申请/专利权人：江南大学

申请日：2022-07-01

公开（公告）日：2024-01-26

公开（公告）号：CN115074322B

主分类号：C12N5/0775

分类号：C12N5/0775;C12P21/00;C07K1/34;A61L27/38;A61L27/22;A61L27/20;A61L27/60

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.01.26#授权;2022.10.11#实质审查的生效;2022.09.20#公开

摘要：本发明公开了一种高效获取多种生物活性功能因子的鼻黏膜外胚层间充质干细胞三维培养方法，属于干细胞及生物材料组织工程领域。本发明提供的间充质干细胞三维悬浮培养的方法大大提高培养基内的种子细胞数量，相比二维贴壁培养增加了3‑5，而且三维悬浮培养的细胞可长期维持干细胞特性，在体外扩增10代以上不发生明显老化和分化。进一步的，本发明在培养基内加入透明质酸，通过激活CD44受体，刺激细胞分泌各种生物活性功能因子。在培养基内加入干细胞生长因子以及抗氧化剂，以促进干细胞增殖并维持细胞的干性，以利于将细胞球打散后传代扩增。在细胞传代时收集每代细胞的条件培养基，用于获取该细胞分泌的多种生物活性功能因子。

主权项：1.一种鼻黏膜外胚层间充质干细胞培养的方法，其特征在于，所述方法为将鼻黏膜外胚层间充质干细胞接种于含有培养基的培养瓶中进行悬浮培养，每天向培养基中加入添加剂，3~7天更换一次培养基，当细胞成团且细胞团直径为0.5~1.5mm时，进行细胞传代；所述培养基的组成为基础培养基、抗生素、缓冲剂和添加剂；所述基础培养基为高糖DMEM和F12；所述抗生素为青霉素和链霉素；所述缓冲剂为HEPES；所述添加剂为2-10mgml透明质酸、10-50ngmlEGF、5-20ngmlbFGF、100-500μgml维生素C、50-200μgml还原型谷胱甘肽、1-5mML丙酮酸、1-5mML谷氨酰胺和1-5mML非必需氨基酸。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江南大学 一种高效获取多种生物活性功能因子的鼻黏膜外胚层间充质干细胞三维培养方法

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