申请/专利权人：贵州大学

申请日：2023-06-28

公开（公告）日：2023-11-21

公开（公告）号：CN117089604A

主分类号：C12Q1/6844

分类号：C12Q1/6844;C12Q1/6883

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2023.12.08#实质审查的生效;2023.11.21#公开

摘要：本发明公开了一种基于DNAzyme催化介导恒温扩增技术的RNA甲基化修饰检测方法，包括如下步骤：分别设计并合成rAG底物、rm6AG底物、8‑17DNAzyme、发夹探针H1、发夹探针H2；配制一系列含有由不同比例的混合底物的混合溶液，将每种比例的混合溶液与DNAzyme反应液混合，得到标准品溶液；配制含rAG底物的溶液，不加入DNAzyme反应液，作为空白对照溶液；将标准品溶液进行切割反应、CHA扩增反应；将空白对照溶液进行CHA扩增反应；计算荧光强度差值，建立标准曲线；将该标准曲线用于检测待测样品的甲基化修饰水平。本发明可在温和条件下实现甲基化修饰的简单、快速、灵敏检测。

主权项：1.一种基于DNAzyme催化介导恒温扩增技术的RNA甲基化修饰检测方法，其特征在于，包括如下步骤：1底物合成分别设计并合成含有rAG位点的rAG底物以及含有rm6AG位点的rm6AG底物，并设计合成8-17DNAzyme、发夹探针H1、发夹探针H2；2溶液配制配制含有8-17DNAzyme的DNAzyme反应液，配制含有发夹探针H1和发夹探针H2的CHA反应液；配制一系列含有由不同比例的rm6AG底物与rAG底物组成的混合底物的混合溶液，将每种比例的混合溶液与DNAzyme反应液混合，得到标准品溶液；配制含rAG底物的溶液，不加入DNAzyme反应液，作为空白对照溶液；空白对照溶液中的rAG底物的浓度与标准品溶液中的混合底物浓度相等；3CHA扩增反应将标准品溶液在一定条件下进行切割反应；然后加入CHA反应液，进行CHA扩增反应，检测荧光强度；将空白对照溶液与CHA反应液混合，进行CHA扩增反应，检测荧光强度；4建立标准曲线计算空白对照溶液检测所得的荧光强度与标准品溶液检测所得的荧光强度差值，以荧光强度差值和rm6AG底物占比为坐标，建立标准曲线；5甲基化修饰水平检测将该标准曲线用于检测待测样品的RNA甲基化修饰水平。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 贵州大学 基于DNAzyme催化介导恒温扩增技术的RNA甲基化修饰检测方法

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