申请/专利权人：东北林业大学

申请日：2023-04-20

公开（公告）日：2024-01-26

公开（公告）号：CN116420620B

主分类号：A01H4/00

分类号：A01H4/00;A01H1/02

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.01.26#授权;2023.08.01#实质审查的生效;2023.07.14#公开

摘要：本发明公开了一种通过胚挽救获得水曲柳与白蜡种间杂交F1代的方法，选择赤峰地区的白蜡树作为父本，选择哈尔滨地区本土优良水曲柳作为母本，在5月初，对雌花进行套袋、人工授粉、摘袋，授粉后35d开始取样，果实表面消毒后扒掉果皮获得无菌胚珠，将胚珠接种在发育培养基中，置于25±2℃环境下，黑暗培养7‑8周，胚珠逐渐发育成熟，然后转移至弱光条件下培养，光照强度为10μmol·m‑2·s‑1，光周期12hd，温度25±2℃，子叶长出并转绿，对没有萌发的胚转入胚的二次萌发培养基中，光照强度为80μmol·m‑2·s‑1，子叶长出并转绿，将长出子叶的胚转移至幼苗生长培养基中，光照培养20‑25d，获得幼苗，该方法可以解决水曲柳与白蜡种间杂交中胚的畸形、幼胚败育、未成熟胚无法获得杂种植株等问题，对林木新品种选育具有重要的意义。

主权项：1.一种通过胚挽救获得水曲柳与白蜡种间杂交F1代的方法，其特征在于，包括如下步骤：1父本花粉的获取：父本选择赤峰地区的白蜡树，在4月下旬-5月初期间，观察雄花即将散粉时，采集白蜡花枝，温室水培，收集散落的花粉，4℃保存；2花粉活力检测：用FDA染色花粉后，在荧光显微镜下观察花粉活力；3母本的选择：选择哈尔滨地区本土优良水曲柳作为母本；4母本花枝套袋：在5月初，雌花花芽膨大到刚刚伸出时，用杂交袋套住花枝，最顶端的雌花与曲别针封口端保持3-5cm的距离时，将杂交袋开口端收紧后用绳子将杂交袋与枝条绑紧；5人工授粉：在雌花伸出3-5cm，柱头发亮时进行授粉，打开曲别针封口端，用毛笔蘸取有活力的花粉轻轻涂抹到雌花柱头上，授完粉后再用曲别针封好口，并将标有序号的吊牌挂在对应枝条上；6摘袋：待水曲柳雄花花粉完全散去后，一般为人工授粉完成后7-10d，将杂交袋摘下；7无菌胚珠的获取：授粉后35d开始取样，流水冲洗2-4h后转移至紫外消毒后的超净台中，在无菌条件下，对杂交果实进行消毒，先用75％酒精短暂浸泡果实10-15s，倒去废液，无菌水冲洗干净后用2％-3％NaClO溶液浸泡10-15min，倒去废液后用灭菌后的蒸馏水冲洗5次，每次3-5min，在超净工作台中用无菌镊子扒去杂交果实的果皮，获得无菌胚珠；8胚挽救离体培养：在无菌条件下，将7中的胚珠接种在发育培养基中，所述的发育培养基为WPM+60gL蔗糖+6gL琼脂+1.5gL活性炭+0.1-2.0mgL6-BA+0.5-2.0mgLKT+1.0-5.0mgLIAA+0.5-2.0mgLGA3，pH值为5.8-6.0，置于25±2℃环境下，黑暗培养7-8周，胚珠逐渐发育成熟；9胚的萌发培养：将8中培养的胚珠转移至弱光条件下培养，光照强度为10μmol·m-2·s-1，光周期12hd，温度25±2℃，培养10-15d，子叶长出并转绿；10胚的二次萌发培养：对9中没有萌发的胚，用刀在顶端切个斜口后转入胚的二次萌发培养基中，所述的胚的二次萌发培养基为WPM+30gL蔗糖+6gL琼脂+1.5gL活性炭+0.01-1.0mgL6-BA+0.05-0.5mgLNAA+0.01-1.0mgLZT+0.01-2.0mgLGA3，pH值为5.8-6.0，光照强度为80μmol·m-2·s-1，光周期12hd，温度25±2℃，培养10-15d，子叶长出并转绿；11幼苗培养：将9和10中长出子叶的胚转移至幼苗生长培养基中，所述的幼苗生长培养基为WPM+30gL蔗糖+6gL琼脂，pH值为5.8-6.0，光照强度为80μmol·m-2·s-1，光周期12hd，温度25±2℃，20-25d，获得幼苗；12幼苗移栽：当步骤11得到的幼苗长至2-3对复叶时从培养基中取出，清洗根部后移栽到育苗盘中，移栽基质为草炭土：蛭石：沙子＝2：1：1，透明盖子覆盖保湿，置于温室中培养，两周后揭开盖子。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 东北林业大学 一种通过胚挽救获得水曲柳与白蜡种间杂交F1代的方法

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