申请/专利权人：东北林业大学

申请日：2023-12-06

公开（公告）日：2024-03-08

公开（公告）号：CN117660293A

主分类号：C12N5/04

分类号：C12N5/04;A01H4/00

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.03.26#实质审查的生效;2024.03.08#公开

摘要：本发明公开了一种利用胚性细胞诱导水曲柳体细胞胚发生的方法，该方法选择以水曲柳胚性细胞为材料，通过均一化和增殖培养获得生长状态相同的水曲柳胚性细胞，所选培养基为WPM+60gL蔗糖+0.05‑1.0gL水解酪蛋白+6.0gL琼脂+1.5gL活性炭的培养基中；之后将胚性细胞转入水曲柳体细胞胚成熟培养基WPM+0.05‑0.2mgLNAA+1.0‑3.0mgLZT+0.05‑0.5mgLGA3+30gL蔗糖+6.0gL琼脂+1.5gL活性炭中进行培养，获得球形胚、心形胚、鱼雷型胚、子叶胚和成熟体胚，最后获得水曲柳苗。在胚性细胞均一化培养和体细胞胚成熟培养中，均可以采用固体培养法和固液混合培养法，该方法可以使90％胚性细胞发育成成熟体胚。本发明克服了水曲柳体胚诱导过程中材料单一并受季节限制的问题，同时减少了畸形胚的比例，为水曲柳优良品种规模化繁殖奠定基础。

主权项：1.一种利用胚性细胞诱导水曲柳体细胞胚发生的方法，其特征在于，包括如下步骤：1水曲柳胚性细胞：选择来自不同外植体茎段、下胚轴、子叶诱导的水曲柳胚性细胞；2水曲柳胚性细胞均一化和增殖培养：在无菌条件下，将水曲柳胚性细胞接种到均一化和增殖培养基中培养，所述的均一化和增殖培养基为：以WPM为基本培养基，添加60gL蔗糖、0.05-1.0gL水解酪蛋白、6.0gL琼脂和1.5gL活性炭，pH值为6.0-6.2，黑暗条件下，温度为25+2℃，培养4-8周，培养方式可以选择固体培养法或固液混合培养法；3水曲柳体细胞胚成熟培养：将2中均一化后的胚性细胞接种到体胚成熟培养基中，所述的体胚成熟培养基为：WPM+0.05-0.2mgLNAA+1.0-3.0mgLZT+0.05-0.5mgLGA3+30gL的蔗糖+6.0gL琼脂+1.5gL活性炭，pH值为6.0-6.2，弱光10μmol·m-2·s-1下培养5-8周，光周期12hd，培养方式可以选择固体培养法或固液混合培养法。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 东北林业大学 一种利用胚性细胞诱导水曲柳体细胞胚发生的方法

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