申请/专利权人：中国农业科学院植物保护研究所

申请日：2021-05-27

公开（公告）日：2023-05-05

公开（公告）号：CN114280306B

主分类号：C07K14/415

分类号：C07K14/415

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.05.05#授权;2022.04.22#实质审查的生效;2022.04.05#公开

摘要：本发明提供一种牛筋草EPSPS蛋白ELISA检测试剂盒及检测方法。通过原核表达获得重组EPSPS蛋白，将重组蛋白免疫小鼠，筛选得到特异性的单克隆抗体，开发出定量检测EPSPS蛋白含量的酶联免疫定量检测试剂盒。并建立了双抗体夹心ELISA法，通过优化得到ELISA试剂盒体系，可定量检测EPSPS蛋白。本发明采用ELISA检测技术可实现对植物中的EPSPS蛋白进行定性定量检测，具有特异性强、灵敏度高、简单快速等优点。

主权项：1.牛筋草EPSPS蛋白ELISA检测试剂盒，其特征在于，所述试剂盒包括预包被酶标板和酶标记抗体；所述预包被酶标板为包被有抗牛筋草EPSPS蛋白单克隆抗体的酶标板，所述酶标记抗体为辣根过氧化物酶标记的抗牛筋草EPSPS蛋白多克隆抗体；其中，所述抗牛筋草EPSPS蛋白单克隆抗体由保藏编号为CGMCCNo.22308的杂交瘤细胞株FL-374-08分泌产生；抗牛筋草EPSPS蛋白多克隆抗体的制备方法包括：将编码牛筋草EPSPS蛋白的基因经过优化后构建到大肠杆菌表达系统中，表达纯化得到EPSPS重组蛋白，然后用EPSPS重组蛋白免疫兔子，采集兔子血清后纯化获得；其中所述牛筋草EPSPS蛋白的氨基酸序列如SEQIDNO:1所示；所述抗牛筋草EPSPS蛋白单克隆抗体的包被浓度为1.8-2.2μgmL，酶标记抗体的浓度为8-12μgmL；所述试剂盒还包括标准品冻干粉、样品提取液、洗涤液、显色剂和终止液；所述标准品冻干粉为EPSPS重组蛋白；所述样品提取液为0.01MPBS缓冲液，pH7.4；所述洗涤液为含0.2％vv吐温-20的0.01MPBS缓冲液，pH7.4；所述终止液为1.8-2.2M硫酸水溶液或1MHCl水溶液；所述显色剂包括辣根过氧化物酶催化底物A液和B液；所述辣根过氧化物酶催化底物A液为3％vvH2O2水溶液；所述辣根过氧化物酶催化底物B液的制备方法如下：将1mL浓度为10mgmL的3,3',5,5'-四甲基联苯胺溶液加入到100mL浓度为0.1molL、pH6.0的磷酸缓冲液中，混匀即得。

全文数据：

权利要求：

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