申请/专利权人：湖南工程学院

申请日：2022-06-15

公开（公告）日：2023-09-26

公开（公告）号：CN115011713B

主分类号：C12Q1/689

分类号：C12Q1/689;C12N15/11;C12Q1/682;C12R1/32

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.09.26#授权;2022.09.23#实质审查的生效;2022.09.06#公开

摘要：本发明提供了一种基于DNAzyme双循环体系的牛结核分枝杆菌检测探针组及其检测方法，该检测探针组包括发夹型探针H1、发夹型探针H2、信号链S3和Pb2+，发夹型探针H1和发夹型探针H2均为茎环结构且均含有8‑17DNAzyme碱基序列，发夹型探针H1环部区中心位置和信号链S3中心位置均有8‑17DNAzyme特异性切割位点；发夹型探针H1连接有与牛结核分枝杆菌靶序列互补的碱基序列和引发链；发夹型探针H2包含有与引发链、信号链S3互补的碱基序列。本发明检测探针将Pb2+依赖型8‑17DNAzyme作为双循环信号放大体系的中心元件，实现牛结核杆菌检测信号高效放大的目的，同时本方法不依赖胞内酶系，能够在体外进行检测筛选，实现对牛结核分枝杆菌DNA的快速高灵敏检测。

主权项：1.一种基于DNAzyme双循环体系的牛结核分枝杆菌检测探针组，其特征在于，包括发夹型探针H1、发夹型探针H2、信号链S3和Pb2+；所述发夹型探针H1和发夹型探针H2均为茎环结构，所述发夹型探针H1和发夹型探针H2均含有8-17DNAzyme碱基序列，所述发夹型探针H1环部区中心位置和信号链S3中心位置均有8-17DNAzyme特异性切割位点；所述发夹型探针H1的茎部区游离3’端和环部区分别连接有a1区和b1区，所述a1区和b1区分别为与牛结核分枝杆菌靶序列5’端和3’端互补的碱基序列，所述发夹型探针H1还包含有引发链序列；所述发夹型探针H2的环部区包含有与所述引发链互补的碱基序列，所述发夹型探针H2的游离3’端和茎部互补区分别连接有a2区和b2区，所述a2区和b2区分别为与所述信号链S3的5’端和3’端互补的碱基序列；所述信号链S3的两端分别连接有荧光基团和荧光淬灭基团；所述发夹型探针H1的基因序列如SEQIDNO.5所示：GGATCAAAAATAGTCCTCTACTrAGTCTTTTTTTTTGATCCGAGCCGGACGAAGTGTCTGCACA，该序列中rA为RNA碱基，为特异性切割位点；所述牛结核分枝杆菌靶序列的基因序列如SEQIDNO.8所示：TGTGCAGACGGAGAGGACTAGATTTGTCAGA；所述发夹型探针H2的基因序列如SEQIDNO.6所示：GGAGATAGTTCAGTAGAGGACTATTTTTGATAAGAACTATCTCCGAGCCGGACGAAACTAAGA；所述信号链S3的基因序列如SEQIDNO.7所示：TCTTAGTTrAGGATAGTT，该序列中rA为RNA碱基，为特异性切割位点。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 湖南工程学院 基于DNAzyme双循环体系的牛结核分枝杆菌检测探针组及其检测方法

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