申请/专利权人：安徽新熙盟生物科技有限公司

申请日：2020-09-30

公开（公告）日：2023-09-29

公开（公告）号：CN112143683B

主分类号：C12N1/20

分类号：C12N1/20;C12P17/18;C12R1/01

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.09.29#授权;2021.01.15#实质审查的生效;2020.12.29#公开

摘要：本发明涉及一种培养基及应用所述培养基对菌种进行发酵培养的方法，所述培养基通过在现有的通用培养基中添加适当重量的甲胺乙醇溶液和甲醛，甲胺和甲醛一部分通过丝氨酸循环进行碳固定，另一部分氧化成甲酸可以产生能量供甲基营养菌生长，物料配伍合理，碳源品种丰富，可有效加快生丝微菌胞内脱氢酶的生成而大量诱导合成PQQ，该培养基应用于PQQ的发酵生产中，有效提高从甲醇到PQQ的转化率。本发明所述的应用所述培养基对菌种进行发酵培养的方法，在三级扩大培养过程中，发酵培养80h后开始流加补料培养基，能有效加快生丝微菌胞内代谢活动，缩短代谢流路，提高脱氢酶的生成量，进一步提高了甲醇的利用率；且上述补料策略操作简便，适合工业化生产。

主权项：1.一种提高维生素PQQ转化率的发酵方法，其特征在于，具体步骤如下：1一级扩大培养：将生丝微菌的种子液加入培养基中，于150rpm、34℃条件下进行振荡培养20-24h；2二级扩大培养：将步骤1得到的菌液加入到培养基中，于150rpm、34℃条件下进行振荡培养18-22h；3三级扩大培养：将步骤2得到的菌液加入到含培养基的发酵罐进行培养，搅拌速度为100-400rpm，通气比为0.2-0.5vvm，0-80h发酵培养温度为33-35℃，80h后至结束发酵培养温度为30-32℃，并于80h开始流加补料培养基；其中，步骤1、2、3中所述培养基的原料组分构成为：无水甲醇0.1-2重量份、甲胺乙醇溶液0.1-0.5重量份、甲醛0.02-0.1重量份、NH42SO40.5-1.0重量份、KH2PO40.1-0.5重量份、Na2HPO40.6-1.0重量份、MgSO4·7H2O0.1-0.3重量份、FeSO4·7H2O0.005-0.01重量份、ZnSO4·7H2O0.01-0.03重量份、CoCl2·6H2O0.005-0.01重量份、水100重量份、辅酶Q100.001-0.003重量份、甘氨酸0.01-0.05重量份、天冬酰胺0.01-0.03重量份；所述甲胺乙醇溶液的质量浓度为30％；步骤3中所述补料培养基的配方组成按照重量份计，由以下组分构成：无水甲醇40％、甲胺乙醇溶液10％、甲醛5％、甲酸2％、甘氨酸0.5％，其余为水；所述甲胺乙醇溶液的质量浓度为30％；所述补料培养基的加入总体积占所述发酵罐内培养基初始体积的25-40％；步骤3中80h后所述补料培养基的流加策略如下：80h开始流加占所述发酵罐内培养基初始体积2％的补料培养基，之后每隔1h检测OD，OD每增加2流加占所述培养基初始体积1％的补料培养基，直至流加完全部的补料培养基。

全文数据：

权利要求：

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