申请/专利权人：云南伦扬科技有限公司

申请日：2024-01-31

公开（公告）日：2024-03-12

公开（公告）号：CN117686711A

主分类号：G01N33/569

分类号：G01N33/569;G01N21/31

优先权：

专利状态码：在审-实质审查的生效

法律状态：2024.03.29#实质审查的生效;2024.03.12#公开

摘要：本发明涉及化学分析检测技术领域，具体为一种纳米酶结合适配体检测食品中大肠杆菌的方法。本发明采用多壁碳纳米管及磷钼酸修饰四氧化三铁，具有氧空位的优异过氧化酶模拟酶Fe3O4@MWCNTsMo。纳米酶对大肠杆菌（E.coli）的强抗菌作用，能将E.coli杀死。活E.coli细胞壁表面电荷为负，当E.coli死亡后，表面结构发生改变，Fe3O4@MWCNTsMo与E.coli亲和力增强，活性位点降低，过氧化物酶活性被抑制。Fe3O4@MWCNTsMo与大肠杆菌适配体的复合物氧化3,3',5,5'‑四甲基联苯胺（TMB）时，E.coli浓度与氧化型TMB（oxTMB）吸光度呈线性降低，建立E.coli检测新方法，检出限1CFUmL，检测时间仅需40min。本检测技术具有灵敏度高、特异性强、操作简单、快速等特点。

主权项：1.一种纳米酶结合适配体检测食品中大肠杆菌的方法，包括以下步骤：（1）将0.10-0.20g多壁碳纳米管（MWCNT）加入到30-50mL乙二醇和10-20mL聚乙二醇400的混合物中，再加入1.35-1.50gFeCl3·6H2O，1.35-1.50g乙酸钠和0.30-0.40g磷钼酸，搅拌1-2h；转移至聚四氟乙烯罐中，放入马弗炉，200℃下加热12-14h，冷却至室温，用纯净水和乙醇交替洗涤3次，得到具有磁性的纳米酶Fe3O4@MWCNTsMo；（2）大肠杆菌（E.coli）适配体与Fe3O4@MWCNTsMo在37℃恒温箱中孵育25-30min，制得纳米酶与适配体复合物；（3）分别在不同梯度浓度的E.coli中加入纳米酶与适配体复合物溶液，Na+和Mg2+的混合溶液，然后加入3,3',5,5'-四甲基联苯胺（TMB）溶液及H2O2，生成蓝色oxTMB，用pH4.0醋酸盐缓冲溶液定容至4mL，摇匀，静置5-10min，磁铁分离Fe3O4@MWCNTsMo，取上清液，测定吸光度，确定E.coli浓度与吸光度A的线性关系；（4）取含E.coli的待测样品液与纳米酶与适配体复合物溶液，加入Na+和Mg2+的混合溶液、TMB及H2O2溶液反应，磁铁分离，紫外光度计进行吸光度检测，根据吸光度计算待测样品液中E.coli浓度。

全文数据：

权利要求：

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