申请/专利权人：广南药王谷生物科技有限公司

申请日：2023-01-18

公开（公告）日：2024-01-26

公开（公告）号：CN116235779B

主分类号：A01H4/00

分类号：A01H4/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.01.26#授权;2023.06.27#实质审查的生效;2023.06.09#公开

摘要：本发明提供一种梳唇石斛外植体原球茎快繁方法，涉及植物组织培养技术领域。该梳唇石斛外植体原球茎快繁方法，包括以下步骤：S1、外植体预处理：外植体母本选择和外植体无菌消毒；S2、原球茎诱导培养：通过诱导培养基进行培养，获得原球茎；S3、原球茎增殖和分化培养：原球茎分切并移入增殖分化培养基培养，获得大量原球茎及丛生苗，原球茎继续重复本步骤，丛生苗进行生根培养。通过降低组织培养污染率的同时提高了梳唇石斛原球茎诱导率和增殖率，降低了培养成本，调高了培养效率，有效地保护梳唇石斛种质资源的同时，稳定保护了优良母本性状，提高了梳唇石斛无性系育苗和工厂化生产效率。

主权项：1.一种梳唇石斛外植体原球茎快繁方法，其特征在于：包括以下步骤：S1、外植体预处理：选取野外生长3-4年、性状优良的梳唇石斛植株作为母本，在9月采集丰满、肥壮的枝条，用清洁吸水纸包裹保存，再把采集的外植体枝条去叶剥去覆盖枝条外膜，用洗涤剂清洗后清水冲洗5-10分钟，低温处理后进行切断，一个芽点为一段，最后在无菌环境中，用75％的乙醇溶液浸泡30-60s，无菌水清洗1-4次，然后用含吐温20的次氯酸钠浸泡4-8min，无菌水清洗3-5次，重复1-2次后备用，所述低温处理为放冰柜在2-5℃环境冷藏12-16小时，所述含吐温20的次氯酸钠溶液，包含有体积浓度0.01％-0.1％的吐温20，次氯酸钠溶液浓度为0.1％-0.15％；S2、原球茎诱导培养：将S1步骤中处理后的外植体放入诱导培养基中，在20-25℃的环境中进行培养，暗培养7天后，在光照强度1500-3000Lux，光照周期6h天，培养45-50天，获得原球茎，所述诱导培养基由以下质量体积浓度的组分组成：12MS基本培养基、1mgL6-BA、0.3mgLNAA、0.3-1gL松树皮提取物、30gL马铃薯、30gL糖、6.7gL琼脂粉；所述培养基pH值为5.8-6.0；S3、原球茎增殖和分化培养：将S2步骤中获得的原球茎分切并移入增殖分化培养基中，在20-25℃的环境中进行培养，并且于光照强度2000-4000Lux，光照周期6-10h天，培养30-35天，获得大量的原球茎及丛生苗，原球茎继续重复本步骤，丛生苗进行生根培养，所述增殖分化培养基由以下质量体积浓度的组分组成：12MS基本培养基、0.6-1.2mgL6-BA、0.3mgLNAA、0.5-2.0gL松树皮提取物、0.5-1.0gL水解酪蛋白、30gL糖、6.7gL琼脂粉；所述培养基pH值为5.8-6.0。

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