申请/专利权人：华南农业大学

申请日：2021-09-22

公开（公告）日：2024-01-30

公开（公告）号：CN113913382B

主分类号：C12N5/079

分类号：C12N5/079;C12Q1/02;C12R1/91

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.01.30#授权;2022.01.28#实质审查的生效;2022.01.11#公开

摘要：本发明公开了一种金钱鱼脑细胞的体外培养方法，包括金钱鱼脑组织获取，消化分离脑细胞，再进行原代培养和传代培养成功获得了一株金钱鱼脑的细胞系。所述金钱鱼脑细胞5天可以铺满瓶，每7天传代一次，现在已经传至20代。培养获得的金钱鱼脑细胞在L15培养基中生长最好，在25℃～30℃之间生长较快。细胞生长速度随着血清浓度5～20％的升高而增加，血清浓度为15％和20％时生长最快，血清浓度低至5％时细胞生长缓慢。本发明金钱鱼脑细胞系的成功构建为金钱鱼基因功能和金钱鱼病毒病等的研究提供平行性好、可精准控制条件的实验材料。

主权项：1.一种金钱鱼脑细胞的体外培养方法，其特征在于，包括如下步骤：S1.原代培养：取健康金钱鱼，消毒后，取出脑组织于漂洗培养液中浸泡除菌，反复漂洗后吸去培养液后加入1mL0.25%胰酶，切碎，再加1mL0.25%胰酶室温消化至少30min，将消化后的细胞过滤，取滤液，1400～1600rpm离心8～12min，去上清，用原代细胞培养液重悬沉淀，移入培养瓶中，28℃培养，每2～4天按半量换液方式更换培养液；所述漂洗培养液为添加有400IUmL青霉素、400μgmL链霉素、500μgmL制霉菌素及2.66gmL氯化钠的L15培养基；所述原代细胞培养液为添加有400IUmL青霉素、400μgmL链霉素、500μgmL制霉菌素、2.66gL氯化钠和20%FBS的L15培养基；S2.传代培养：原代细胞生长至铺满单层后，用0.25%胰酶在室温下消化2～3min，加入原代细胞培养液吹下贴壁细胞，将细胞悬液接种于培养瓶中进行传代培养；当细胞传至第5代时，将原代细胞培养液中FBS浓度降低到15%，抗生素浓度调整至200IUmL青霉素、200μgmL链霉素、250μgmL制霉菌素；当细胞传至第7代时，将原代生长培养液中FBS浓度降低到10%，抗生素浓度调整至100IUmL青霉素、100μgmL链霉素、125μgm制霉菌素。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 华南农业大学 一种金钱鱼脑细胞的体外培养方法

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