申请/专利权人：中国医学科学院医学实验动物研究所

申请日：2022-10-25

公开（公告）日：2023-05-02

公开（公告）号：CN116042634A

主分类号：C12N15/12

分类号：C12N15/12;C12N15/85;A01K67/027

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.05.19#实质审查的生效;2023.05.02#公开

摘要：本发明提供一种用于建立mtDNA编码基因条件敲除大鼠的方法。利用DdCBE碱基编辑工具，使大鼠mtDNA编码基因密码子TGA编码氨基酸W或CAA编码氨基酸Q转变为终止密码子TAA，导致翻译提前终止。通过CRISPRCas9技术将Cre依赖性表达的LSL‑DdCBE元件敲入大鼠Rosa26位点，建立mtDNA编码基因条件敲除大鼠。通过与Cre工具大鼠杂交，激活DdCBE的表达和编辑，从而实现组织或细胞特异性mtDNA编码基因的敲除。本发明针对mtDNA编码基因敲除的技术限制，通过DdCBE工具和Cre‑loxP系统的联合应用，开发一种能够在大鼠中实现条件性敲除mtDNA编码基因的方法。

主权项：1.一种大鼠mtDNA编码基因敲除方法，包括：选择大鼠mtDNA靠近基因编码框5’端的密码子TGA中碱基G或密码子CAA中碱基C作为目标靶点；在目标突变碱基GC位置上下游分别选定一个TALE识别靶序列，两个TALE识别靶序列中间的间隔序列为7-18bp，且不含除目标突变碱基GC之外的碱基GC，其中两个TALE识别靶序列与间隔序列一起限定目标突变序列；筛选能够准确靶向目标位点，并使其发生高效C·G-to-T·A转变的DdCBE组合，从而在大鼠mtDNA编码基因中引入终止密码子TAA，使得蛋白翻译提前终止。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 中国医学科学院医学实验动物研究所 用于建立mtDNA编码基因条件敲除大鼠的方法

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