申请/专利权人：江苏省淡水水产研究所

申请日：2021-12-01

公开（公告）日：2024-03-12

公开（公告）号：CN114088943B

主分类号：G01N33/569

分类号：G01N33/569;G01N33/532;G01N33/543;G01N33/68;C07K16/08

优先权：

专利状态码：有效-授权

法律状态：2024.03.12#授权;2022.03.15#实质审查的生效;2022.02.25#公开

摘要：本发明公开了一种用于检测克氏原螯虾白斑综合征病毒WSSV的金纳米探针及其制备方法和应用。一种用于检测白斑综合征病毒的金纳米探针的制备方法，由抗WSSVVP664多克隆抗体与表面修饰proteinA的金纳米颗粒共同孵育，然后纯化制备得到所述的金纳米探针。一种非疾病诊断目的的检测对虾白斑综合征病毒的方法，包含以下步骤：1利用本发明所述的金纳米探针标记WSSV；2暗场显微镜观察样品。本发明建立的金纳米探针结合暗场显微镜检测体系操作简单、检测快速、对设备要求低且不需要专业人员操作，可用于克氏原螯虾等虾类养殖关键环节进行现场白斑综合征病毒快速定量定性检测。

主权项：1.一种用于检测克氏原螯虾白斑综合征病毒的金纳米探针的制备方法，其特征在于由抗WSSVVP664多克隆抗体与表面修饰proteinA的金纳米颗粒共同孵育，然后纯化制备得到所述的金纳米探针;所述的抗WSSVVP664多克隆抗体通过以下方法制备得到：（1）从GenBank中获取编码WSSV核衣壳蛋白VP664的基因序列，序列号为：AF440570.1，设计引物VP664FVP664R扩增目的基因，以提取的WSSVDNA为模板，进行PCR扩增，回收和纯化PCR产物；将上步回收纯化的目的基因和质粒pET-28a+双酶切，纯化后进行连接，连接产物转化到DH5α感受态细胞中，利用PCR鉴定阳性菌，并将阳性菌进行测序；VP664FVP664R的引物序列如SEQIDNo.1SEQIDNo.2所示；（2）提取上一步的测序鉴定的阳性菌的质粒，将鉴定正确的质粒转化至BL21感受态细胞中进行诱导表达；（3）超声破菌得到粗蛋白溶液，采用Ni-NTAResin亲和层析柱纯化在包涵体中表达的、带His标签的重组蛋白；（4）将纯化的重组蛋白与等体积的弗氏完全佐剂混合乳化后皮下多点注射免疫青壮年新西兰白兔，加免完7天后采集全血测定效价，取免疫兔子的血清进行抗体纯化得抗WSSVVP664多克隆抗体。

全文数据：

权利要求：

百度查询： 江苏省淡水水产研究所 一种用于检测克氏原螯虾白斑综合征病毒的金纳米探针及其制备方法和应用

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