申请/专利权人：天津大学

申请日：2022-08-18

公开（公告）日：2024-03-01

公开（公告）号：CN117625554A

主分类号：C12N7/00

分类号：C12N7/00;A01N63/40;A01P13/00

优先权：

专利状态码：在审-公开

法律状态：2024.03.01#公开

摘要：本发明提供一种确定高效裂解性噬藻体YongM侵染藻细胞最佳条件的方法，包括下述步骤：念珠藻Nostocsp.FACHB‑596的培养、噬藻体YongM的活化和扩大培养、噬藻体裂解液制备、噬藻体YongM侵染藻种的筛选、确定噬藻体YongM侵染藻细胞的最佳添加量、确定噬藻体YongM侵染藻细胞的最佳光照条件和确定噬藻体YongM侵染藻细胞的最佳氮源浓度。通过本发明方法确定了噬藻体YongM侵染藻细胞的最佳条件，包括噬藻体YongM添加量、光照条件和氮源浓度，该方法为未来采用噬藻体治理因蓝藻造成的水体富营养化难题提供技术支持。

主权项：1.一种确定高效裂解性噬藻体YongM侵染藻细胞最佳条件的方法，其特征在于：按照下述步骤进行：1念珠藻Nostocsp.FACHB-596的培养取5mL念珠藻Nostocsp.FACHB-596的藻液，以1∶100的体积比稀释至装有500mLBG11液体培养基的锥形瓶中，放置于温度25℃，光照强度为2500Lux，光暗周期为12∶12h的光照培养箱中10天，即可得到生长对数期、吸光度为0.6的FACHB-596藻液；2噬藻体YongM的活化和扩大培养制备浓缩藻液：取步骤1所得生长对数期、吸光度为0.6的FACHB-596藻液，8000g离心10min，保留相当于原体积的120-140的上清液悬浮沉淀，即得到浓缩FACHB-596藻液；将含有噬藻体的感染液用BG11液体培养基做系列梯度稀释成10-1-10-6，取各稀释度的稀释液按体积比1∶3的比例添加到3mL上述浓缩FACHB-596藻液中，混匀，置于转速70rpm摇床中，在光照强度2500Lux，光暗周期12∶12h，25℃下孵育，使病毒充分吸附到藻细胞，重复操作至上述感染液加入到上述浓缩藻液后24h内，藻液发生明显黄化现象为止，即得到已黄化的藻液；将上述已黄化的藻液12000g离心10min，取上清液，即得到已活化的噬藻体YongM，取上述已活化好的噬藻体YongM的悬浮液50mL按照1∶10的比例添加到步骤1新鲜培养的生长对数期的FACHB-596藻液中，混匀，光照培养箱中培养24h后藻液黄化，如此重复扩大培养，即得到噬藻体-藻共培养裂解液；3噬藻体裂解液制备取步骤2制备的噬藻体-藻共培养裂解液经12000g，4℃离心10min，取上清液，依次经过0.45μm、0.22μm孔径硝酸纤维素滤膜过滤，即为噬藻体YongM裂解液；4噬藻体YongM侵染藻种的筛选取步骤3制备的噬藻体YongM裂解液浓缩至浓度为1×107pfumL加入至铜绿微囊藻905、华美微囊藻916以及念珠藻596三种吸光度均为0.40的蓝藻中，充分混合，每隔6个小时检测藻液的吸光度、观察藻液的颜色变化并在显微镜下观察藻细胞形态；5确定噬藻体YongM侵染藻细胞的最佳添加量取步骤3所得的噬藻体YongM裂解液浓缩至浓度为1×107pfumL，在无菌条件下，将50mL处于对数生长期的念珠藻，其吸光度为0.6，转移到100mL锥形瓶，加入灭活的噬藻体裂解液作为对照组，并分别加入1、2、5、10mL同一状态的裂解液作为实验组，使得实验组噬藻体与念珠藻的体积比分别为1∶50、2∶50、5∶50、10∶50，在温度为25℃，光照强度为2500lux，光暗比为12∶12的光照培养箱内培养，为防止念珠藻出现沉底或吸附瓶壁的现象，每天手动轻轻摇晃3-5次，每隔8h取样5mL藻液检测吸光度，并在抽滤后通过ELISA测定水体内微囊藻毒素浓度；5确定噬藻体YongM侵染藻细胞的最佳光照条件取步骤3所得的噬藻体YongM裂解液浓缩至浓度为1×107pfumL，取200mL对数生长期的念珠藻，在温度为25℃，光照强度为2500lux条件下培养，光照时长分别确定为全光照条件、全黑暗条件、12h光照12h黑暗条件，每天手动摇晃3-5次，每次取样15mL藻液检测吸光度，并在抽滤后通过ELISA测定培养基内微囊藻毒素浓度；6确定噬藻体YongM侵染藻细胞的最佳氮源浓度取步骤3所得的噬藻体YongM裂解液浓缩至浓度为1×107pfumL，取200mL对数生长期的念珠藻，在温度为25℃，光照强度为2500lux，光照时间为12h光照12h黑暗条件下培养，以NH4Cl、NaNO3为氮源分别控制培养体系的氮浓度为0、2、4、8、16mgL，每次取样15mL藻液检测吸光度，并在抽滤后通过ELISA测定培养基内微囊藻毒素浓度。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 天津大学 一种确定高效裂解性噬藻体YongM侵染藻细胞最佳条件的方法

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