申请/专利权人：沈阳农业大学

申请日：2020-01-17

公开（公告）日：2024-01-30

公开（公告）号：CN111235214B

主分类号：C12Q1/06

分类号：C12Q1/06;C12R1/645

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.01.30#授权;2020.06.30#实质审查的生效;2020.06.05#公开

摘要：本发明提供一种芸薹根肿菌孢子活体定量检测方法，包括：1取罹病的十字花科植物的根组织样品，制备孢子提取液；2通过血球计数法获得孢子浓度，用酶标仪测定孢子提取液的吸光值，以吸光值为横坐标，孢子浓度对数为纵坐标，建立吸光值与孢子浓度相关性的数学模型；3用待测根组织样本替换步骤1的根组织样品，采用相同方法制备孢子提取液，测定吸光值，代入步骤2所建数学模型中，从而得到孢子浓度。本发明提供一种简便、准确的根肿菌孢子活体定量体系，优化了活体接种方案，可广泛用于根肿菌的人工接种试验、成灾致害规律探索、生理小种鉴定、不同类型药剂防治效果评价等活体研究，为十字花科作物根肿病的防控提供技术支持。

主权项：1.芸薹根肿菌孢子活体定量检测方法，其特征在于，包括以下步骤：A、基于孢子粗提液建立数学模型①用无菌水冲洗去除罹病的十字花科植物的根组织样品表面的土壤及杂质，用70％乙醇表面消毒1-3分钟后，无菌水再次冲洗，擦干表面水分；按照根、水1g：6mL的比例，将根组织样品和无菌水放入榨汁机内榨汁1-3分钟，所得榨汁液用3-5层无菌纱布过滤，得到孢子粗提液作为孢子提取液；榨汁机的功率为450W，以26000转分的转速榨汁；②通过血球计数法获得孢子提取液的孢子浓度，并利用酶标仪或分光光度计在波长600nm条件下测定孢子提取液的吸光值，以吸光值为横坐标，孢子浓度对数值为纵坐标，建立吸光值与孢子浓度相关性的数学模型；B、基于孢子悬浮液建立数学模型③用无菌水冲洗去除根组织样品表面的土壤及杂质，用70％乙醇表面消毒1-3分钟后，无菌水再次冲洗，擦干表面水分；按照根、水1g：6mL的比例，将根组织样品和无菌水放入榨汁机内榨汁1-3分钟，所得榨汁液用3-5层无菌纱布过滤，得到孢子粗提液；榨汁机的功率为450W，以26000转分的转速榨汁；将150-200mL孢子粗提液于4℃，1500-2000rpm离心10-15min，弃上清；将沉淀与5mL40％蔗糖或葡萄糖溶液混合，震荡悬浮，然后4℃，3000-4000rpm离心10-15min；将上清液与无菌水混合至15-20mL，震荡悬浮，然后4℃，3000-4000rpm离心10-15min，弃上清；将沉淀与5mL无菌水混合，震荡悬浮，然后4℃，3000-4000rpm离心10-15min，弃上清；将沉淀与1mL无菌水混合，震荡悬浮，得到孢子悬浮液作为孢子提取液；④通过血球计数法获得孢子提取液的孢子浓度，并利用酶标仪或分光光度计在波长600nm条件下测定孢子提取液的吸光值，以吸光值为横坐标，孢子浓度对数值为纵坐标，建立吸光值与孢子浓度相关性的数学模型；C、对步骤A和B所建数学模型进行拟合，得到适用于两种类型样品的通用数学模型y＝0.5853lnx+7.7540，R2＝0.9717；D、用待测根组织样本替换步骤A或步骤B的根组织样品，采用与步骤A或步骤B相同的方法制备孢子提取液，并利用酶标仪或分光光度计测定孢子提取液的吸光值，代入步骤C所建通用数学模型中，从而得到孢子浓度。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 沈阳农业大学 芸薹根肿菌孢子活体定量检测方法

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD