申请/专利权人：河南普华基因科技有限公司

申请日：2022-03-05

公开（公告）日：2024-02-23

公开（公告）号：CN114591885B

主分类号：C12N5/071

分类号：C12N5/071;C12N1/36;C12N7/00

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.02.23#授权;2022.06.24#实质审查的生效;2022.06.07#公开

摘要：本发明属于细胞培养技术领域，具体涉及一种适应无血清悬浮培养的LLC‑PK1Sa细胞驯化方法和应用。本发明涉及的细胞悬浮驯化方法主要指逐步降血清和逐步增加悬浮培养基相结合的方法，最终获得无血清悬浮培养型LLC‑PK1Sa细胞，同时本发明提供了无血清悬浮培养LLC‑PK1Sa细胞在生产猪丁型冠状病毒中的应用。应用该细胞增殖的病毒滴度高，稳定性好，可显著降低生产成本，有利于规模化生产，具有良好的市场前景。

主权项：1.一种适应无血清悬浮培养的LLC-PK1Sa细胞驯化方法，其特征在于，包括以下步骤：（1）驯化培养：将贴壁生长的LLC-PK1细胞使用MEM培养基重悬，稀释，添加灭活的胎牛血清和悬浮培养基，传代培养5～8代，直至细胞适应生长；重复该驯化步骤4～5次；驯化培养过程中，灭活的胎牛血清的添加量从体积比5%降至0%，每次降低1%～2%，悬浮培养基的添加量从体积比0%增至100%，每次增加20%～40%；传代培养时，按照自然沉降法、离心法和有限稀释法的顺序每2代更换一次传代培养方法；（2）单克隆细胞株筛选：将步骤（1）培养得到的细胞置于96孔细胞培养板培养，待细胞密度达到80～90%时，转移至6孔细胞培养板培养；然后转移至摇瓶中培养，连续传代20代，筛选生长最佳的细胞株即为LLC-PK1悬浮细胞，命名为LLC-PK1Sa细胞；细胞适应生长的判定指标为：细胞密度大于1.5×106cellsmL，活率≥95%。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 河南普华基因科技有限公司 一种适应无血清悬浮培养的LLC-PK1Sa细胞驯化方法和应用

免责声明
1、本报告根据公开、合法渠道获得相关数据和信息，力求客观、公正，但并不保证数据的最终完整性和准确性。
2、报告中的分析和结论仅反映本公司于发布本报告当日的职业理解，仅供参考使用，不能作为本公司承担任何法律责任的依据或者凭证。

阅读全文 双屏查看 官方信息 专利公告 收藏专利 下载PDF 下载WORD