申请/专利权人：南京林业大学

申请日：2020-01-19

公开（公告）日：2023-12-29

公开（公告）号：CN112210586B

主分类号：C12Q1/34

分类号：C12Q1/34;G01N21/75;G01N21/31;G01N21/64

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2023.12.29#授权;2021.01.29#实质审查的生效;2021.01.12#公开

摘要：本发明公开了一种检测凋落物β‑葡萄糖醛酸苷酶活性的方法，涉及凋落物酶活性检测的技术领域。该方法包括以下步骤：1在凋落物碎屑中加入培养缓冲液，低温孵育，离心收集滤液，进一步稀释得到酶活测试液；并制备灭活对照酶液；2制作MUB浓度与吸光值之间关系的标准曲线；3将酶活测试液和灭活对照酶液分别添加到酶活测试孔和阴性孔，然后加入4‑MUB‑β‑D‑葡萄糖醛酸苷工作液，避光震荡孵育，反应结束后加入终止液终止反应，在检测条件下，读取荧光值；4根据标准曲线，计算β‑葡萄糖醛酸苷酶比酶活。本发明酶液耗量少、操作强度小；灵敏度呈数量级提高；且测试液pH对上机数据没有影响，能够真实反映凋落物中酶活性。

主权项：1.一种检测凋落物β-葡萄糖醛酸苷酶活性的方法，其特征在于，包括以下步骤：1在待测凋落物碎屑中加入培养缓冲液，低温孵育，离心收集滤液，进一步稀释得到酶活测试液；2取部分酶活测试液高温灭活，制得灭活对照酶液；3制作MUB浓度与吸光值之间关系的标准曲线；4将酶活测试液和灭活对照酶液分别添加到酶活测试孔和阴性孔，然后加入4-MUB-β-D-葡萄糖醛酸苷工作液，避光震荡孵育，反应结束后加入终止液终止反应，在检测条件下，读取荧光值；5根据标准曲线，计算β-葡萄糖醛酸苷酶比酶活＝A测-A对*Fb*t*m，式中，A测为酶活测试孔的吸光值，A对为阴性孔的吸光值，F为酶活力孔中所加入的酶活测试液的稀释因子，b为标准曲线的斜率，t为避光震荡孵育时间，m为凋落物的干重；步骤1中，所述培养缓冲液的制备方法为：将6.05gTris、7.8g马来酸、7.0g柠檬酸或7.65g一水柠檬酸、3.12g硼酸和244mL1M氢氧化钠，用去离子水定容至250mL制备得到缓冲液原液；再将100mL所述缓冲液原液用盐酸调至pH4.5，用去离子水定容至1000mL，灭菌后4℃备用；所述凋落物碎屑与培养缓冲液的比例为0.15g:600μL；步骤4中，检测条件为：激发光波波长364nm，发射光波波长450nm，滑动宽度为5nm，收集时间为0.5s；所述待测凋落物的制备方法为：采集刚自然脱落的植物器官组织，杀青烘干，放入分解袋中，距离植物主干1m埋入并用原表层0-10cm土壤覆盖并轻轻压实，埋藏至预设时间后，取出，去掉泥沙杂质，即为待测凋落物。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 南京林业大学 一种检测凋落物β-葡萄糖醛酸苷酶活性的方法

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