在冻干之前含有至少约6%抗α4β7抗体。制剂可从冻干制剂复原例如复原以构成稳定液体制剂）。[0022]在另一方面，本发明是关于一种包含非还原糖、抗α4β7抗体和至少一种游离氨基酸的混合物的稳定制剂，且非还原糖与抗α4β7抗体的摩尔比（摩尔:摩尔）大于600:1且游离氨基酸与抗α4β7抗体的比率摩尔:摩尔）大于250:1。[0023]在另一方面，本发明是关于一种在水溶液中包含非还原糖、抗α4β7抗体和至少一种游离氨基酸的稳定液体制剂，其中非还原糖与抗α4β7抗体的摩尔比（摩尔：摩尔）大于600:1。在另一方面，本发明涉及一种包含至少约40mgml至约80mgml抗α4β7抗体、至少约50-175mM—种或多种氨基酸和至少约6%至至少约10%wV糖的液体制剂。液体制剂也可含有缓冲剂。在一些实施方案中，液体制剂也包含金属螯合剂。在一些实施方案中，液体制剂也包含抗氧化剂。[0024]在另一方面，本发明是关于一种包含至少约60mgml抗α4β7抗体、至少约10%wV非还原糖和至少约125mM—种或多种游离氨基酸的液体制剂。[0025]在另一方面，本发明是关于一种包含至少约60mgml抗α4β7抗体、至少约10%wV非还原糖和至少约175mM—种或多种游离氨基酸的液体制剂。[0026]在另一方面，本发明也关于一种包含非还原糖、抗α4β7抗体、组氨酸、精氨酸和聚山梨醇酯80的混合物的干燥制剂，例如冻干制剂，其中所述制剂呈固体形式，且非还原糖与抗α4β7抗体的摩尔比摩尔:摩尔）大于600:1。[0027]在另一方面，本发明是关于一种包含非还原糖、抗α4β7抗体、组氨酸、精氨酸和聚山梨醇酯80的混合物的冻干制剂。在这个方面，非还原糖与抗α4β7抗体的摩尔比（摩尔：摩尔）大于600:1。此外，制剂中精氨酸与抗α4β7抗体的摩尔比摩尔:摩尔）大于250:1。[0028]在另一方面，本发明是关于一种制备本文所述的制剂的方法，所述方法包括在初级干燥期间维持产物温度低于塌陷温度。方法也可含有退火步骤。[0029]在一个方面，本发明是关于一种治疗罹患炎症性肠病的人患者的方法，其中所述方法包括以下步骤：向罹患炎症性肠病的患者施用对人α4β7整合素具有结合特异性的人源化免疫球蛋白或其抗原结合片段，其中人源化免疫球蛋白或抗原结合片段包含非人来源的抗原结合区和人来源抗体的至少一部分，其中根据以下给药方案向患者施用人源化免疫球蛋白或其抗原结合片段：（a以静脉内输注形式施用300mg人源化免疫球蛋白或其抗原结合片段的初始剂量；（b随后在初始剂量之后约两周时，以静脉内输注形式施用300mg人源化免疫球蛋白或其抗原结合片段的第二后续剂量；（c随后在初始剂量之后约六周时，以静脉内输注形式施用300mg人源化免疫球蛋白或其抗原结合片段的第三后续剂量；（d随后视需要在人源化抗体的第三后续剂量之后每四周或每八周，以静脉内输注形式施用300mg人源化免疫球蛋白或其抗原结合片段的第四和后续剂量;其中给药方案诱导患者的炎症性肠病的临床反应和或临床缓解;且此外，其中人源化免疫球蛋白或抗原结合片段对α4β7复合物具有结合特异性，其中抗原结合区包含具有下述氨基酸序列的轻链可变区的三个互补决定区（CDRUCDR2和CDR3以及重链可变区的三个互补决定区（CDRUCDR2和CDR3:轻链：CDR1SEQIDN0:9、CDR2SEQIDN0:10、CDR3SEQIDN0:11;重链：CDR1SEQIDN0:12、CDR2SEQIDN0:13、CDR3SEQIDΝ0:14。[0030]在另一方面，本发明是关于一种用于治疗性治疗炎症性肠病的给药方案，其中所述给药方案包括以下步骤：向罹患炎症性肠病的患者施用对人α4β7整合素具有结合特异性的人源化免疫球蛋白或其抗原结合片段，其中人源化免疫球蛋白或抗原结合片段包含非人来源的抗原结合区和人来源抗体的至少一部分，其中根据以下给药方案向患者施用人源化免疫球蛋白或其抗原结合片段：（a以静脉内输注形式施用300mg人源化免疫球蛋白或其抗原结合片段的初始剂量；（b随后在初始剂量之后约两周时，以静脉内输注形式施用300mg人源化免疫球蛋白或其抗原结合片段的第二后续剂量；（c随后在初始剂量之后约六周时，以静脉内输注形式施用300mg人源化免疫球蛋白或其抗原结合片段的第三后续剂量；（d随后视需要在人源化抗体的第三后续剂量之后每四周或每八周，以静脉内输注形式施用300mg人源化免疫球蛋白或其抗原结合片段的第四和后续剂量;其中给药方案诱导患者的炎症性肠病的临床反应和或临床缓解;且此外，其中人源化免疫球蛋白或抗原结合片段对α4β7复合物具有结合特异性，其中抗原结合区包含具有下述氨基酸序列的轻链可变区的三个互补决定区（CDR1、CDR2和CDR3以及重链可变区的三个互补决定区（CDR1、CDR2和CDR3:轻链：CDR1SEQIDN0:9、CDR2SEQIDN0:10、CDR3SEQIDN0:11;重链：CDR1SEQIDN0:12、CDR2SEQIDN0:13、CDR3SEQIDΝ0:14。[0031]在一些方面，用抗α4β7抗体制剂的治疗方法、剂量或给药方案可使抗α4β7抗体的免疫原性减至最小。[0032]患者可已对用免疫调节剂、肿瘤坏死因子-αTNF-α拮抗剂中的至少一者或其组合进行的治疗缺乏足够反应、丧失反应或不耐受。[0033]炎症性肠病可为克罗恩氏病Crohn’sdisease或溃疡性结肠炎。炎症性肠病可为中度至重度活动性溃疡性结肠炎。[0034]给药方案可使得罹患中度至重度活动性溃疡性结肠炎的患者的粘膜愈合。[0035]患者可能先前已接受用至少一种用于炎症性肠病的皮质类固醇的治疗。给药方案可使得患者的皮质类固醇使用减少、消除或减少以及消除。[0036]在一些方面，以约I.Omgml至约1.4mgml之间的浓度以某一最终剂型施用人源化免疫球蛋白或其抗原结合片段。可以约1.2mgml的某一最终剂型施用人源化免疫球蛋白或其抗原结合片段。人源化免疫球蛋白或抗原结合片段可在30分钟内向患者施用。[0037]人源化免疫球蛋白或其抗原结合片段可从冻干制剂复原。[0038]人源化免疫球蛋白或其抗原结合片段可复原以构成稳定液体制剂。[0039]在一些方面，给药方案不改变接受所述治疗的患者的脑脊髓液中的CD4与CD8比率。[0040]患者可为65岁或65岁以上人士且不需要对给药方案进行任何调整。[0041]附图简述[0042]图1是对编码人源化抗α4β7免疫球蛋白的重链的核苷酸序列（SEQIDNO:1和重链的推导氨基酸序列（SEQIDNO:2的说明。核苷酸序列在重链的5’端处含有克隆位点（小写）、Kozak序列（大写，SEQIDNO:1的核苷酸18-23和前导序列（小写，SEQIDNO:1的核苷酸24-86。核苷酸序列的开放阅读框架是SEQIDNO:1的核苷酸24-1433。[0043]图2是对编码在本文中称为维多珠单抗vedolizumab的人源化免疫球蛋白的轻链的核苷酸序列（SEQIDN0:3和轻链的推导氨基酸序列（SEQIDN0:4的说明。核苷酸序列在重链的5’端处含有克隆位点（小写）、Kozak序列（大写，SEQIDNO:3的核苷酸18-23和前导序列（小写，SEQIDN0:3的核苷酸24-80。核苷酸序列的开放阅读框架是SEQIDN0:3的核苷酸24-737。[0044]图3是在本文中称为维多珠单抗的人源化免疫球蛋白的成熟人源化轻链SEQIDNO:4的氨基酸20-238与⑶在本文中称为LDP-02的人源化免疫球蛋白的成熟人源化轻链（SEQIDNO:5的氨基酸序列比对。（关于LDP-02,参见WO9806248和Feagan等，N.Eng.J.Med.352:2499-25072005Jeagan等描述LDP-02的临床研究，但在所述文章中，其将LDP-02称为MLN02。）所述比对说明维多珠单抗与LDP-02的轻链氨基酸序列在成熟轻链的位置114和115处不同。[0045]图4是A同属人κ轻链恒定区（SEQIDN0:6与⑶同属鼠κ轻链恒定区（SEQIDN0:7的氨基酸序列比对。氨基酸残基Thr和Val其存在于成熟维多珠单抗轻链的位置114和115处SEQIDN0:4的氨基酸133和134存在于人κ轻链的恒定区中，而氨基酸残基Ala和Asp其存在于成熟LDP-02轻链SEQIDN0:5的位置114和115处存在于小鼠κ轻链的恒定区中。[0046]图5是载体pLKT0K38D也称为pT0K38MLN02-TV的图谱，所述载体编码MLN02的人源化重链和人源化轻链，且适于在CHO细胞中产生维多珠单抗。（参见公开pLKT0K38的美国专利申请公布号2004003356IAl。pLKT0K38D是pLKT0K38的变体，其中在图谱上指示的限制位点侧接编码轻链可变区的序列。）[0047]图6A显示单体百分比变化、聚集体百分比变化和抗α4β7冻干制剂的主要同工型百分比变化的预测模型。模型基于对实施例1中呈现的数据的统计分析。中心线显示预测模型的结果且外部线显示预测模型的95%置信区间。图6Β显示当输入因子是pH、糖:蛋白质摩尔比和精氨酸：蛋白质摩尔比时，基于对来自表1-3的40°C数据的统计分析的替代性模型。中心线显示预测模型的结果且外部线显示预测模型的95%置信区间。[0048]图7显示A成熟人GM607’CL抗体κ轻链可变区和⑶人2128’CL重链可变区的氨基酸序列。[0049]图8是显示固体和装载量影响干燥时间的图（线条中的数字代表干燥时间的分钟数。[0050]图9是显示维多珠单抗相较于安慰剂对照不延迟实验性自身免疫性脑脊髓炎EAE的临床症状发作的图。那他珠单抗natalizumab相较于安慰剂对照显著p〈0.05延迟EAE的临床症状发作。[0051]发明详述[0052]本发明是关于包含抗α4β7抗体的制剂。制剂可为包含非还原糖、抗α4β7抗体和一种或多种游离氨基酸的混合物，且非还原糖与抗α4β7抗体的摩尔比大于600摩尔非还原糖：1摩尔抗α4β7抗体。制剂可呈固体或液体形式。[0053][0054]术语“医药制剂”是指一种含有呈使抗体的生物活性有效形式的抗α4β7抗体，且不含有对将施用制剂的受试者具有不可接受毒性的其它组分的制剂。[0055]“稳定”制剂为当储存时其中的抗体实质上保持其物理稳定性和或化学稳定性和或其生物活性的制剂。在一个方面，制剂在储存时实质上保持其物理和化学稳定性以及其生物活性。一般基于制剂的预期存放期选择储存期。用于测量蛋白质稳定性的各种分析技术在本领域中可用且例如综述于PeptideandProteinDrugDelivery,247-301，VincentLee编，MarcelDekker，Inc.,NewYork,N.Y.,Pubs.1991和Jones,A.Adv.DrugDeliveryRev.l0:29_901993中。[0056]“脱酰胺”单克隆抗体是其一个或多个天冬酰胺或谷氨酰胺残基已经衍生化为例如天冬氨酸或异天冬氨酸的单克隆抗体。[0057]“易经受脱酰胺”的抗体是包含一个或多个已发现有脱酰胺倾向的残基的抗体。[0058]“易经受氧化”的抗体是包含一个或多个已发现有氧化倾向的残基的抗体。[0059]“易经受聚集”的抗体是已发现其与其它抗体分子聚集尤其在冷冻、加热、干燥、复原和或搅拌时）的抗体。[0060]“易经受片段化”的抗体是已发现例如在其铰链区处裂解成两个或更多个片段的抗体。[0061]就“减少脱酰胺、氧化、聚集或片段化”而言，其旨在指相对于在不同pH下或在不同缓冲剂中配制的单克隆抗体，防止脱酰胺、聚集或片段化或减少脱酰胺、聚集或片段化的量例如至80%、60%、50%、40%、30%、20%或10%。[0062]“聚集体”、“SEC聚集体”或“可溶性聚集体”大于一个且小于或等于十个通过共价、离子或疏水性相互作用缔合在一起以形成更大蛋白质体的抗体蛋白质和或片段。[0063]“不溶性聚集体”或“颗粒”大于十个通过共价、离子或疏水性相互作用缔合在一起以形成更大蛋白质体的抗体蛋白质和或片段。[0064]如本文所用，单克隆抗体的“生物活性”是指抗体能够结合于抗原且产生可在体外或在体内测量的可测量生物反应。所述活性可为拮抗性或促效性。[0065]细胞表面分子“α4β7整合素”或“α4β7”是α4链CD49D，ITGA4与链（ITGB7的杂二聚体。各链可与替代性整合素链形成杂二聚体以形成人^及价基因（分别为GenBankNationalCenterforBiotechnologyInformation,Bethesda,MDRefSeqi^^编号NM_000885和NM_000889由B和T淋巴细胞、特别是记忆⑶4+淋巴细胞表达。作为许多整合素的典型，α4β7可以静止或活化状态存在。α4β7的配体包括血管细胞粘着分子VCAM、纤维结合蛋白（fibronectin和粘膜地址素MAdCAM例如MAdCAM-I。[0066]如本文所用，“对α4β7复合物具有结合特异性”的人免疫球蛋白或其抗原结合片段结合于α4β7，但不结合于α4β1或αΕΒ7。[0067]如本文所用，“等张”制剂具有与人血液实质上相同的渗透压。等张制剂将通常具有约250m0sm至350m0sm的渗透压。可使用例如蒸气压或冰冻型渗压计来测量等张性。[0068]如本文所用，“缓冲剂”是指通过其酸碱共辄组分的作用抵抗pH变化的缓冲剂。缓冲剂可存在于本发明的液体或固体制剂中。缓冲剂将制剂的pH调节至约5.0至约7.5、约5.5至约7.5、约6.0至约6.5，或pH约6.3。在一个方面，将控制pH在5.0至7.5范围内的缓冲剂的实例包括乙酸盐、丁二酸盐、葡糖酸盐、组氨酸、柠檬酸盐、磷酸盐、顺丁烯二酸盐、二甲基胂酸盐、2-[N-吗啉基]乙烷磺酸MES、双2-羟乙基）亚氨基三[羟甲基]甲烷Bis-Tris、N-[2-乙酰胺基]-2-亚氨基二乙酸ADA、甘氨酰甘氨酸和其它有机酸缓冲剂。在另一方面，本文中的缓冲剂是组氨酸或柠檬酸盐。[0069]“组氨酸缓冲液”是包含组氨酸离子的缓冲剂。组氨酸缓冲剂的实例包括组氨酸氯化物、组氨酸乙酸盐、组氨酸磷酸盐、组氨酸硫酸盐溶液。组氨酸缓冲液或组氨酸盐酸盐缓冲液的pH在约pH5.5至6.5之间、在约pH6.1至6.5之间或是约pH6.3。[0070]在本文中，“糖”是具有通式CH2On的化合物及其衍生物，包括单糖、双糖、三糖、多糖、糖醇、还原糖、非还原糖等。在一个方面，本文中的糖的实例包括葡萄糖、蔗糖、海藻糖、乳糖、果糖、麦芽糖、聚葡萄糖、赤藻糖醇、甘油、阿拉伯糖醇、木糖醇（sylito1、山梨糖醇、甘露糖醇、蜜二糖、松三糖、棉子糖、甘露三糖、水苏糖、麦芽糖、乳酮糖、麦芽酮糖、葡萄糖醇、麦芽糖醇、乳糖醇、异麦芽酮糖等。糖可为冻干保护剂。在另一方面，本文中的糖是非还原双糖，如蔗糖。[0071]在本文中，“表面活性剂”是指降低液体表面张力的试剂。表面活性剂可为非离子表面活性剂。在一个方面，本文中的表面活性剂的实例包括聚山梨醇酯聚氧乙烯脱水山梨糖醇单月桂酸酯，例如聚山梨醇酯20和聚山梨醇酯80;TRITON叔辛基苯氧基聚乙氧基乙醇，非离子清洁剂，DowChemicalCo.,MidlandMI的UnionCarbide子公司）；十二烧基硫酸钠（SDS;月桂硫酸钠；辛基糖苷钠；月桂基磺基甜菜碱、肉豆蔻基磺基甜菜碱、亚油烯基Iinoleyl磺基甜菜碱或硬脂酰基磺基甜菜碱；月桂基肌氨酸、肉豆蔻基肌氨酸、亚油烯基肌氨酸或硬脂酰基肌氨酸;亚油烯基甜菜碱、肉豆蔻基甜菜碱或鲸蜡基甜菜碱；月桂酰胺丙基甜菜碱、椰油酰胺丙基甜菜碱、亚油酰胺丙基甜菜碱、肉豆蔻酰胺丙基甜菜碱、棕榈酰胺丙基palmidopropyl甜菜碱或异硬脂酰胺丙基甜菜碱例如月桂酰胺丙基甜菜碱）；肉豆蔻酰胺丙基二甲胺、棕榈酰胺丙基二甲胺或异硬脂酰胺丙基二甲胺；甲基椰油酰基牛磺酸钠或甲基油烯基牛磺酸二钠；脱水山梨糖醇单棕榈酸酯；以及M0NAQUAT系列（MonaIndustries，Inc.，Paterson，N.J.;聚乙二醇（PEG、聚丙二醇PPG和聚氧乙稀与聚氧丙烯二醇的共聚物例如泊洛尼克Pluronic泊洛沙姆、PF68等）；等。在另一方面，表面活性剂是聚山梨醇酯80。[0072]本文中的术语“抗体”以最广泛意义使用且明确涵盖全长单克隆抗体、免疫球蛋白、多克隆抗体、由至少两种例如各自针对不同抗原或表位的全长抗体形成的多特异性抗体例如双特异性抗体）以及个别抗原结合片段包括^13、8〇?¥、？313、？313’2、？313’），包括人、人源化和来自非人物种及重组抗原结合形式的抗体，如微型单功能抗体monobody和微型双功能抗体。[0073]根据设想抗体的近似分子量为约150,000道尔顿dalton来计算本文所述的抗α4β7抗体与其它赋形剂的摩尔量和摩尔比。实际抗体分子量可不为150,000道尔顿，视氨基酸组成或翻译后修饰例如如取决于用于表达抗体的细胞系）而定。实际抗体分子量可为150，000道尔顿的+-5%。[0074]术语“人抗体”包括具有源于人生殖系免疫球蛋白序列的序列的抗体，如源于具有人免疫球蛋白基因的转基因小鼠（例如XEN0M0USE基因工程改造小鼠（AbgeniX，Fremont，CA、HUMAB-MOUSE®、KIRINTCMOUSE™转染色体小鼠、KMMOUSE®medarex，Princeton，NJ、人噬菌体显示库、人骨髓瘤细胞或人B细胞的抗体。[0075]本文所用的术语“单克隆抗体”是指由实质上均质抗体的群体获得的抗体，即除可在产生单克隆抗体期间出现的可能变体所述变体一般以少量存在之外，构成所述群体的个别抗体相同和或结合相同表位。与通常包括针对不同决定子表位）的不同抗体的多克隆抗体制剂不同，各单克隆抗体针对抗原上的单一决定子。修饰语“单克隆”指示抗体是从实质上均质的抗体群体获得的特性，且不应解释为需要通过任何特定方法来产生所述抗体。例如，待根据本发明使用的单克隆抗体可通过最初由Kohler等，Nature，256:4951975描述的杂交瘤方法制备，或可通过重组DNA方法参见例如美国专利号4，816，567制备。“单克隆抗体”也可使用例如Clackson等，Nature,352:624-6281991和Marks等，J.Mol.Biol.,222:581-5971991中描述的技术从噬菌体抗体库分离。[0076]本文中的单克隆抗体明确包括“嵌合”抗体，其中一部分重链和或轻链与源于特定物种或属于特定抗体类别或子类的抗体中的相应序列相同或同源，而所述链的剩余部分与源于另一物种或属于另一抗体类别或子类的抗体中的相应序列相同或同源；以及所述抗体的片段，只要其展现所需生物活性即可（美国专利号4,816,567;和Morrison等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA，81:6851-68551984。本文中的相关嵌合抗体包括包含源于非人灵长类动物例如旧世界猴OldWorldMonkey、猿Ape等）的可变域抗原结合序列和人恒定区序列的“灵长类化”抗体。[0077]在本发明的制剂中的所制备人源化免疫球蛋白的“抗原结合片段”至少包含抗α4β7抗体的重链和或轻链的可变区。例如，维多珠单抗的抗原结合片段包含人源化轻链序列SEQIDNO:4的氨基酸残基20至131。所述抗原结合片段的实例包括在本领域中已知的人源化免疫球蛋白的Fab片段、Fab’片段、scFv和Fab’）2片段。本发明的人源化免疫球蛋白的抗原结合片段可通过酶促裂解或通过重组技术来产生。例如，木瓜蛋白酶或胃蛋白酶裂解可分别用于产生Fab或Fab’）2片段。抗体也可使用已将一个或多个终止密码子引入天然终止位点上游的抗体基因以多种截短形式产生。例如，编码Fab’）2片段的重链的重组构建体可经设计以包括编码重链的CH1结构域和铰链区的DNA序列。在一个方面，抗原结合片段抑制α4β7整合素结合于其一个或多个配体例如粘膜地址素MAdCAM例如MAdCAM-I、纤维结合蛋白）。[0078]木瓜蛋白酶消化抗体会产生两个称为“Fab”片段的相同抗原结合片段，各自具有单一抗原结合位点；以及一剩余“Fc”片段，其名称反映其能够易于结晶。胃蛋白酶处理产生Fab’）2片段，其具有两个抗原结合位点且仍能够交联抗原。[0079]“Fv”是由一个重链可变域和一个轻链可变域呈非共价缔合形式的二聚体组成的抗体片段。[0080]Fab片段也含有轻链的恒定域和重链的第一恒定域CHlTab’片段因在重链CHl结构域的羧基端添加少量残基包括一个或多个来自抗体铰链区的半胱氨酸而不同于Fab片段。Fab’-SH在本文中表示恒定域的半胱氨酸残基携带至少一个游离硫醇基的Fab’Aab’）2抗体片段最初以之间具有铰链半胱氨酸的Fab’片段对形式产生。也已知抗体片段的其它化学偶联。[0081]“单链Fv”或“scFv”抗体片段包含抗体的Vh和I结构域，其中这些结构域存在于单一多肽链中。在一个方面，Fv多肽进一步在Vh结构域与Vl结构域之间包含使得scFv能够形成为抗原结合所需的结构的多肽连接子。关于scFv的综述，参见Pluckthun，ThePharmacologyofMonoclonalAntibodies，第113卷，Rosenburg和Moore||i，Springer-Verlag，NewYork，第269页至第315页（1994。[0082]术语“微型双功能抗体”是指具有两个抗原结合位点的小抗体片段，所述片段包含与同一多肽链Vh-Vl中的可变轻域Vl连接的可变重域Vh。通过使用过短而无法使同一链上两个结构域之间配对的连接子，迫使所述结构域与另一链的互补结构域配对且产生两个抗原结合位点。微型双功能抗体更充分描述于例如EP404,097;W09311161;和Hollinger等，Proc.Natl.Acad.Sci.USA,90:6444-64481993中。[0083]“全长抗体”是包含抗原结合可变区以及轻链恒定域Cl和重链恒定域CH1、CH2及Ch3的抗体。恒定域可为天然序列恒定域例如人天然序列恒定域或其氨基酸序列变体。在一个方面，全长抗体具有一种或多种效应功能。[0084]本文中的“氨基酸序列变异”抗体是具有不同于主要种类抗体的氨基酸序列的抗体。通常，氨基酸序列变体将与主要种类抗体具有至少约70%、至少约80%、至少约85%、至少约90%或至少约95%同源性。氨基酸序列变体在主要种类抗体的氨基酸序列内或邻近于主要种类抗体的氨基酸序列的某些位置处具有取代、缺失和或添加，但仍保留抗原结合活性。抗体的恒定区序列的变异对抗原结合活性的影响将比可变区的变异小。在可变区中，氨基酸序列变体将与主要种类抗体至少约90%同源、至少约95%同源、至少约97%同源、至少约98%同源或至少约99%同源。[0085]“同源性”定义为在对准序列且必要时引入间隙以达成最大同源性百分比之后，在氨基酸序列变体中的相同残基的百分比。用于比对的方法和计算机程序在本领域中是熟知的。[0086]“治疗性单克隆抗体”是用于人受试者疗法的抗体。本文中公开的治疗性单克隆抗体包括抗α4β7抗体。[0087]本文中的“糖基化变异”抗体是附接有一个或多个不同于一个或多个附接于主要种类抗体的碳水化合物部分的碳水化合物部分的抗体。本文中的糖基化变体的实例包括有Gl或G2寡糖结构而非GO寡糖结构附接于其Fc区的抗体，有一或两种碳水化合物部分附接于其一个或两个轻链的抗体;无碳水化合物附接于抗体的一个或两个重链的抗体等;及糖基化变化的组合。[0088]抗体“效应功能”是指可归因于抗体Fc区（天然序列Fc区或氨基酸序列变异Fc区）的那些生物活性。抗体效应功能的实例包括:Clq结合;补体依赖性细胞毒性;Fc受体结合；抗体依赖性细胞介导的细胞毒性ADCC;吞噬作用;细胞表面受体例如B细胞受体;BCR的下调等。[0089]视全长抗体的重链的恒定域的氨基酸序列而定，可将全长抗体指定为不同“类别”。存在五种主要类别的全长抗体：IgA、IgD、IgE、IgG和IgM，且这些类别中的若干种可进一步细分为“子类”（同种型），例如1861、1862、以63、1864、18六和以42。对应于抗体的不同类别的重链恒定域分别称为α、δ、ε、γ和μ。不同类别的免疫球蛋白的亚单位结构和三维构型是熟知的。[0090]来自任何脊椎动物物种的抗体的“轻链”可基于其恒定域的氨基酸序列指定为两种明显不同类型称为κ及λ中的一者。[0091]“抗体依赖性细胞介导的细胞毒性”和“ADCC”是指细胞介导的反应，其中表达Fc受体FcR的非特异性细胞毒性细胞例如天然杀手NaturalKiller，NK细胞、嗜中性白细胞和巨噬细胞识别目标细胞上的结合抗体且随后导致目标细胞溶解。用于介导ADCC的原代细胞NK细胞仅表达FcγRIII，而单核细胞表达FcγRI、FcγRII和FcγRIIIAcR在造血细胞上的表达概述于Ravetch和Kinet,Annu·Rev·Tmmunol9:457-921991的第464页上的表3中。为了评估相关分子的ADCC活性，可进行体外ADCC测定，如美国专利号5，500，362或5，821，337中所述的测定。适用于所述测定的效应细胞包括外周血液单核细胞PBMC和天然杀手NK细胞。或者或另外，可例如在如Clynes等，PNASUSA95:652-6561998中公开的动物模型中体内评估相关分子的ADCC活性。[0092]术语“Fc受体”或“FcR”用于描述结合于抗体Fc区的受体。在一个方面，FcR是天然序列人FcR。在另一方面，FcR为结合IgG抗体的受体（γ受体且包括FcγRI、FcγRII及FcγRIII子类的受体，包括这些受体的对偶基因变体和可变剪接形式。FeγRII受体包括FeγRIIA“活化受体”）和FeγRIIB“抑制受体”），所述受体具有主要在其细胞质域方面不同的类似氨基酸序列。活化受体FeyRIIA在其细胞质域中含有免疫受体酪氨酸基活化基元ITAM。抑制受体FeγRIIB在其细胞质域中含有免疫受体酪氨酸基抑制基元（ITIM。渗见M.Daeron,Annu.Rev.Immunol·15:203-2341997中的综述）AcR综述于Ravetch和Kinet，Annu·Rev·Immunol9:457-921991;Capel等，Immunomethods4:25-341994;以及deHaas等，J.Lab.Clin.Med.126:33-411995中。本文中的术语“FcR”涵盖其它FcR，包括将来待鉴定的FcR。所述术语也包括新生儿受体FcRn，其负责将母体IgG转移至胎儿；Guyer等，J·Immunol·117:5871976及Kim等，J·Immunol·24:2491994〇[0093]术语“高变区”当在本文中使用时是指抗体的负责抗原结合的氨基酸残基。高变区通常包含来自“互补决定区”或“CDR”的氨基酸残基（例如轻链可变域中的残基24-34LI、50-56L2和89-97L3以及重链可变域中的31-35HI、50-65H2和95-102H3;Kabat等，SequencesofProteinsofImmunologicalInterest，第5版，PublicHealthService，NationalInstitutesofHealth，Bethesda，Md.1991和或来自“高变环”的那些残基例如轻链可变域中的残基26-32LI、50-52L2和91-96L3以及重链可变域中的26-32Hl、53-55H2和96-101H3;Chothia和LeskJ.Mol.Biol·196:901-9171987。“框架区”或“FR”残基是除如本文定义的高变区残基外的那些可变域残基。可将高变区或其CDR从一个抗体链转移至另一抗体链或至另一蛋白质以赋予所得复合抗体或结合蛋白以抗原结合特异性。[0094]“人源化”形式的非人例如啮齿动物抗体是含有源于非人免疫球蛋白的最小序列的嵌合抗体。人源化抗体大部分是人免疫球蛋白（接受者抗体），其中来自接受者的高变区的残基经来自如小鼠、大鼠、兔或非人灵长类动物的非人物种供体抗体）的高变区的具有所需特异性、亲和力和能力的残基置换。在一些情况下，人免疫球蛋白的框架区FR残基经相应非人残基置换。此外，人源化抗体可包含未见于接受者抗体或供体抗体中的残基。进行这些修饰以进一步提高抗体效能。一般而言，人源化抗体将包含实质上所有至少一个且通常两个可变域，其中所有或实质上所有高变环都对应于非人免疫球蛋白的高变环，且所有或实质上所有FR都是人免疫球蛋白序列的FR。人源化抗体任选还将包含免疫球蛋白恒定区（Fe的至少一部分，通常是人免疫球蛋白的恒定区的至少一部分。更多细节参见Jones等，Nature321:522-5251986;Riechmann等，Nature332:323-3291988;以及Presta,Curr.Op.Struct.Biol.2:593-5961992〇[0095]“亲和力成熟”抗体是相较于不具有变化的亲本抗体，在其一个或多个高变区中具有一个或多个导致抗体对抗原的亲和力提高的变化的抗体。在一个方面，亲和力成熟抗体将对目标抗原具有纳摩尔或甚至皮摩尔亲和力。亲和力成熟抗体是通过本领域中已知的程序制备。Marks等，BioTechnology10:779-7831992描述通过VH和VL结构域改组达成亲和力成熟。对CDR和或框架残基的随机突变诱发由以下文献描述：Barbas等，ProcNat.Acad.Sci，USA91:3809-38131994;Schier等，Gene169:147-1551995;Yelton等，J.Immunol.l55:1994-20041995;Jackson等，J.Immunol.1547:3310-91995;以及Hawkins等，J.Mol.Biol.226:889-8961992〇[0096]“分离的”抗体是已经鉴定且与其天然环境的组分分离和或从其天然环境的组分回收的抗体。在某些实施方案中，抗体将：（1被纯化至如通过劳立法Lowrymethod所测定大于95重量％蛋白质且或者大于99重量％;2被纯化至足以通过使用旋杯式测序仪获得N端或内部氨基酸序列的至少15个残基的程度；或（3通过使用考马斯蓝（Coomassieblue或银染色法，在还原或非还原条件下进行SDS-PAGE被纯化至均质。分离的抗体包括重组细胞内的原位抗体，因为抗体的天然环境的至少一种组分将不存在。然而，通常将通过至少一个纯化步骤来制备分离的抗体。[0097]“治疗”是指治疗性治疗与防治性或预防性措施两者。需要治疗者包括已患有疾病者以及待预防疾病或其复发者。因此，本文中待治疗的患者可已诊断为患有疾病或可能易患或易感疾病。术语“患者”和“受试者”在本文中可互换使用。[0098]配制的抗体是实质上纯净的且宜为实质上均质的（即不含污染性蛋白质等）。“实质上纯净”抗体意谓以组合物中的蛋白质的总重量计，包含至少约90重量％、至少约95重量％或97重量％抗体的组合物。“实质上均质”抗体意谓包含蛋白质的组合物，其中以蛋白质的总重量计，至少约99重量％蛋白质是特定抗体，例如抗α4β7抗体。[0099]如本文关于溃疡性结肠炎受试者所用的“临床缓解”是指完全Mayo计分为2分或小于2分且无个别子计分大于1点。克罗恩氏病“临床缓解”是指CDAI计分为150分或小于150分。[0100]如本文关于溃疡性结肠炎受试者所用的“临床反应”是指完全Mayo计分降低3分或3分以上及从基线降低30%或若在随访时未进行完全Mayo计分，则部分Mayo计分降低2分或2分以上及从基线降低25%或25%以上），伴有直肠出血子计分降低1分或1分以上或绝对直肠出血计分降低1分或1分以下。如本文关于克罗恩氏病受试者所用的“临床反应”是指CDAI计分从基线第0周）降低70分或70分以上。[0101]如本文关于溃疡性结肠炎受试者所用的“粘膜愈合”是指内窥镜子计分为1分或1分以下。[0102]如本文所用，“治疗失败”是指疾病恶化、需要急救药物或手术介入来治疗溃疡性结肠炎或克罗恩氏病。急救药物是为治疗新型或未分型溃疡性结肠炎或克罗恩氏病症状所需的任何新颖药物或基线药物剂量的任何增加除用于控制慢性腹泻的止泻药以外）。[0103]制剂[0104]如本文所述，已发现抗α4β7抗体在呈具有过量（以摩尔计）非还原糖的干燥（例如冻干）制剂形式时高度稳定。具体而言，非还原糖与抗α4β7抗体的比率摩尔：摩尔）大于600:1的冻干制剂在本文中显示稳定至少2年。[0105]在第一方面，本发明提供一种稳定抗α4β7抗体制剂。在一个方面，制剂包含缓冲剂、至少一种稳定剂和抗α4β7抗体。在一个方面，干燥制剂包含一种或多种非还原糖和抗α4β7抗体，其中非还原糖与抗α4β7抗体的比率摩尔：摩尔）大于600:1。制剂也包含一种或多种游离氨基酸。一种或多种氨基酸也可充当缓冲剂。在一个方面，一种或多种氨基酸可充当稳定剂。制剂可任选进一步包含至少一种表面活性剂。在一个实施方案中，制剂是干燥的，例如冻干的。制剂中的抗体可为全长抗体或其抗原结合片段，如Fab、Fv、scFv、Fab’或Fab，2片段。[0106]制剂可含有任何所需非还原糖。在一个方面，可包括于制剂中的非还原糖包括例如甘露糖醇、山梨糖醇、蔗糖、海藻糖、棉子糖、水苏糖、松三糖、聚葡萄糖、麦芽糖醇、乳糖醇、异麦芽酮糖、帕拉金糖醇palatinit及其组合。在另一方面，非还原糖是鹿糖、海藻糖、甘露糖醇和山梨糖醇。制剂中的非还原糖的绝对量不关键，但非还原糖与抗α4β7抗体的比率摩尔:摩尔）大于400:1。在另一方面，非还原糖与抗α4β7抗体的比率摩尔:摩尔）是至少约600:1、至少约625:1、至少约650:1、至少约675:1、至少约700:1、至少约750:1、至少约800:1、至少约1000:1、至少约1200:1、至少约1400:1、至少约1500:1、至少约1600:1、至少约1700:1、至少约1800:1、至少约1900:1或至少约2000:1。通常，合乎需要的是非还原糖以减少液体制剂中的可溶性聚集体形成（如发生在冷冻和解冻和或干燥和复原时的聚集体形成）的量存在。非还原糖与抗α4β7抗体的比率摩尔：摩尔）高于约730:1可能使得冻干状态下的可溶性聚集体形成略微减少。糖:蛋白质重量比可大于1.5:1ww。在另一方面，液体例如干燥前或复原后）制剂的非还原糖浓度在约IOmM至约IM范围内，例如约6OmM至约600mM、约IOOmM至约450mM、约200mM至约350mM、约250mM至约325mM、以及约275mM至约300mM。在另一方面，干燥例如冻干）制剂中的非还原糖的量在约40%至约70%基于干燥制剂的重量比（ww范围内。在另一方面，干燥（例如冻干）制剂中的非还原糖的量在约40%至约60%、约45%至约55%范围内或是约51%ww。在其它方面，当干燥制剂中的蛋白质量是约31%基于干燥制剂的重量比）或非还原糖与蛋白质的质量比大于约1.6:1时，干燥例如冻干）制剂中的非还原糖的量大于约51%基于干燥制剂的重量比）。在另一方面，蔗糖是用于制剂中的非还原糖。[0107]制剂可含有任何所需游离氨基酸，其可呈L型、D型或这些形式的任何所需混合物。在一个方面，可包括于制剂中的游离氨基酸包括例如组氨酸、丙氨酸、精氨酸、甘氨酸、谷氨酸、丝氨酸、赖氨酸、色氨酸、缬氨酸、半胱氨酸及其组合。一些氨基酸可例如通过氢键、盐桥、抗氧化性质或疏水性相互作用或通过从蛋白质表面排除而在制造、干燥、冻干和或储存期间稳定化蛋白质免遭降解。氨基酸可充当张力调节剂或可用于降低制剂粘度。在另一方面，游离氨基酸（如组氨酸和精氨酸可充当低温保护剂和冻干保护剂，且当冻干为制剂的组分时不结晶。单独或呈组合形式的游离氨基酸如谷氨酸和组氨酸可充当pH在5至7.5范围内的水溶液中的缓冲剂。在另一方面，制剂含有组氨酸、或组氨酸和精氨酸。在另一方面，液体制剂的游离氨基酸浓度在约IOmM至约0.5M范围内，例如约15mM至约30OmM、约20mM至约200mM、或约25mM至约150mM、约50mM或约125mM。在另一方面，干燥例如冻干制剂中的组氨酸的量在约1%至约10%基于干燥制剂的重量比）或约3%至约6%ww范围内。在一些实施方案中，当干燥制剂中的蛋白质量是约31%基于干燥制剂的重量比）或组氨酸与蛋白质的质量比大于约〇.15:1时，干燥例如冻干制剂中的组氨酸的量大于约4%基于干燥制剂的重量比）。在另一方面，干燥例如冻干制剂中的精氨酸的量在约4%至约20%基于干燥制剂的重量比）或约I〇%至约15%ww范围内。在一些实施方案中，当干燥制剂中的蛋白质量是约31%基于干燥制剂的重量比）或精氨酸与蛋白质的质量比大于约0.4:1时，干燥例如冻干制剂中的精氨酸的量大于约13%基于干燥制剂的重量比）。在氨基酸如组氨酸和精氨酸）的组合的实施方案中，总氨基酸与抗体的摩尔比可为至少200:1、约200:1至约500:1、或至少400:1。[0108]制剂可任选进一步含有至少一种表面活性剂。在一个方面，可包括于制剂中的表面活性剂包括例如聚山梨醇酯20、聚山梨醇酯80、泊洛沙姆Phxronic®及其组合。当存在时，表面活性剂通常以减少例如在装瓶、冷冻、干燥、冻干和或复原期间不溶性抗体聚集体形成的量包括在内。例如干燥前（例如冻干或复原后制剂中的表面活性剂浓度通常是约0.0001%至约1.0%、约0.01%至约0.1%，例如约0.02%、0.03%、0.04%、0.05%、0.06%、0.07%、0.08，％或0.09%^八）、0.05%至0.07%或0.06%^八）。例如干燥（例如冻干）制剂中的表面活性剂量通常是约0.01%至约3.0%ww、约0.10%至约1.0%，例如约0.15%、0.20%、0.25%、0.30%、0.35%、0.40%或0.50%^。在另一方面，表面活性剂：抗体摩尔比是约1:1。抗α4β7抗体可以任何所需量存在于制剂中，前提是非还原糖与抗α4β7抗体的比率摩尔：摩尔）大于约600:1。然而，制剂可含有高浓度的抗α4β7抗体。例如，液体制剂可包含至少约l〇mgml、至少约20mgml、至少约30mgml、至少约40mgml、至少约50mg1111、至少约6〇11111111、至少约7〇11^1111、至少约8〇11^1111、至少约9〇11^1111、至少约10〇11^1111、约40mgml至约80mgml抗α4β7抗体、约60mgml抗α4β7抗体。干燥制剂（例如冻干制剂）可含有至少约5重量％、至少约10重量％、至少约15重量％、至少约20重量％、至少约25重量％、至少约30重量％或约31重量％或约32重量％抗125。先前已用维多珠单抗观察到对HAHA形成的剂量依赖性抑制。22个呈HAHA阳性的维多珠单抗治疗受试者中有十九个存在中和性HAHA。[0323]表23:人抗人抗体研究结果的概述:安全性群体[0326]安慰剂组中一个受试者和维多珠单抗组中11个受试者呈持续HAHA阳性。[0327]表24:总体人抗人抗体状态安全性群体）[0330]aHAHA阴性:无阳性HAHA结果的受试者[0331]b分离的HAHA:仅有1个阳性HAHA样本的效价〈25的受试者[0332]c持续HAHA:有2个或更多个阳性HAHA样本或有1个阳性样本的效价多25的受试者[0333]结论[0334]这个第1期研究表征由CHO细胞产生的维多珠单抗的PKPD和初始安全性曲线。这个研究的结果用于支持炎症性肠病第3期关键试验的剂量选择。[0335]维多珠单抗显示Cmax参数在测试的剂量范围内具有剂量比例性;然而，观察到从0.211^1^至2.〇11^1^41]〇-丨1^、0^4此12呈剂量依赖性变化，从而表明维多珠单抗的非线性PK特性。在大于2.Omgkg的剂量水平下，未观察到这些参数有进一步变化，这表明维多珠单抗在低浓度下的快速消除过程发生饱和。线性消除过程较慢可能是在较高剂量下维多珠单抗的清除分数较大的原因。[0336]维多珠单抗在可在血清中测量出维多珠单抗时的所有时间点都在或接近最大程度上抑制PD参数Act-I和MAdCAM-1-Fc。一旦维多珠单抗浓度降至测定的检测限以下，对Act-I和MAdCAM-I-Fc的抑制即返回至近似基线水平。[0337]在一些发展针对维多珠单抗的HAHA的受试者中，观察到相较于在相应剂量水平内的HAHA阴性受试者，维多珠单抗的清除较快且α4β7受体较快丧失饱和。[0338]维多珠单抗耐受良好。在研究期间未发生死亡、SAE或导致中止研究药物施用的AE，也未观察到任何剂量-毒性关系。未报告全身机会性感染包括PML或赘瘤。[0339]不同于非特异性α4拮抗剂，维多珠单抗不伴有淋巴细胞增多或循环嗜酸性粒细胞、嗜碱性粒细胞或单核细胞平均数增加，也不存在任何淋巴细胞去除迹象。[0340]维多珠单抗引发HAHA形成，但仅在2个最低剂量组中观察到最高效价125，这是支持免疫原性呈剂量依赖性降低的先前观察结果的研究结果。这些数据显示施用较高剂量的维多珠单抗可将临床显著HAHA形成减至最小。[0341]总之，当以0.2mgkg至10.Omgkg的单次剂量向健康受试者施用时，维多珠单抗总体上安全且耐受良好。[0342]实施例6:测定维多珠单抗对⑶4:⑶8比率的影响[0343]以从10%蔗糖的冻干制剂复原且稀释至0.9%生理盐水的输注系统中的单次450mg剂量的维多珠单抗治疗18-45岁健康受试者。在单次450-mg剂量的维多珠单抗之前基线和之后5周，通过腰椎穿刺收集脑脊髓液CSF。各受试者充当其自身对照。[0344]基于先前研究选择5周时间点，所述研究显示以那他珠单抗治疗的MS患者仅在一个剂量之后即显示对CSFCD4+:⑶8+淋巴细胞比率具有影响且减少脑病变的数目（Stuve等，ArchNeurol·2006;63:1383-1387;Stuve等，AnnNeurol·2006;59:743-747;MiIIer等，NEnglJMed.2003;3481:15-23;且也因为在5周时，450-mg剂量的维多珠单抗足以使目标饱和且提供超过与每4周300mg的第3期给药方案相关的估计稳态谷底含量的血清浓度。[0345]从各受试者获得约15mLCSF用于免疫表型分析。若CSF样本满足以下准则，则将其纳入分析:每样本90%α4β7受体饱和，从而指示维多珠单抗在终点评估时使其目标饱和。[0347]在任何CSF样本中都未检测到维多珠单抗检测限值=0.125ygmL。[0348]对⑶4+和⑶8+T淋巴细胞数目和比率的影响[0349]维多珠单抗不显著减小⑶4+:CD8+比率表25。受试者中无一者的给药后⑶4+:CD8+比率〈1p〈0.00011侧t检验）。维多珠单抗不显著减小CSF中的CD4+或CD8+T淋巴细胞的数目。此外，CSFCD4+T淋巴细胞％和⑶8+T淋巴细胞％无显著变化表26。此外，未观察到外周血液WBC、⑶4+和⑶8+记忆T淋巴细胞有显著变化表27。[0350]表25:治疗对CSFCD4+:CD8+比率的影响（可评估群体，n=13[0351][0352]CI=置信区间[0353]*ρ〈〇·〇〇〇1Η0:μ〈1对Η1:μ=1的一侧一个样本t检验）。[0354]f差异定义为第5周比率减去基线比率[0355]表26:治疗对CSF⑶4+和⑶8+淋巴细胞计数的影响可评估群体，n=13[0358]表27:外周血液记忆T淋巴细胞R0+计数可评估群体，η=13[0359][0360]概述[0361]在单次450mg剂量之后，维多珠单抗不影响健康志愿者的CSF⑶4+和⑶8+细胞计数或⑶4+:CD8+比率。受试者中无一者的给药后CSFCD4+:⑶8+比率减小至小于1。在CSF中未检测到维多珠单抗。此外，未观察到外周血液中总WBC或记忆T淋巴细胞⑶4+和⑶8+子组有变化。在终点评估时，在所有受试者中都出现血液中目标α4β7饱和。CSFCD4+和CD8+淋巴细胞含量和比率类似于文献中先前报道的含量和比率。[0362]这些结果与维多珠单抗对猴的生理性CNS免疫监视与病理性CNS发炎两者缺乏影响一致参见实施例4。[0363]实施例7:维多珠单抗用于治疗IBD的长期临床经历[0364]完成第2期公开标签安全性扩展研究以评估维多珠单抗的长期药物动力学PK、药效学PD、安全性和功效。患者年龄是18至75岁，且先前已参与溃疡性结肠炎患者的初期PKPD安全性研究或已在筛选的36个月内具有内窥镜检查和或组织病理学和或放射学证实的IBD症状持续至少2个月。[0365]所有患者都接受以下静脉内给药方案:在第1、15和43天施用2mgkg或6mgkg维多珠单抗（5111〖1111^抗体、2〇1111梓檬酸盐梓檬酸、1251111氯化钠、0.05%聚山梨醇酯80，卩!16.0长期储存于_70°C且储存于_20°C多达3个月），随后每8周一个剂量，持续多达总共78周。患者是未治疗的溃疡性结肠炎或克罗恩氏病患者，或已参与初期临床试验的溃疡性结肠炎患者。[0366]使用功效生活质量QoL、部分Mayo计分PMS、克罗恩氏病活动性指数CDAI和炎症性肠病问卷IBDQ来评估研究结果。[0367]PK结果[0368]平均输注前维多珠单抗浓度与剂量成比例，且在整个研究期间保持稳定和可检测。[0369]PD结果[0370]在所有剂量水平下在整个研究期间受体ACT-1+[CD4+CD45R0HIGH]%和MADCAM+[CD4+CD45R0HIGH]%几乎完全受抑制。[0371]部分Mayo计分[0372]未治疗的溃疡性结肠炎患者（5.4的基线平均PMS比溃疡性结肠炎滚动rollover患者2.3高。截至第43天，滚动溃疡性结肠炎患者与未治疗的溃疡性结肠炎患者的平均PMS均显示显著降低。截至第155天，两组的平均计分类似。平均PMS继续降低直至第267天，且此后平稳。[0373]克罗恩氏病活动性指数[0374]⑶患者的平均CDAI从基线时的294.6降低至第43天时的237.7,且继续降低直至第155天（156.1。[0375]IBDQ[0376]溃疡性结肠炎滚动患者在基线时具有最高平均IBDQ计分。截至第43天，平均IBDQ计分在所有三个疾病组中都增加。平均IBDQ计分在所有3个疾病组中都继续随时间增加，对于克罗恩氏病患者，在第155天时达到最大，且对于未治疗的溃疡性结肠炎患者和溃疡性结肠炎滚动患者，在第491天时达到最大。[0377]C-反应性蛋白[0378]溃疡性结肠炎滚动患者与克罗恩氏病患者均显示平均CRP含量降低直至第155天且随后平稳。未治疗的溃疡性结肠炎患者在基线时的平均CRP含量低于溃疡性结肠炎滚动患者（2.28对7.09。未治疗的溃疡性结肠炎患者的平均CRP含量在评估的所有时间点都保持相对恒定。[0379]其它安全性结果[0380]在研究期间未报道全身机会性感染包括PML。一个患者在单一时间点被测试为JC病毒血症阳性，但在所有其它时间点都为JCV阴性。72个患者中有3个4%具有阳性HAHA结果其中两个是短暂性阳性）。研究显示无肝毒性、淋巴球增多症或淋巴球减少症或任何其它药物相关实验室变化的迹象。[0381]结论[0382]以2.0mgkg或6.0mgkg每8周一次施用维多珠单抗持续多达78周达成目标受体饱和，与疾病活动性的持久平均降低和IBDQ计分提高相关，通常是安全且充分耐受的，且显示免疫原性可接受。[0383]实施例8:患有中度至重度活动性克罗恩氏病的患者的反应和缓解的诱导[0384]完成随机化双盲安慰剂对照多中心研究以评估在300mg剂量下的维多珠单抗从60mgml抗体于50mM组氨酸、125mM精氨酸、0.06%聚山梨醇酯80、10%鹿糖pH6.3中的冻干制剂复原在TNFa拮抗剂失败患者中在第6周时在2个剂量-第0周和第2周之后和在第10周时（在3个剂量之后）的诱导效应。研究由416个患者组成，其中75%遭遇TNFa拮抗剂失败，且其中25%未经TNFa处理。使治疗组之间的人口资料和伴随IBD药物平衡。也使治疗组之间的基线疾病特征平衡，基线疾病活动性除外。[0385]对研究指定的主要终点是抗TNF-a拮抗剂失败群体的第6周缓解（％。评估依序测试程序的关键次要终点是:总群体的第6周缓解（％、抗TNF-a拮抗剂失败群体和总群体的第10周缓解（％使用Hochberg程序）、抗TNF-a拮抗剂失败群体和总群体的第6周和第10周持续缓解（％使用Hochberg程序）、以及抗TNF-a拮抗剂失败群体的第6周增强反应%〇[0386]表28:基线CDAI:[0387][0388]表29:诱导研究结果:主要和关键次要终点[0391]表30:未经抗TNF-α拮抗剂处理的患者的结果n=l〇l，总体的24%[0392][0393]表31:研究结果:ITT总体的关键子组-先前Tx失败第6周和第10周时的临床缓解[0394][0395]研究显示TNF-α诘抗剂失败患者需要3个剂量来诱导缓解。TNF-α诘抗剂失败患者的缓解率在第6周与第10周之间增加，但仅针对维多珠单抗组而非安慰剂）。未经TNF-c^g抗剂处理的患者的缓解率在第6周与第10周之间实质上不增加。在具有高度疾病严重性的TNF-α拮抗剂失败群体中，43%从未对TNF-α拮抗剂起反应，且45%丧失反应。[0396]实施例9:患有中度至重度活动性溃疡性结肠炎的患者的反应和缓解的诱导和维持[0397]设计包括两个随机化双盲多中心研究的单一试验以评估患有中度至重度活动性溃疡性结肠炎的患者的反应和缓解的诱导和维持。人口资料和基线疾病特征在所有治疗组之间都相当。[0398]使用静脉内施用的诱导研究将安慰剂与维多珠单抗在从60mgml抗体于50mM组氨酸、125mM精氨酸、0.06%聚山梨醇酯80、10%蔗糖pH6.3中的冻干制剂复原的300mg剂量下进行比较，其中终点是在2个剂量的维多珠单抗后第6周时。[0399]使用与诱导研究相同的制剂和施用途径的维持研究将安慰剂与每四周给药的维多珠单抗以及安慰剂与每八周给药的维多珠单抗进行比较。各患者年龄18-80岁，诊断有中度至重度活动性溃疡性结肠炎;在先前5年时期内显示对至少一种常规疗法例如皮质类固醇反应不足够、丧失反应或不耐受;且可正在接受治疗剂量的常规IBD疗法。这个研究的终点是在第52周时分析诱导反应者群体。试验的两个时期均满足其主要终点，即诱导期临床反应和维持期临床缓解。[0400]在研究期间收集血液样本以测量维多珠单抗的浓度。在诱导期结束时维多珠单抗的平均血清浓度是20ygmL至SOygmLJO分钟静脉内输注300mg剂量施用之后的稳态下平均维多珠单抗谷底血清浓度对于每8周1次方案在9ygmL至13ygmL之间且对于每4周1次方案在35ygmL至40ygmL之间。在输注结束时，维多珠单抗中值血浆浓度对于每8周1次8周）方案在98ygmL与101ygmL之间且对于每4周1次4周方案在约129ygmL与137ygmL之间。[0401]对诱导和维持研究的反应的概述提供于表32-35中。相较于安慰剂，在第6周时，显著更大比例的维多珠单抗治疗患者达成临床反应、缓解和粘膜愈合表32。诱导期意图治疗群体中有39%遭遇先前抗TNFa失败。在遭遇先前抗TNF失败的患者与无先前抗TNF暴露的患者中，维多珠单抗患者的临床反应和缓解率均高于安慰剂患者。在直至第6周的初步分析中，安慰剂组中不利事件AE、严重AE和导致研究中止的不利事件的比率高于维多珠单抗组。相较于安慰剂患者，显著更大比例的维多珠单抗患者在第52周时达成临床缓解、粘膜愈合和无皮质类固醇缓解，且达成持久反应和缓解表33。维持研究群体中有32%遭遇先前抗TNFa失败。在TNF失败患者与未经TNF处理患者中，维多珠单抗的临床缓解和持久临床反应率均大于安慰剂。在第0-52周中，在安全性群体N=895中，不利事件AE、严重AE和严重感染的比率在维多珠单抗组与安慰剂组之间类似。在维多珠单抗组中未观察到机会性感染或肠道感染的比率增加。[0402]表32:诱导研究结果-主要和关键次要终点[0403][0404]表33:维持研究结果-主要和关键次要终点[0405][0406]表34:诱导研究：ITT群体中遭遇先前抗TNF-α拮抗剂失败的患者和无抗TNF暴露的患者在第6周时的临床反应和缓解[0409]表35:在第52周时的临床缓解和持久临床反应：ITT群体中遭遇先前抗TNF-α拮抗剂失败的患者或无抗TNF-a拮抗剂暴露的患者[0410][0411]实施例10:患有中度至重度活动性克罗恩氏病的患者的反应和缓解的诱导和维持[0412]设计包括两个随机化双盲多中心研究的单一试验以评估患有中度至重度活动性克罗恩氏病的患者的反应和缓解的诱导和维持。人口资料和基线疾病特征在所有治疗组之间都相当。[0413]使用静脉内施用的诱导研究将安慰剂与维多珠单抗在从60mgml抗体于50mM组氨酸、125mM精氨酸、0.06%聚山梨醇酯80、10%蔗糖pH6.3中的冻干制剂复原的300mg剂量下进行比较，其中终点是在2个剂量的维多珠单抗后第6周时。[0414]使用与诱导研究相同的制剂和施用途径的维持研究将安慰剂与每四周给药的维多珠单抗以及安慰剂与每八周给药的维多珠单抗进行比较。此研究的终点是在第52周时分析诱导反应者群体。[0415]惊人的是，此研究显示每4周1次组和每8周1次组产生极类似结果。对诱导和维持研究的反应的概述提供于表36-39中。相较于安慰剂，显著更大比例的维多珠单抗治疗患者达成临床缓解和反应增强表36。在遭遇先前抗TNF失败的患者与无先前抗TNF暴露的患者中，维多珠单抗患者的临床缓解和反应增强率均高于安慰剂患者。不利事件AE、严重AE和严重感染的比率在维多珠单抗组与安慰剂组之间类似。在维多珠单抗组中未观察到机会性感染或肠道感染的比率增加。[0416]表36:诱导研究结果-主要和次要终点[0417][0418]表37:维持研究结果-主要和关键次要终点[0421]表38:ITT群体中遭遇先前抗TNF-α拮抗剂失败的患者和无抗TNF暴露的患者在第6周时的临床缓解和增强反应[0422][0423]表39:在第52周时的临床缓解和增强反应：ITT群体中遭遇先前抗TNF-a拮抗剂失败的患者或不具有抗TNF-a诘抗剂暴露的患者[0427][0428]虽然本发明已参考其优选实施方案进行特定显示和描述，但本领域技术人员应了解，可在不脱离由随附权利要求涵盖的本发明的范围下在其中在形式和细节方面做出各种改变。

权利要求：1.一种包含非还原糖、抗α4β7抗体和至少一种游离氨基酸的混合物的稳定制剂，其中所述制剂呈固体形式，且非还原糖与抗α4β7抗体的摩尔比摩尔:摩尔大于600:1。

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