申请/专利权人：郑州大学第一附属医院

申请日：2022-10-12

公开（公告）日：2023-05-09

公开（公告）号：CN116083377A

主分类号：C12N7/01

分类号：C12N7/01;C12N15/66;C12N15/65;C12N15/24;C12N15/863;C12N5/10;A61K38/20;A61K48/00;A61P1/16;A61P35/00

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2023.05.09#公开

摘要：新型重组痘苗病毒VV‑IL‑37的构建方法和应用，涉及癌症治疗技术领域，包括如下步骤：步骤一重组质粒pEGFP‑IL‑37‑N1的构建：经过引物设计、扩增、酶切、琼脂糖凝胶电泳、胶回收、连接、转化、摇菌、质粒提取步骤得到pEGFP‑IL‑37‑N1质粒；步骤二重组痘苗病毒VV‑IL‑37VV‑IL‑37‑GFP的生成与包装，采用该方法构建的重组痘苗病毒VV‑IL‑37‑GFP具有强感染能力和优异的IL‑37基因表达能力，且该新型重组痘苗病毒VV‑IL‑37可用于在制备肝癌药物。

主权项：1.新型重组痘苗病毒VV-IL-37的构建方法，其特征在于，包括如下步骤：步骤一重组质粒pEGFP-IL-37-N1的构建：经过引物设计、扩增、酶切、琼脂糖凝胶电泳、胶回收、连接、转化、摇菌、质粒提取步骤得到pEGFP-IL-37-N1质粒；步骤二重组痘苗病毒VV-IL-37VV-IL-37-GFP的生成与包装：2.1取处于对数生长期的293细胞，制备成细胞悬液，然后铺到细胞培养皿中，放入CO2恒温细胞培养箱中培养；2.2用无血清的DMEM细胞培养基配制野生型痘苗病毒工作液，随后，将病毒工作液加入293细胞中，并放于CO2细胞培养箱孵育，使病毒吸附细胞；2.3取1上述pEGFP-IL-37-N1质粒加到离心管中，再依次加入ECbuffer和Enhancerbuffer，轻轻混匀后，室温放置；2.4向离心管中加入Effectene转染液，用移液枪轻轻吹打混匀后，室温放置；2.5之后向离心管加入DMEM细胞培养基，轻轻混匀，即为质粒转染工作液；2.6取出293细胞，弃掉上清，用PBS轻轻清洗三次，随后，加入质粒转染工作液，再添加DMEM细胞培养基，混匀后，放入CO2细胞培养箱中培养；2.7之后收集细胞上清液，放于离心机中离心1；离心完成后，用滤器过滤细胞上清液，随后，2.8将细胞上清液移入超速离心管中，并置于超速离心机中离心；离心完成后，弃掉上清，加入病毒保存液，充分溶解，即为生成并包装好的重组痘苗病毒VV-IL-37VV-IL-37-GFP。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 郑州大学第一附属医院 新型重组痘苗病毒VV-IL-37的构建方法和应用

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