申请/专利权人：中国农业科学院油料作物研究所;南昌大学;天筛(上海)科技有限公司

申请日：2022-02-23

公开（公告）日：2024-02-13

公开（公告）号：CN114959090B

主分类号：C12Q1/6895

分类号：C12Q1/6895;C12Q1/6851;C12N15/11;C12M1/00;C12M1/34;C12M1/36

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.13#授权;2022.09.16#实质审查的生效;2022.08.30#公开

摘要：本发明提供一种植物免提取直接实时荧光快速PCR扩增稳定剂、PCR扩增组合物和PCR扩增方法，具体公开了一种植物免提取PCR反应的稳定剂，所述稳定剂包括MgCl2、牛血清白蛋白、吐温20和甜菜碱。还公开了一种植物免提取的PCR反应组合物，所述PCR反应组合物包含快速扩增组合物、正向引物、反向引物、探针、所述植物免提取PCR反应的稳定剂。本发明直接以植物叶片作为模板，无需破碎组织以及提取基因组DNA繁琐步骤和装置，与其它植物基因组DNA快速提取技术相比，无需PCR扩增前预处理。使得整个分析过程显著简化PCR分析流程、缩短分析时间，有利于分子育种中单株叶片高效检测以及作物品系现场快速鉴定。

主权项：1.植物免提取的PCR反应组合物或植物免提取PCR的反应试剂盒在进行植物PCR中的应用，所述的植物PCR以未经DNA提取的植物部分为模板；所述植物免提取的PCR反应组合物包含快速扩增组合物25μL、正向引物2μL、反向引物2μL、探针1μL、植物免提取PCR反应的稳定剂20μL，PCR反应组合物为50μL；快速扩增组合物包含0.4mMdNTPs、0.4mMdUTP、5mMMg2+、DNA聚合酶和尿嘧啶DNA糖基化酶；所述植物免提取PCR反应的稳定剂为MgCl2、牛血清白蛋白、吐温20和甜菜碱的组合；所述稳定剂中各组分的浓度为0.8mMMgCl2、0.08mM牛血清白蛋白、0.1％吐温20和0.5mM甜菜碱；其中0.1％吐温20为质量浓度百分比；所述的植物部分为油菜种子发芽后的下胚轴；所述反应试剂盒包含植物免提取的PCR反应组合物。

全文数据：

权利要求：

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