申请/专利权人：深圳市瑞格生物科技有限公司;深圳市儿童医院

申请日：2022-10-18

公开（公告）日：2024-02-02

公开（公告）号：CN115561468B

主分类号：G01N33/68

分类号：G01N33/68;G01N33/574;G01N33/53

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.02#授权;2023.01.20#实质审查的生效;2023.01.03#公开

摘要：本发明提供了一种评估患有肿瘤或特定肿瘤风险的方法，属于肿瘤标志物技术领域。本发明提供的用于非诊断目的的评估患有肿瘤风险的方法，包括如下步骤：以循环杂合细胞为标志物，检测外周血样本中是否含有所述标志物；所述标志物数目越多，则表明肿瘤恶性程度越高。本发明以个体的外周血作为单一检测样本，以CTCs为辅助诊断标志物，以循环杂合细胞CHCs为核心诊断标志物，检测个体外周血中的上述标志物，能够准确的对肿瘤的发展进程进行评估。进一步的，在个体外周血中检测到目的标志物CTCs与CHCs后，针对ES、RMS、NB三种肿瘤设计对应的抗体组合，利用免疫荧光技术实施一点多靶的检测，能够有效降低误诊率与漏诊率。

主权项：1.一种利用免疫荧光技术进行一点多靶检测的肿瘤风险评估产品，其特征在于，所述肿瘤包括尤文肉瘤、横纹肌肉瘤和神经母细胞瘤；所述产品以循环杂合细胞CHCs和循环肿瘤细胞CTCs为标志物；所述产品包括以下模块：采样模块；所述采样模块用于获取外周血样本；标志物提取模块；所述标志物提取模块包括PBS溶液、CTCCHC分选仪及配套分离辅基芯片、96孔细胞培养板皿、4％组织固定液和荧光素标记的抗体；所述PBS溶液用于稀释外周血样本；所述CTCCHC分选仪及配套分离辅基芯片用于从稀释后的外周血样本收集目的细胞CTCs与CHCs；所述96孔细胞培养板皿用于细胞平铺和细胞贴壁；所述4％组织固定液用于固定细胞；所述荧光素标记的抗体用于在细胞固定后对其进行孵育，所述抗体包括CD45、CD99、NKX、MyoD1、Myogenin、GD2和PHOX2B，其中，CD45、CD99和NKX作为尤文肉瘤的抗体，CD45、MyoD1和Myogenin作为横纹肌肉瘤的抗体，CD45、GD2和PHOX2B作为神经母细胞瘤的抗体；标志物检测模块；所述标志物检测模块包括荧光显微镜子模块、标志物判定子模块、CTCs与CHCs数目统计子模块以及CTCs与CHCs浓度定量子模块；所述荧光显微镜子模块用于观察CTCs与CHCs；所述标志物判定子模块用于根据以下特征判定标志物：尤文肉瘤CTCs+为在循环肿瘤细胞CTCs中CD45阴性，CD99和NKX阳性；尤文肉瘤CHCs+为在循环杂合细胞CHCs中CD45、CD99和NKX均为阳性；横纹肌肉瘤CTCs+为在循环肿瘤细胞CTCs中CD45阴性，MyoD1和Myogenin阳性；横纹肌肉瘤CHCs+为在循环杂合细胞CHCs中CD45、MyoD1和Myogenin均为阳性；神经母细胞瘤CTCs+为在循环肿瘤细胞CTCs中CD45阴性，GD2和PHOX2B阳性；神经母细胞瘤CHCs+为在循环杂合细胞CHCs中CD45、GD2和PHOX2B均为阳性；所述CTCs与CHCs数目统计子模块用于统计CTCs与CHCs的数目；所述CTCs与CHCs浓度定量子模块用于根据铺板量计算患者外周血中的CTCs与CHCs的浓度；报告评估模块；所述报告评估模块以循环杂合细胞CHCs为核心诊断标志物，以CTCs为辅助诊断标志物，出现CHCs+，或出现CHCs+和CTCs+两者，对于初诊个体，则表明肿瘤恶性风险高；对于治疗中个体，则表明预后差；对于治疗后个体，则表明个体肿瘤复发。

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