申请/专利权人：四川农业大学

申请日：2023-05-26

公开（公告）日：2023-10-20

公开（公告）号：CN116904495A

主分类号：C12N15/82

分类号：C12N15/82;C07K14/415;C12N15/29

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.11.07#实质审查的生效;2023.10.20#公开

摘要：本发明属于细胞生物学领域，具体涉及白芷原生质体高效瞬时转化的方法，包括以下步骤：S1、将待转化的外源基因DNA溶液和原生质体溶液进行混合；其中，外源DNA质粒的高纯度为吸光度值OD260OD280＝1.6‑2.0，高浓度为0.5‑1.5μgμl，外源基因DNA的用量为7.5‑12.5μg，原生质体溶液的浓度范围为2×104‑2×106个mL；S2、将浓度为45‑55％的PEG‑Ca2+溶液加入步骤S1得到的混合液中，于20‑26℃黑暗条件下转化25‑35min；S3、往孵育转化后的混合液中加入W5溶液以终止转化，离心后去除上清液，再加入W5溶液将管底的原生质体重悬，进一步在24‑32℃条件下黑暗孵育14‑16h即可。本发明的瞬时转化方法周期短、操作便捷、效率高，弥补了传统遗传转化方式的缺点。

主权项：1.白芷原生质体高效瞬时转化的方法，其特征在于，包括以下步骤：S1、将待转化的外源基因DNA溶液和原生质体溶液进行混合；其中，外源DNA质粒的高纯度为吸光度值OD260OD280＝1.6-2.0，高浓度为0.5-1.5μgμl，外源基因DNA的用量为7.5-12.5μg，原生质体溶液的浓度范围为2×104-2×106个mL，外源基因DNA的质量和原生质体的个数比范围为1μg:2×104个-2×106个；S2、将PEG-Ca2+溶液加入步骤S1得到的混合液中，并混合均匀，于20-26℃黑暗条件下转化25-35min；其中，PEG-Ca2+溶液的浓度为45-55％；S3、往孵育转化后的混合液中加入W5溶液以终止转化，离心后去除上清液，再加入W5溶液将管底的原生质体重悬，置于24-32℃培养箱中黑暗孵育14-16h。

全文数据：

权利要求：

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