申请/专利权人：吉林医药学院

申请日：2021-07-16

公开（公告）日：2024-01-30

公开（公告）号：CN114177306B

主分类号：A61K47/62

分类号：A61K47/62;A61K47/69;A61K31/704;A61P35/00;A61K49/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.01.30#授权;2022.04.01#实质审查的生效;2022.03.15#公开

摘要：本发明是一种iNGRR9双重功能肽修饰的阿霉素靶向脂质体，结构包括盐酸阿霉素脂质体、肿瘤靶向肽iNGR和细胞穿膜肽R9三部分，采用迈克尔加成反应合成了iNGR或R9偶连的PEG‑DSPE功能性支链，采用薄膜分散法‑硫酸铵梯度法制备iNGRR9双重修饰的盐酸阿霉素靶向脂质体，具有更好的缓释能力与靶向能力，增加了盐酸阿霉素高效进入肿瘤组织细胞并加强了对肿瘤细胞生长的抑制能力。iNGRR9双重功能肽修饰的阿霉素主动靶向脂质体具有更好的主动靶向性，能有效的降低盐酸阿霉素对正常组织和细胞造成的毒性伤害，降低副作用。

主权项：1.一种iNGRR9双重修饰的阿霉素靶向脂质体，其特征在于，结构包括盐酸阿霉素脂质体、肿瘤靶向肽iNGR和细胞穿膜肽R9三部分，采用迈克尔加成反应合成iNGRR9偶联的PEG-DSPE功能性支链，采用薄膜分散法-硫酸铵梯度法制备iNGRR9双重功能肽修饰的盐酸阿霉素靶向脂质体，制备方法：a.按质量比取磷脂：胆固醇：DSPE-PEG2000-iNGR和DSPE-PEG2000-R9＝20:5:1:1溶于氯仿中，在45℃下用旋转蒸发仪减压蒸馏40min，形成脂膜；加入300mM硫酸铵，水浴超声水化30min，以形成脂质体；用小型的脂质体挤出机过孔径100nm聚碳酸脂膜挤出20次以控制粒径，即可制得iNGRR9双重肽修饰的空白脂质体，密封置于4℃保存备用；b.将R9iNGR双重肽修饰的空白脂质体过葡聚糖凝胶G-50柱：预先用含有150mMNaCl的20mMHepes，其为pH＝7.4的HBS缓冲液，并作为洗脱液置换脂质体外部的硫酸铵，使脂质体内外产生硫酸铵梯度及pH梯度；c.按照药脂质量比为1:20精密称取盐酸阿霉素和过柱后的空白脂质体、混匀，置于50℃恒温水浴锅孵育60min，即可得到iNGRR9双重肽修饰的盐酸阿霉素靶向脂质体；所述的肿瘤靶向肽iNGR的制备方法为：由iNGR和DSPE-PEG2000-MAL使用一步合成法合成：DSPE-PEG2000-MAL与半胱氨酸修饰的iNGR，即C-iNGR，以摩尔比1:1混合溶于Hepes缓冲液中，反应液在4℃及氮气保护下温和搅拌24小时，反应过程中要避光；将所得到的反应液置于透析袋在水中透析48h，每2h换一次水，之后将反应液于冷冻干燥机中预冻24h，同时顶部扎有小孔，再抽干48h即可；所述Hepes缓冲液的参数为：pH＝7.2，20mMHepes，并经过超声30min除氧处理；所述细胞穿透肽R9的制备方法为：由半胱氨酸修饰的R9，即C-R9，和DSPE-PEG2000-MAL使用一步合成法合成：DSPE-PEG2000-MAL与C-R9以摩尔比1：1混合，溶于Hepes缓冲液中；反应液在4℃及氮气保护下温和搅拌24小时，反应过程中要避光；将所得到的反应液置于透析袋在去离子水中透析48小时，每2h换一次水，以除去游离C-R9；反应完成之后透析并冻干即得；所述Hepes缓冲液的参数为：pH＝7.2，20mMHepes，并经过超声30min脱氧，N2流除氧40min处理。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 吉林医药学院 一种iNGR/R9双重修饰的阿霉素靶向脂质体及抗肿瘤活性评价

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