申请/专利权人：湖南农业大学

申请日：2020-08-26

公开（公告）日：2024-01-23

公开（公告）号：CN114113349B

主分类号：G01N30/02

分类号：G01N30/02;G01N30/06;G01N30/34;G01N30/86

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.01.23#授权;2022.03.18#实质审查的生效;2022.03.01#公开

摘要：本发明公开了一种基于二维液相色谱‑紫外衍生法同时测定生物基质中5种氨基酸类神经递质的方法，将生物样本进行柱前衍生预处理，得到待测溶液，所述待测溶液通过二维液相色谱系统检测并定量分析5种氨基酸类神经递质目标物，该方法实现了二维液相色谱对多组分的同时快速检测，具有进样体积大、分辨率高、峰形好且不受其他内源胺影响等优点，适用于内源性生物样品中天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、牛磺酸和γ‑氨基丁酸的定性定量检测。

主权项：1.一种基于二维液相色谱-紫外衍生法同时测定生物基质中5种氨基酸类神经递质的方法，其特征在于：将生物样本进行柱前衍生预处理得到待测溶液，所述待测溶液通过二维液相色谱系统检测并定量分析天冬氨酸、谷氨酸、甘氨酸、牛磺酸和γ-氨基丁酸5种氨基酸类神经递质目标物；所述二维液相色谱系统检测条件为：一维色谱柱（萃取柱）：SNCB50mm*4.6mm*5μm柱；二维色谱柱（分析柱）：SBR3200mm*4.6mm*5μm柱；进样体积：100~200µL；流速：0.8~1.2mLmin；柱温：38~42℃；流动相：A泵：水相为0.02molL、pH=6.8~6.9的磷酸二氢钠和磷酸氢二钠缓冲液，有机相为甲醇-乙腈；水相和有机相体积比为2~3:1；C泵:流动相由甲醇和0.02molL、pH=6.8~6.9的磷酸二氢钠和磷酸氢二钠缓冲溶液按体积比15~20:85~80组成；A泵的梯度洗脱程序：从目标物转移到二维色谱柱时开始；1~5min，水相由71vol%匀速降至55vol%；5~13min，水相保持55vol%；13~18min，水相匀速升至71vol%；UV检测器472~482nm；所述生物样本为猪血浆、羊血浆、大鼠血清、猪脑组织或大鼠脑组织；猪血浆、羊血浆及大鼠血清的柱前衍生预处理方法为：将猪血浆、羊血浆或大鼠血清与乙腈生理盐水混合物混合，在冷冻条件下，进行离心处理，取上层清液进行衍生处理，在上层清液中依次加入四硼酸钾溶液和NBD-F乙腈溶液，在55~65℃温度下振荡混匀8~12min，冷却后，再加入Mili-Q水，混匀得到待测溶液；猪脑组织或大鼠脑组织的柱前衍生预处理的方法：将猪脑组织或大鼠脑组织与冷冻生理盐水进行均质处理，所得均质液与PBS-乙腈混合液涡旋混合后，在冷冻条件下，进行离心处理，取上层清液进行衍生处理，在上层清液中依次加入四硼酸钾溶液和NBD-F乙腈溶液，在55~65℃温度下振荡混匀8~12min，冷却后，在加入Mili-Q水，混匀得到待测溶液。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 湖南农业大学 一种基于二维液相色谱-紫外衍生法同时测定生物基质中5种氨基酸类神经递质的方法

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