申请/专利权人：浙江丰能医药科技有限公司

申请日：2021-01-25

公开（公告）日：2024-03-01

公开（公告）号：CN113049656B

主分类号：G01N27/327

分类号：G01N27/327;G01N27/48

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.01#授权;2024.02.20#专利申请权的转移;2024.01.02#专利申请权的转移;2021.07.16#实质审查的生效;2021.06.29#公开

摘要：本发明公开了一种具有高阶重复性及重现性的电化学快扫伏安方法及其分析应用，该方法呈现的数据形式具有明显的高阶重现性及重复性特点，在几百个周期的数据结果高度一致。通过改变TdT0.1～190UmL或PP0～9mM在混合反应液中的终浓度，采用FSCV对传感器进行测试，设置初始电位为0V，终止电位为1V，扫速设置为400Vs，基于此将该快扫方法应用于TdT及其小分子抑制剂的分析检测，具有灵敏度高、特异性强、分析时间短响应速度快、制备简单并且能够输出高阶重复性及重现性的电化学信号，可以很好地实现较低浓度的TdT活性分析，检测限分别为①0.067UmL、②0.1UmL，③0.067UmL和④0.1UmL，抑制剂检测IC50值分别为1.7mM、1.6mM、1.5mM和1.7mM，具有良好的应用前景。

主权项：1.一种具有高阶重复性及重现性的电化学快扫伏安方法TdT检测中的应用，其特征在于，具体步骤如下：步骤A传感器的制备1电极的前处理将直径为2mm的金电极依次用1μm、0.3μm、0.05μm的Al2O3粉末抛光成镜面，然后依次用水、无水乙醇超声洗涤2～10min，氮气吹干后将金电极于0.5MH2SO4溶液用循环伏安法扫描至稳定，最后再次用氮气吹干备用；2电化学生物传感器的制备电极1：将2～10μL浓度为3～10μM的巯基DNA滴加到处理过的金电极表面，置于4℃冰箱里过夜；在孵育完成后，轻轻淋洗电极表面以除去未结合的巯基DNA，之后，将该电极浸入浓度为0.5～2mM的2-巯基乙醇中0.5～3h，以封闭未结合上巯基DNA的活性位点；电极2：制备TdT反应混合液：0.05～0.3μL浓度为0.01UmL～20UμL的TdT酶溶液，0.5～2μL浓度为10mM的dTTP溶液，2～10μL的5×TdT缓冲液，和1～5μL的双蒸水，混合均匀后滴加到电极1上，将该电极置于37℃反应0.5～3h，形成poly-TDNA长链，用水冲洗掉残余的TdT反应试剂；电极3：将上述制备好的电极2置于100～200μL浓度为10-5MHg2+溶液离心管中，将该电极置于37℃下0.5～1h，以使Hg2+诱导poly-TDNA长链形成T-Hg2+-T结构，即得所述电化学生物传感器；步骤B根据步骤A中的方法，通过改变电极2制备步骤中TdT的浓度，制备系列电化学生物传感器；步骤C快速扫描循环伏安法检测将电极3作为工作电极，铂丝电极为对电极，AgAgCl电极为参比电极，置入pH＝7的PBS电解质溶液中，采用快速扫描循环伏安法，设置初始电位为-0.5～0V，终止电位为0.9～1.2V，电位扫描速度为50～400Vs；测定不同TdT浓度对应的电压峰值，建立电压响应与TdT之间的定量关系，根据两者之间的定量关系可以确定未知实际样品中的TdT含量。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 浙江丰能医药科技有限公司 一种具有高阶重复性及重现性的电化学快扫伏安方法及其分析应用

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