申请/专利权人：东莞市恩联干细胞生物科技研究院

申请日：2021-04-20

公开（公告）日：2022-10-21

公开（公告）号：CN115216440A

主分类号：C12N5/0775

分类号：C12N5/0775

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2022.10.21#公开

摘要：本发明涉及一种在较短培养时间内提高脐带来源间充质干细胞产量的方法。主要步骤为将一根长约30cm的脐带组织剪成4～5cm小段，去除血液洗净后剥离出脐带华氏胶，将华氏胶放入含10％血替的完全培养基中浸泡后，剪至1～3mm3组织块并接种至培养瓶中培养。培养8～12天后收获首批原代脐带间充质干细胞，同时回收组织块进行二次贴壁培养。培养5～9天后收获第二批原代脐带间充质干细胞。采用该方法能够在20天内使华氏胶中的细胞最大限度地游离出来，提高了组织利用率和原代细胞产量；同时操作步骤简便，只需两次细胞收集操作即可完成。

主权项：1.一种在较短培养时间内提高脐带间充质干细胞产量的方法，其特征在于能够大量获得用于临床应用的、质量稳定的原代间充质干细胞，其方法包括如下步骤：A.脐带采集：采集病毒乙型肝炎病毒、丙肝病毒、人类免疫缺陷病毒、巨细胞病毒、梅毒等传染性疾病检测结果为阴性，无家族性病史血液系统疾病、代谢性疾病、染色体异常、免疫缺陷病等，健康的新生儿脐带组织；B.脐带洗涤：对整根脐带表面喷洒75％乙醇5～10s后，立即用大量生理盐水冲洗脐带表面，并在装有20～25ml生理盐水的10cm培养皿中清洗三遍；C.脐带分段：将脐带放入新的含20～25mL生理盐水的培养皿，用手术剪刀剪掉脐带两端，排尽血管内血液，并用盐水清洗两遍后，用手术剪刀将脐带组织剪成4～5cm长的组织段；D.华氏胶分离和处理：用镊子沿脐静脉撕开脐带，剔除一条静脉和两条动脉后，撕掉羊膜，剩下组织即为华氏胶；将华氏胶放入完全培养基中，在一定温度下浸泡一段时间后，捞出华氏胶，用手术剪将华氏胶剪至1～3mm3组织块；E.组织块培养：将组织块在培养瓶底部平铺均匀后，在5％CO2，37℃培养箱中培养一段时间后加入完全培养基继续培养，3～5天更换一次完全培养基，至细胞融合度达90～95％左右，单独收集组织块和细胞，对组织块进行第二次贴壁培养，至细胞融合度达90～95％左右对细胞进行收集，合并两次收获的原代细胞。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 东莞市恩联干细胞生物科技研究院 一种在较短培养时间内提高脐带间充质干细胞产量的方法

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