申请/专利权人：浙江工业大学

申请日：2023-11-14

公开（公告）日：2024-02-13

公开（公告）号：CN117551595A

主分类号：C12N1/21

分类号：C12N1/21;C12N15/70;C12N15/31;C12P13/02;C12R1/19

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.03.01#实质审查的生效;2024.02.13#公开

摘要：本发明涉及生物工程技术领域，尤其涉及一种高产D‑泛酸的基因工程菌、构建方法及应用。本发明通过质粒表达全局转录调控因子筛选出发酵效果较好的IhfAB和cra；对IhfAB和cra第二密码子进行优化，并使用质粒表达进一步的验证优化结果，分解代谢阻遏剂活化剂cra改造后的发酵菌株在摇瓶发酵中生产D‑泛酸的水平相比于出发菌Dpan16S携带未改造质粒摇瓶发酵水平从2.49gL提高到3.17gL，整合宿主因子ihfAB经过优化的质粒摇瓶发酵较于未经过改造的质粒摇瓶发酵水平从3.46gL提高至3.78gL；随后将优化后cra和IhfAB导入到Dpan16S基因组中，经过摇瓶发酵验证后进一步的将D‑泛酸产量由3.82gL提升至4.13gL和4.05gL，证明本发明提供的重组大肠杆菌具有重要的工业应用价值。

主权项：1.一种高产D-泛酸的基因工程菌的构建方法，其特征在于，其构建方法包括以下步骤：1以菌株E.coliW3110Trc-panCTrc-panETrc-panBTrc-ilvCilvG*ΔavcAilvE*CoaA*ΔpoxBΔptaΔldhAΔplfBTrc-pykAilvN*ilvH*Trc-spoT*Trc-lpdTrc-ilvDΔlacI为底盘菌，敲除其基因组中的基因ptsG，并在此基因位点过表达基因galP和glK，得到工程菌E.coliW3110Trc-panCTrc-panETrc-panBTrc-ilvCilvG*ΔavcAilvE*CoaA*ΔpoxBΔptaΔldhAΔplfBTrc-pykAilvN*ilvH*Trc-spoT*Trc-lpdTrc-ilvDΔlacIΔptsG::Trc-glk-galP，记为Dpan16S；2将由Trc启动子控制的基因cra2LysAAA2AAGAsp101Arg,Asp148Arg,Gly274Arg或和基因InfABInfA2SerGCG2AGT整合至工程菌Dpan16S基因组上，从而得到所述高产D-泛酸的基因工程菌。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江工业大学 一种高产D-泛酸的基因工程菌、构建方法及应用

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