申请/专利权人：首都医科大学

申请日：2023-06-07

公开（公告）日：2023-08-11

公开（公告）号：CN116407681B

主分类号：A61L27/20

分类号：A61L27/20;C08B37/10;C08B37/08;A61L27/22;A61L27/52;A61L27/58;A61L27/50

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.08.11#授权;2023.07.28#实质审查的生效;2023.07.11#公开

摘要：本发明公开了一种可长期控制NGFbFGF释放的肝素‑透明质酸水凝胶及其制备方法与应用。本发明首先制备了肝素纳米颗粒；再通过特异性相互作用将NGFbFGF加载至肝素纳米颗粒；将加载了细胞因子的肝素纳米颗粒与透明质酸凝胶前体借助迈克尔加成反应制造出加载了NGFbFGF的肝素‑透明质酸凝胶。本发明的肝素纳米颗粒呈球形、分散性良好、粒径可控且分布均一、表面带负电荷；加载了NGFbFGF的肝素‑透明质酸水凝胶可显著促进了背根神经节细胞突起的生长、分化。其弹性模量与脑或脊髓组织相匹配，可以在体外缓释NGFbFGF至少3周；该水凝胶可明显促进脑卒中或脊髓损伤区内产生新生的神经元。

主权项：1.一种可长期控制NGF和bFGF释放的肝素-透明质酸水凝胶的制备方法，包括下述步骤：1）首先采用反相乳液聚合法通过自由基聚合反应制备出肝素纳米颗粒；2）利用所述肝素纳米颗粒与细胞因子之间的非共价可逆相互作用，将NGF和bFGF结合到所述肝素纳米颗粒中，得到负载NGF和bFGF的肝素纳米颗粒；其中，所述NGF代表神经生长因子；所述bFGF代表碱性成纤维细胞生长因子；3）制备透明质酸凝胶前体粉末；4）将步骤2）制备的负载NGF和bFGF的肝素纳米颗粒与步骤3）制备的透明质酸凝胶前体进行迈克尔加成反应，得到负载NGF和bFGF的肝素-透明质酸水凝胶；所述步骤1）中，所述肝素纳米颗粒的制备步骤具体如下：（a1）使用碳二亚胺活化肝素上的羧基，使其与己二酸二酰肼的氨基反应生成酰胺键，得到产物He-ADH；（b1）将所述步骤（a1）得到的产物He-ADH中的氨基与丙烯酸-N-琥珀酰亚胺酯上的酯基反应，使得肝素侧链上带有双键，得到改性后的肝素单体；（c1）将所述步骤（b1）得到的改性后的肝素单体溶于pH=4的醋酸钠溶液中，然后加入N,N,N',N'-四甲基乙二胺，超声混匀，形成水相溶液A；将水相溶液10倍体积的己烷与乳化剂混合，快速搅拌，形成油相溶液B；随后在不断搅拌下，将水相溶液A添加到油相溶液B中，形成预聚物乳液；然后向预聚物乳液中加入过硫酸铵水溶液，之后立即超声；向上述溶液中加入等体积的乙醇，离心，倒掉上清液，再加乙醇洗涤，离心，此操作重复三次，得到肝素纳米颗粒；所述步骤3）中，所述透明质酸凝胶前体的制备需要两步改性，具体步骤如下：（a2）利用碳二亚胺法生成酰胺键，在室温环境下，将透明质酸钠溶解于0.1M的PBS缓冲液中，搅拌至充分溶解后，再将己二酸二酰肼加入并搅拌至溶解，之后添加1-（3-二甲氨基丙基）-3-乙基碳二亚胺盐酸盐、1-羟基苯并三唑搅拌至溶解，最后在pH值为4.75-5.5的PBS缓冲液中进行反应；之后将反应完成后的溶液置于100mM的NaCl溶液中透析72-120小时，再于蒸馏水中透析72-120小时，透析袋截留分子量=12-14kD；透析后，将上述溶液冷冻干燥72-120小时后，获得HA-ADH；（b2）利用氨基和酯键反应生成酰胺键，即将HA-ADH中的氨基与丙烯酸-N-琥珀酰亚胺酯上的酯基反应，将氨基转化为酰胺键，合成了HA-Ac，即透明质酸凝胶前体。

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百度查询： 首都医科大学 一种可长期控制NGF&bFGF释放的肝素-透明质酸水凝胶及其制备方法与应用

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