申请/专利权人：昆明学院

申请日：2022-09-28

公开（公告）日：2024-04-23

公开（公告）号：CN117603904B

主分类号：C12N5/077

分类号：C12N5/077;C12N5/0775;C12N5/00;A61L27/38

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.04.23#授权;2024.03.15#实质审查的生效;2024.02.27#公开

摘要：本发明公开了一种脂肪细胞球及其制备方法和应用，所述方法步骤如下：将具备成脂分化潜能的细胞血浆混悬液接种于细胞培养板或者parafilm薄膜上，接种后维持悬液为液滴状；再将液滴置于容器中密封，先冷藏然后冷冻再解冻，制备得到冻融的成脂细胞液滴，此时可观察到液滴成胶状凝固；在滴凝胶上加入具备成脂分化潜能的细胞进行培养；最后在脂肪细胞分化培养基或者扩增培养基中培养，连续培养至需要的组织块大小后得到脂肪细胞球。本发明提供的脂肪细胞球可由自体来源成分制备获得，有利于体内的细胞整合；避免了免疫排斥反应和病毒传播，有良好的安全性；脂肪细胞球可三维支撑细胞的增殖和分化。

主权项：1.一种脂肪细胞球的制备方法，其特征在于，包括以下步骤：步骤1培养扩增具备成脂分化潜能的细胞，将扩增后的细胞重悬于3～10倍体积的血浆中，混合均匀，制备得到细胞混悬液；所述具备成脂分化潜能的细胞选自脂肪前体细胞、间充质干细胞、脂肪母细胞和具备成脂分化潜能和增殖能力的间质类细胞中的一种或几种；步骤2将细胞混悬液按照每个液滴10～500μL的体积，接种于细胞培养板或者parafilm薄膜上；接种后维持悬液为液滴状；步骤3将液滴置于容器中密封，先冷藏然后冷冻再解冻，制备得到冻融的细胞液滴，此时可观察到液滴成胶状凝固；所述先冷藏然后冷冻再解冻的具体过程如下：密封后的液滴转移至2～8℃放置10～60分钟；迅速转移至-60～-80℃冰箱，8～24小时后取出，转移至36-38℃解冻，继续转移至2～8℃放置；上述过程重复3～5次；步骤4在步骤3冻融的细胞液滴凝胶上，加入具备成脂分化潜能的细胞进行培养；所述具备成脂分化潜能的细胞接种密度为0.1～1×106cm2，细胞接种后维持凝胶不完全干燥，静置10-60分钟；步骤5将步骤4的细胞体系在脂肪细胞分化培养基或者扩增培养基中培养，间隔3～6天进行一次换液，连续培养至需要的组织块大小后，进行检测，得到脂肪细胞球；所述脂肪细胞分化培养基成分如下：包含8-12wt％FBS、0.8-1.5μM地塞米松、8-15mgL胰岛素、0.3-1.0mMIBMX和100-300μM吲哚美辛的高糖DMEM培养基；所述扩增培养基培养为包含8-12wt％FBS的高糖DMEM培养基或者低糖DMEM培养基。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 昆明学院 一种脂肪细胞球及其制备方法和应用

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